国家自然科学基金(31260065)
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
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- 相关机构：宁夏大学教育部南昌大学更多>>
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- 枸杞蔗糖磷酸合成酶基因的克隆及组织表达分析被引量：9
- 2013年
- 利用RT-PCR及RACE技术,从药用植物枸杞中克隆了1个编码蔗糖磷酸合成酶（SPS）基因的全长cDNA,命名为LbSPS（GenBank登录号KC834608）。序列分析表明：LbSPS基因长3 677 bp,开放阅读框为3 165 bp,编码1 033个氨基酸,分子量为118.457 5 kD,理论等电点6.05。系统进化分析显示,LbSPS编码的氨基酸序列与甜瓜、马铃薯、番茄等蔗糖磷酸合成酶基因编码氨基酸序列一致性为66%～98%。qRT-PCR分析显示,LbSPS基因在枸杞花中表达量最高,叶中表达水平较低。该研究为进一步了解LbSPS在枸杞生长发育、逆境胁迫等过程中的生物学功能奠定了基础。
- 王丽娟丁向真王彦才李翔
- 关键词：枸杞蔗糖磷酸合成酶基因克隆
- 枸杞WRKY基因片段克隆与表达分析
- 2013年
- 以枸杞为试材,根据已知物种WRKY转录因子保守片段设计引物,采用RT-PCR方法,克隆枸杞WRKY基因片段,并对所得片段进行序列分析,同时利用Real-time PCR鉴定该基因在枸杞各器官的表达,以了解WRKY转录因子在枸杞中的功能。结果表明:从枸杞果实中获得了467bp的cDNA片段,命名为LbWRKY(GenBank:KF181204)。序列分析表明,该序列含有WRKYGQK保守结构域,与番茄WRKY序列相似性是95%,与烟草wizz相似性是91%,表明已经成功克隆了枸杞WRKY基因片段。Real-time PCR表达分析显示,LbWRKY基因在枸杞果实中表达量最高,在叶中表达水平较低,在根中未检测到其表达。
- 王丽娟高蔚锋管翠萍王彦才
- 关键词：枸杞WRKY转录因子克隆
- 枸杞酸性转化酶基因的克隆及组织表达分析被引量：6
- 2014年
- 以“宁杞1号”枸杞为试材，通过RT-PCR及RACE技术进行枸杞酸性转化酶基因的克隆及组织表达分析，并运用MEGA5．0软件对植物转化酶基因进行了系统树分析。结果表明：扩增获得2193bp的枸杞酸性转化酶基因，命名为LbSAJ（GenBank：KC776575），该基因推导氨基酸序列与马铃薯、番茄、梨等酸性转化酶基因氨基酸序列同源性为68％～100％；LbSAJ编码的蛋白质属于液泡酸性转化酶；Real—timePCR表达分析显示，L6SA，基因在枸杞花中表达量最高，在根中表达水平较低。
- 王丽娟赵辉王彦才丁向真马建明
- 关键词：枸杞酸性转化酶基因克隆
- 枸杞LbMYB103基因克隆及转化拟南芥的研究
- 2015年
- 以枸杞品种‘宁杞1号’花药为材料,采用RT-PCR技术,分离了R2R3类MYB基因LbMYB103包含完整开放阅读框(ORF)的cDNA片段,碱基序列与已知基因HQ415755完全一致。运用Gateway技术构建LbMYB103基因植物过表达载体pMDC83-LbMYB103,利用基因枪法将融合有绿色荧光蛋白(GFP)的过表达载体转入洋葱表皮细胞,将LbMYB103基因定位在细胞核。实时荧光定量PCR分析发现,LbMYB103基因在花药中优势表达,果实中表达量较低,在根、茎和叶中均未检测到其转录本,推测LbMYB103基因可能在花药发育过程中起重要作用。通过根癌农杆菌介导法将pMDC83-LbMYB103转入拟南芥(Col-0),经筛选获得T1代抗性再生植株52棵,PCR鉴定有41棵阳性植株,收获T1代种子,经抗性筛选获得T2代抗性植株29棵,PCR鉴定有23棵阳性植株。实时荧光定量PCR分析表明,LbMYB103在拟南芥植株的基因组中正常表达。表型观察发现T1和T2代拟南芥花药发育异常,花发育迟缓,果荚短小无种子,进一步表明LbMYB103可能与植物的育性有关。该结果为进一步开展枸杞遗传转化,深入研究LbMYB103基因在枸杞花药发育过程中可能发挥的调控功能奠定了基础。
- 郑蕊岳思君王丽娟钱贻崧代金霞
- 关键词：枸杞拟南芥
- 枸杞蔗糖代谢关键酶基因的鉴定、表达特性及功能分析
- 宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）为茄科枸杞属多年生木本植物，是重要的药食同源植物资源。枸杞果实的药用价值、色泽、风味口感等品质受果实中糖的含量、种类影响，枸杞果实品质形成的关键是糖积累，而蔗糖代谢又是糖积...
- 王婷婷
- 关键词：枸杞蔗糖代谢基因表达酶活性变化
- 文献传递
- 枸杞中性转化酶NI基因的克隆及组织表达分析被引量：2
- 2020年
- 中性转化酶(NI)是蔗糖代谢的关键酶之一,在植物的生长发育、物质代谢等生理活动中发挥重要的作用。以宁夏枸杞果实为材料,利用RACE技术克隆枸杞NI基因,Lb NI(GenBank登录号为KR026955)基因开放阅读框1653 bp,编码545个氨基酸。Lb NI蛋白二级结构预测发现不规则卷曲(Random coil)结构所占39.63%;α螺旋(Alpha helix)次之,占36.51%;延伸链结构(Extended strand)18.53%;β转角(Beta turn)最少,仅5.32%。生物信息学分析显示Lb NI蛋白含有糖苷酶100超家族保守结构域,与番茄、烟草等NI蛋白相似度较高,无酸性转化酶保守结构域NDPNG/A、FRDP和WECP。QPCR结果显示,Lb NI在枸杞不同的器官中表达存在差异,在叶中的表达量达到最高值,Lb NI在果实的不同组织中的表达模式为:果皮>种子>果肉,表明中性转化酶参与枸杞多种发育过程。在枸杞果实形成的每一阶段Lb NI都有表达,果实发育初期(前15 d)Lb NI的表达维持在较低水平,从第22天开始表达量呈现逐步升高的趋势,至第29天增加趋势更显著,在成熟期达到峰值,酶活性的变化与基因表达模式相吻合,说明枸杞中性转化酶基因Lb NI表达不存在二级调控机制,其转录水平的调控是枸杞果实品质调节的重要环节之一。
- 王婷婷赵紫涵张雅彬徐惠娟杨亚珺石晶郑蕊陈任王丽娟
- 关键词：枸杞果实发育
- 枸杞WRKY2基因的克隆及组织表达分析被引量：5
- 2018年
- WRKY是调控果实发育的一类重要转录因子,在植物的生长发育调节、物质代谢调节等生理活动中发挥重要的作用。以宁夏枸杞果实为材料,利用RACE技术克隆枸杞WRKY基因,采用DNAMAN软件分析核酸和氨基酸序列,构建进化树;通过BLASTn和BLASTp进行相似性分析;采用ExPaSy的SOPMA和Phyre 2软件进行蛋白质二级结构预测与3D结构建模;利用qPCR方法检测Lb WRKY2在果实发育不同时期、不同器官及不同组织的表达特性。结果显示：Lb WRKY2基因（GenBank登录号为KU955318）开放阅读框1 055 bp,编码335个氨基酸。Lb WRKY2蛋白二级结构预测发现不规则卷曲（random coil）结构所占比例最大,为43.28%;α螺旋（alpha helix）次之,比例为32.24%;延伸链结构（extended strand） 19.2%;β-转角（beta turn）最少,仅为5.28%。生物信息学分析显示Lb WRKY2蛋白具有70个氨基酸残基组成的信号肽,与烟草（Nicotiana sylvestris XP 009798860.1）相似度74%、马铃薯（Solanum tuberosum XP 006339686.1）相似度74%、芝麻（Sesamum indicum XP 011093555.1）相似度48%。Real time QPCR结果显示,Lb WRKY2在枸杞不同的器官中,表达存在差异,在花中的表达量达到最高值,且枸杞果实形成过程的每一阶段Lb WRKY2都有表达,在果实发育第四阶段表达量最高;Lb WRKY2在果实的不同组织中的表达量趋势为：果皮〉种子〉果肉,以上结果表明枸杞Lb WRKY2调控枸杞果实生长发育。
- 徐惠娟杨亚珺杨亚珺郑蕊石晶高楚郑蕊王丽娟
- 关键词：枸杞WRKY果实发育
