国家自然科学基金(30672108)
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 相关作者：陈方张胜利陈柏松吴少峰潘骏更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属新华医院上海交通大学上海市儿童医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 内皮祖细胞复合膀胱无细胞基质的生物相容性被引量：1
- 2009年
- 目的应用内皮祖细胞复合膀胱无细胞基质构建组织工程学膀胱。方法分离培养猪外周血内皮祖细胞，制备膀胱无细胞基质。体外检测细胞与膀胱无细胞基质的生物相容性。观察细胞与膀胱无细胞基质的体外复合。结果成功分离培养猪外周血内皮祖细胞，其表面标志分别为CD13325．1％、CD34 55．9％、flk-197．7％、CD31 82．0％、CD144 95．4％。成功制备膀胱无细胞基质。生物相容性检测证明膀胱无细胞基质对细胞无明显的细胞毒性，细胞活力保持在90％以上。体外观察细胞可以复合于无细胞基质，并在其上增殖、生长。结论可以应用内皮祖细胞作为种子细胞，膀胱无细胞基质作为支架材料构建组织工程学膀胱，可能成为提高体内组织工程膀胱血管化的一种新方法。
- 陈柏松张胜利耿红全潘骏吴少峰陈方
- 关键词：内皮祖细胞膀胱生物相容性血管化
- 胚胎干细胞和间充质干细胞分化为内皮细胞的研究现状被引量：2
- 2009年
- 内皮细胞对于维持血管正常功能具有重要作用，然而其来源有限。因此，寻找内皮细胞的其他丰富来源一直为研究者们所关注。干细胞在体外培养具有能大量增殖、并在合适的条件下定向分化的特性。近年来，各种类型的干细胞诱导分化为内皮细胞的研究不断深入并各有优缺点。对胚胎干细胞和各种来源的间充质干细胞诱导分化为内皮细胞的研究现状作一综述。
- 吴齐全张胜利周君梅陈方
- 关键词：干细胞内皮细胞分化
- 血管内皮生长因子表达载体的构建及在内皮祖细胞中的表达
- 2008年
- 背景:血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)具有很强的促进血管生成作用,但构建其真核表达质粒是否可转染血管内皮祖细胞并完整表达还不清楚。目的:构建VEGF表达载体,并观察其在内皮祖细胞中的表达情况。设计、时间及地点:观察性试验,于2007-12/2008-03在上海交通大学医学院附属新华医院科研中心实验室完成。材料:质粒PDC315-VEGF165自备,质粒pIRES2-EGFP由美国国立卫生研究院Stanko Stojilkovic教授惠赠。方法:运用DNA重组技术构建VEGF表达载体pIRES2-EGFP-VEGF,应用脂质体包裹的方法将载体转染猪外周血血管内皮祖细胞。主要观察指标:采用荧光显微镜观察VEGF在内皮祖细胞内的表达,反转录-聚合酶链反应法检测VEGFmRNA表达水平,ELISA检测VEGF165蛋白表达情况。结果:成功构建VEGF真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF。转染重组质粒pIRES2-EGFP-VEGF后,在内皮祖细胞内有VEGF的表达,VEGFmRNA和VEGF165蛋白表达水平均明显增加。结论:VEGF表达载体转染猪外周血血管内皮祖细胞后能有效增加VEGF基因的表达,能够获得较高水平的VEGF蛋白。
- 陈柏松张胜利耿红全潘骏吴少峰陈方
- 关键词：血管内皮生长因子真核表达载体内皮祖细胞基因表达
- 羊水来源OCT-4阳性胎儿间充质干细胞向血管内皮细胞的体外诱导分化
- 2009年
- 背景:已证实将血管内皮细胞与具有良好组织相容性的生物材料复合,并移入体内后可增殖分化形成血管。但由于获取内皮细胞时创伤较大,所以细胞来源是一个急需解决的问题。目的:探讨羊水来源OCT-4阳性胎儿间充质干细胞分化为内皮细胞的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/2009-03在上海交通大学医学院附属新华医院科研中心完成。材料:羊水标本来自孕16～22周行产前诊断的孕妇,在超声引导下行羊膜腔穿刺取得60mL羊水。方法:采用免疫磁珠细胞分选法去除人羊水细胞中CD44和SSEA-4阳性细胞,使OCT-4阳性胎儿间充质干细胞间接得到分离,并在体外进行培养扩增。取第3代羊水来源OCT-4阳性胎儿间充质干细胞,诱导组换用含体积分数为15%胎牛血清的内皮细胞生长培养液,对照组持续用原培养液培养细胞。主要观察指标:倒置相差显微镜观察诱导过程中细胞形态变化,采用间接细胞免疫荧光法、内皮细胞吞噬DiI-acLDL法检测诱导效果。结果:诱导30d后,镜下观察细胞集落相互连接,呈典型的"鹅卵石"样外观,经诱导的羊水来源OCT-4阳性胎儿间充质干细胞可在体外保持良好的增殖活力。诱导后的贴壁细胞eNOS和vWF呈阳性表达,细胞胞浆内可见发出红色荧光的DiI阳性细胞;对照组细胞免疫荧光染色eNOS和vWF均呈阴性,且无红色荧光细胞出现。结论:羊水来源的OCT-4阳性的胎儿间充质干细胞在适当的体外微环境下,可诱导分化为血管内皮细胞。
- 吴齐全张胜利马晓荣周君梅陈方
- 关键词：羊水OCT-4内皮分化
- 血管再生与组织工程被引量：4
- 2007年
- 目的:综合分析血管再生过程中各种影响因素的作用,将血管再生在组织工程中的应用予以综述。资料来源:应用计算机检索Medline,Pubmed,Elsevier,Ovid等数据库中1995-01/2007-03有关血管再生与组织工程的文章,检索词为"tissueengineering,neovascularization",限定语言种类为英文。资料选择:对资料进行初审,选择与血管再生及组织工程有关的文章,筛除与以上要求无明显关系的文章以及重复性研究。资料提炼:共收集到相关的研究文献115篇,排除陈旧或重复的研究,选择其中的50篇纳入研究。资料综合:血管再生是一个复杂的过程,包括血管内皮细胞及其前体细胞对各种血管生长因子的反应,以及新生血管的形成和塑形过程。目前主要有3种途径促进组织工程构建物中血管的再生:应用血管形成前体细胞即血管内皮祖细胞进行局部或全身治疗;应用复合细胞因子的生物材料;基因治疗。结论:血管再生过程中受多种因素的影响,在组织工程构建物中成功实现血管再生,将极大的促进组织工程学的发展。
- 陈柏松陈方
- 关键词：血管再生内皮祖细胞血管生长因子
- 猪外周血内皮祖细胞的分离培养及生物学特性
- 2008年
- 目的从小型猪外周血中分离、培养内皮祖细胞(EPCs),并进行相关鉴定,分析其生物学特性。方法采用密度梯度离心法获得小型猪外周血单个核细胞并进行体外传代培养,分别采用倒置相差显微镜观察、免疫荧光染色、流式细胞仪分析及Matrigel实验和DiI-acLDL摄取实验,对其细胞表型及功能进行相关鉴定。结果外周血单个核细胞在培养过程中出现梭形贴壁和铺路石样形态;培养第14天,约80%的细胞DiI-acLDL吞噬实验阳性,且CD133、CD34、flk-1、CD31、CD144的表达阳性率分别达到25.1%、55.9%、97.7%、82.0%和95.4%;细胞培养于凝固的Matrigel表面7 d后,形成特征性的网格状结构。结论该实验成功从小型猪外周血单个核细胞中分离培养出EPCs,在其体外扩增诱导的过程中,表达EPCs和成熟内皮细胞的特征性标志。
- 陈柏松张胜利耿红全潘骏吴少峰陈方
- 关键词：细胞培养外周血内皮祖细胞血管新生
