国家自然科学基金(31260070)
- 作品数：7 被引量：32H指数：3
- 相关作者：葛锋刘迪秋陈朝银杜亚茜虞泓更多>>
- 相关机构：昆明理工大学云南大学滇西科技师范学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省重大科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 植物三萜皂苷生物合成中关键后修饰酶研究进展被引量：6
- 2014年
- 三萜皂苷是由三萜苷元、糖基、糖醛酸等组成的C30萜类化合物,是许多药用植物的主要活性成分,具有广泛的药理作用。三萜皂苷的生物合成包括前体和三萜皂苷骨架的形成以及调控皂苷结构多样性的后修饰。三萜皂苷的后修饰包括三萜骨架的氧化/羟基化和糖基化,分别由不同超基因家族编码的细胞色素P450单加氧酶和糖基转移酶进行催化。三萜皂苷通过后修饰最终可形成多种单体皂苷。目前,已在少数植物中识别和确认了个别与三萜皂苷生物合成相关的关键后修饰酶,发现了部分很可能参与后修饰过程的候选基因。该文就近年来国内外有关三萜皂苷生物合成途径关键后修饰酶的研究进行综述,为进一步开展相关研究和对合成精细途径的解析提供参考。
- 黄壮嘉刘迪秋葛锋陈朝银
- 关键词：三萜皂苷糖基转移酶
- 三七SE基因启动子的克隆及序列分析被引量：3
- 2014年
- 鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因是三七皂苷生物合成途径中的关键基因。本文采用染色体步移(genomic walking)技术,克隆出三七SE基因上游1872 bp的启动子片段。生物信息学分析表明,该启动子除了含有基本的TATA-box和CAAT-box元件外,还包含多个与细胞分裂素响应、抗病以及糖类和储藏蛋白合成等相关的作用元件。
- 卢荣江刘迪秋葛锋陈朝银
- 关键词：启动子
- 人工培养的兰坪虫草子实体中核苷类成分研究被引量：12
- 2016年
- 兰坪虫草(Ophiocordyceps lanpingensis)产于我国滇西北地区,是一种寄生在钩蝠蛾幼虫上的虫生真菌。本文以四种不同培养基培养的兰坪虫草子实体为原料,采用高效液相色谱法(HPLC)同时检测10种核苷类成分(尿嘧啶、尿苷、2'-脱氧尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、胸腺、腺苷、2'-脱氧腺苷、虫草素),并将其与野生冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)、野生兰坪虫草进行对比分析,初步评估人工培养兰坪虫草子实体的质量。结果表明,以大米和蚕蛹粉为主要原料的培养基所培养的兰坪虫草子实体生长时间平均为40 d,周期短于其他三种培养方式;且其腺苷、总核苷含量分别为2744μg/g和8015μg/g,明显高于野生冬虫夏草、野生兰坪虫草,有较好的质量水平。因此,人工培养的兰坪虫草子实体具有重要的研究价值和应用潜力。
- 杜亚茜虞泓葛锋张艳艳曾文波杨延
- 关键词：子实体核苷
- 三七PnbHLH转录因子过表达与PnCAS RNAi协同作用对皂苷合成的影响被引量：2
- 2021年
- 该研究克隆了三七转录因子基因PnbHLH,其开放阅读框长为966 bp,编码321个氨基酸。构建了三七转录因子PnbHLH过表达载体,成功实现了转录因子PnbHLH基因过表达与植物甾醇合成支路关键酶基因PnCAS RNAi在三七细胞中的整合,探讨过表达PnbHLH基因与PnCAS RNAi协同作用对三七皂苷生物合成的调控作用。结果表明,转录因子PnbHLH能够与三七皂苷生物合成途径关键酶基因PnDS,PnSS和PnSE的启动子互作,进而通过调控关键酶基因的表达,间接影响皂苷的生物合成。进一步研究证明,过表达PnbHLH与PnCAS RNAi协同作用是调控皂苷生物合成更加高效的手段。与野生型和PnCAS RNAi三七细胞相比,过表达PnbHLH和PnCAS RNAi细胞系中,三七总皂苷和主要单体皂苷(Rd,Rb_(1),Re,Rg_(1),R_(1))的含量均有不同程度提高,说明皂苷生物合成的正向调节和反向调节2种方式产生了叠加效应。该研究既发挥了转录因子的“多点调控”优势,又整合了皂苷副产物支路的弱化调节,探索出针对三七皂苷生物合成更加合理而高效的调控策略。
- 姜利于怡琳江敏崔秀明刘迪秋葛锋
- 关键词：皂苷人参属RNA干扰
- 响应面分析法优化超声提取兰坪被毛孢多糖和D-甘露醇被引量：5
- 2015年
- 以兰坪虫草无性型(兰坪被毛孢)固体发酵产物为材料,以水为提取溶剂,在常温条件下利用响应面分析法优化虫草多糖和D-甘露醇的超声提取综合工艺。在超声常温水提的单因素实验的基础上,运用响应面法进一步考察液固比、超声时间、超声功率对虫草多糖和D-甘露醇综合提取率的影响,以优化提取工艺。实验得到较优综合提取工艺条件为:液固比43∶1m L/g,超声时间为50min,超声功率为56W。在该工艺条件下虫草多糖提取率为23.06%,D-甘露醇提取率为2.30%。
- 杜亚茜虞泓葛锋刘迪秋陈朝银
- 关键词：响应面法超声提取
- RNAi介导珠子参PjCAS基因沉默对皂苷合成的影响被引量：2
- 2020年
- 该研究利用Gateway技术构建珠子参环阿屯醇合成酶基因(Panax japonicus cycloartenol synthase,PjCAS)的RNAi表达载体,利用农杆菌介导转化在珠子参细胞中成功实现了PjCAS的RNA干扰;采用实时荧光定量PCR分析珠子参皂苷生物合成途径中关键酶基因的表达情况,同时检测转基因细胞中皂苷和植物甾醇含量的变化,探讨PjCAS基因对珠子参皂苷合成的调控作用。结果表明:(1)成功获得PjCAS基因的RNAi片段,并成功构建了PjCAS基因RNAi载体pHellsgate-PjCAS。(2)经农杆菌遗传转化,获得6株实现PjCAS基因RNA干扰的转基因阳性细胞系。(3)与普通细胞系相比,转基因细胞系中PjCAS基因的表达量大约下降了85%,同时与珠子参皂苷合成直接相关的关键酶基因PjDS、PjAS表达量最高分别上调了90%和150%。(4)转基因细胞系中6种单体皂苷的含量均显著高于对照组,其中达玛烷型单体皂苷Re、Rb1、Rd和齐墩果烷型单体皂苷R0、IV、IVa的平均含量比普通珠子参细胞系分别提高了28%、49%、40%、36%、59%、50%。说明珠子参皂苷含量的变化受PjCAS基因的间接调控。(5)6株转基因细胞系中植物甾醇含量较对照显著降低了53%~73%。研究发现,沉默PjCAS基因可促进珠子参皂苷合成的关键酶基因PjDS、PjAS显著上调表达,并提高转PjCAS基因细胞系中单体皂苷的含量,从而促进了珠子参皂苷合成量的显著增加,证明通过抑制植物甾醇合成通路关键基因PjCAS的表达可以有效降低植物甾醇合成支路的代谢通量,使更多的代谢流朝着珠子参皂苷合成方向流动,最终促进了珠子参皂苷的生物合成。
- 江敏姜森曲媛崔秀明刘迪秋葛锋
- 关键词：珠子参三萜皂苷RNA干扰
- 三七bHLH转录因子与CAS RNAi协同作用对皂苷合成的影响
- 三七[Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen]为人参属药用植物,具有悠久的药用历史。三七皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）是三七主要的活性成分,在防治心脑血管疾...
- 于怡琳
- 关键词：三七皂苷过表达RNA干扰
- 文献传递
- 三七鲨烯环氧酶基因(SE)启动子的瞬时表达分析被引量：2
- 2015年
- 采用PCR方法扩增鲨烯环氧酶(SE)基因启动子序列,研究SE基因在三七生物合成途径中的表达调控规律。为了确认启动子表达的最佳启动区域,构建SE启动子430、922、1 323和1 872 bp的5'端缺失片段,并将这些缺失片段分别与葡萄糖苷酸酶(GUS)基因融合,构建植物表达载体。采用农杆菌介导法转化烟草,在烟草叶片中进行瞬时表达分析。组织化学染色和GUS荧光定量分析结果显示,4个不同长度片段的启动子均有启动活性,且随着缺失长度增加启动活性呈增加趋势。
- 卢荣江刘迪秋葛锋陈朝银
- 关键词：启动子
