转基因生物新品种培育专项(2008ZX08008-003-01)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 相关作者：任立坤王红娜杨少华刘月琴张英杰更多>>
- 相关机构：河北农业大学西北农林科技大学南京农业大学更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项“十一五”国家科技支撑计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 不同绵羊群体BMP15基因多态性检测及序列分析被引量：1
- 2012年
- 为了检测在小尾寒羊、无角陶赛特羊及陶×寒F1、F2代中骨形态发生蛋白15(BMP15)基因的单核苷酸多态性,试验采用PCR-RFLP、PCR-SSCP方法进行检测。结果表明:在小尾寒羊、无角陶赛特、陶×寒F1和F2代群体中均未检测到BMP15基因,编码序列第718位碱基处发生了FecXG(B2)突变,与贝尔克莱绵羊和剑桥绵羊相同,说明BMP15 B2突变在这4个绵羊群体中的自然发生率非常低。
- 任立坤刘月琴张英杰杨少华王红娜董李学
- 关键词：候选基因法PCR-SSCPPCR-RFLP
- 胚胎移植受体山羊同期发情方案的研究被引量：2
- 2011年
- 对山羊进行3种同期发情处理，处理Ⅰ为CIDRS＋PMSG（100U）＋PG（0．1mg），处理Ⅱ为CIDRS＋PMSG（200U）＋PG（0．1mg），处理Ⅲ为PG（0．1mg）。结果发现，撤栓后0—24h处理Ⅰ的发情率（27．76±0．62）％与处理Ⅱ的发情率（35．00±5．00）％差异不显著（P〉0．05），但均显著高于处理Ⅲ（3．62±0．12）％（P〈0．05）；撤栓后24—48h和48～72h处理Ⅰ（35．31±1．40）％和（5．86±0．73）％、处理Ⅱ（56．67±3．33）％和0％和处理Ⅲ（18．07±1．94）％和（14．45±1．94）％的发情率之间均差异显著（P〈O．05）；在撤栓后0～72h，处理I（68．05±1．66）％和处理Ⅱ（91．67±8．33％）的发情率均显著高于处理Ⅲ（36．14±3．88）％P〈O．05，但是处理Ⅰ、Ⅱ之间显著不差异（P〉0．05）。另外在手术中观察山羊卵巢发现，处理Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ有较好黄体的山羊比率分别为（52．15±1．42）％、（46．67±3．33）％和（62．88±2．43）％，处理Ⅰ和Ⅲ高于处理Ⅱ，并且处理Ⅱ和处理Ⅲ之间差异显著（P〈0．05）。试验结果表明，采用2次优化PG法既可提高发情率，又可使受体羊黄体率达到较好水平。
- 周峥嵘万永杰王金刚黄荣贾若欣王锋
- 关键词：同期发情PMSGPG胚胎移植
- 不同绵羊群体BMP4基因多态性与产羔数关系分析被引量：2
- 2012年
- 以BMP4基因为候选基因,采用PCR-SSCP方法,分析了小尾寒羊和无角陶赛特及其杂交F1代、F2代的BMP4基因的不同基因型频率,并对该位点不同基因型与产羔数之间的关系进行了分析。结果显示:小尾寒羊BB、B+、++基因型频率分别是1.0%、29.7%、69.2%;无角陶赛特BB、B+、++型频率分别为0、80.8%、19.2%;陶寒F1代BB、B+、++基因型频率分别为5.3%、39.4%、55.3%;陶寒F2代BB、B+、++型基因型频率分别为0、5.0%、95.0%。小尾寒羊的基因型++、B+、BB平均产羔数分别为(1.00±0.00)、(1.67±0.11)、(2.40±0.13),经χ2检验,差异极显著(P<0.01);陶寒F1代的基因型++、B+、BB平均产羔数分别为(2.00±0.00)、(2.45±0.53)、(2.00±0.00),经χ2检验,++、BB组与B+组的平均产羔数间的差异极显著(P<0.01);B基因不能提高无角陶塞特母羊产羔数。
- 任立坤刘月琴张英杰王红娜杨少华董李学
- 关键词：小尾寒羊无角陶赛特产羔数
- 小尾寒羊、无角道赛特及其杂交后代BMPR-IB基因多态性研究被引量：2
- 2012年
- 为了检测骨骼形态发生蛋白IB型受体(BMPR-IB)基因在小尾寒羊母羊、无角道赛特公羊、道×寒F1和F2代杂交公羊及道×寒F2横交固定所产种公羊中的多态性,分析小尾寒羊基因型与产羔数的相关性,试验采用PCR-RFLP法对BMPR-IB基因进行分型。结果表明:在无角道赛特公羊中只有1种基因型,即野生型(++);在小尾寒羊母羊中检测到2种基因型(BB和B+),基因型频率分别为0.35,0.65;在道×寒F1和F2代杂交公羊中检测到2种基因型(B+和++),F1代基因型频率分别为0.75,0.25,F2代基因型频率分别为0.30,0.70。小尾寒羊的2种基因型产羔数差异极显著(P<0.01),BMPR-IB基因的遗传方式符合孟德尔遗传定律。
- 王红娜张英杰刘月琴任立坤杨少华
- 关键词：多态性分析产羔数
- 靶向绵羊MSTN基因的锌指核酸酶腺病毒表达载体的构建及活性验证被引量：5
- 2012年
- 旨在构建并包装打靶绵羊MSTN基因的位点特异性锌指核酸酶腺病毒表达载体,以借助腺病毒的高转染效率和非整合性以及锌指核酸酶的高效性和特异性实现对绵羊MSTN基因的敲除。本研究利用PCR扩增T2A序列和锌指核酸酶异源二聚体序列,测序鉴定后依次克隆至pAdTrack-CMV,得到pAdTrack-ZFNL-T2A-ZFNR穿梭载体,将之与腺病毒骨架载体pAdEasy-1共转染至BJ5183菌株进行同源重组,以构建pAdEasy-ZFNL-T2A-ZFNR表达载体。然后用上述表达载体转染HEK293细胞进行重组腺病毒的包装,将PCR鉴定阳性的病毒进行扩增并测定病毒滴度。侵染绵羊胎儿成纤维细胞检测重组腺病毒对靶细胞的侵染能力,并用Western blot方法检测绵羊胎儿成纤维细胞中ZFN的表达,进而在细胞水平验证ZFN的活性。结果,包装得到的锌指核酸酶重组腺病毒能够高效侵染绵羊胎儿成纤维细胞并表达ZFN,腺病毒介导的ZFN可识别并切割绵羊MSTN基因。本研究成功获得靶向识别并切割绵羊MSTN基因的锌指核酸酶重组腺病毒。
- 张存芳王令任刚张婷婷王瑞严国勇张智英
- 关键词：锌指核酸酶MSTN基因腺病毒基因敲除
