教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-08-0534)
- 作品数：9 被引量：48H指数：5
- 相关作者：闫巧娟江正强杨绍青朱利芬周鹏更多>>
- 相关机构：中国农业大学北京航空航天大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生化学工程更多>>
- 凝结芽孢杆菌产β-半乳糖苷酶条件的优化被引量：1
- 2010年
- 从土壤中筛选得到1株高产β-半乳糖苷酶的凝结芽孢杆菌,研究该菌产β-半乳糖苷酶的发酵条件。结果表明:产酶适宜的培养基配方为蔗糖10 g/L,麦芽糖5 g/L,可溶性淀粉5 g/L,酵母提取物6.7 g/L,胰蛋白胨13.3 g/L,KCl 1.5 g/L;产酶的最适发酵温度为45℃。培养48 h总酶活力达到7.1 U/mL,60 h胞外酶活力最高为3.0 U/mL。胞外酶的最适pH为6.0,最适温度65℃。该酶能够完全水解乳糖,可适用于无乳糖乳制品的生产。
- 宋春雷闫巧娟江正强李一男唐荦
- 关键词：凝结芽孢杆菌Β-半乳糖苷酶胞外酶发酵
- 蒙古黄芪凝集素对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡被引量：14
- 2009年
- 目的研究蒙古黄芪凝集素(AMML)对慢性髓系白血病细胞系K562的生长抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响。方法用MTT法测定AMML对K562细胞的生长抑制作用;荧光染色和流式细胞术分析检测AMML诱导K562细胞周期变化和凋亡的影响。结果AMML对K562细胞的生长增殖具有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖性。60mg.L-1的AMML处理K562细胞72h后其生长抑制率高达89%。AMML处理的K562细胞呈现典型的细胞凋亡形态改变,如胞核破裂、染色质固缩。流式细胞仪(FCM)分析结果说明AMML可以引起K562细胞S期阻滞,并诱导K562细胞凋亡。结论AMML通过S期阻滞抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,AMML在抗肿瘤新药开发中具有潜在的应用价值。
- 李艳霞闫巧娟孙艳江正强朱利芬
- 关键词：K562细胞抗肿瘤细胞凋亡
- 链霉菌Z18中一种木聚糖酶(XynA)的纯化和性质
- 2009年
- 研究了链霉菌Z18中一种低分子质量木聚糖酶（XynA）的纯化和性质。粗酶液经过20％-50％硫酸铵沉淀和S-300凝胶过滤两步纯化得到电泳纯的XynA，分子质量为22ku，最适pH值为7．0，pH值稳定范围在5．0-8．0之间；最适温度为60℃，稳定温度为50℃。XynA对不同木聚糖表现出较高的活力，对其它所试底物无活性。XynA水解桦木木聚糖的主要产物为木二糖和木三糖，无木糖生成，说明它适合应用于低聚木糖的生产。
- 闫巧娟翟倩江正强
- 关键词：链霉菌木聚糖酶纯化低聚木糖
- 嗜热枯草芽孢杆菌普鲁兰酶基因的表达与重组酶的性质被引量：5
- 2011年
- 克隆嗜热枯草芽孢杆菌WY-34普鲁兰酶基因并在大肠杆菌中进行表达,对重组酶进行纯化和酶学性质研究,根据枯草芽孢杆菌的普鲁兰酶蛋白序列,设计PCR引物对WY-34的普鲁兰酶基因进行克隆及异源表达。对表达蛋白的最适pH、pH稳定性及最适温度、温度稳定性等特性进行研究,并测定重组普鲁兰酶的底物特异性。将普鲁兰酶基因pluA克隆及分析序列后,发现基因长度为2.2 kb,编码718个氨基酸,在大肠杆菌中异源表达。通过Ni-IDA亲和层析一步纯化得到比活力为93.2 U/mg的纯酶,SDS-PAGE和凝胶层析测定的分子量分别为76.2 kD和74.3 kD。酶学性质研究表明,该酶的最适温度为40°C,在温度不高于45°C条件下稳定;最适pH为6.0,同一温度下pH 6.0-9.0范围内处理30 min可以保持80%以上的酶活力,此酶对普鲁兰糖有很强的底物特异性。此重组普鲁兰酶的酶学性质表明此酶具有一定的工业化应用价值。
- 韩鹏周鹏闫巧娟杨绍青江正强
- 关键词：枯草芽孢杆菌普鲁兰酶酶学性质基因表达
- 嗜热棉毛菌固体发酵产木聚糖酶条件的优化被引量：4
- 2012年
- 通过单因素实验优化了嗜热棉毛菌CAU44利用农业废弃物固体发酵产木聚糖酶的发酵条件。结果表明,发酵产酶的最佳碳源为玉米芯和麦麸以4∶6混合的复合碳源,最佳氮源为(NH4)2SO4,最佳水分含量为80%,培养基最佳初始pH为4.0,最佳表面活性剂及添加量为0.5%的Tween-60。在优化后的发酵条件下50℃培养7d,嗜热棉毛菌CAU44产木聚糖酶的酶活力最高,达到20343U/g干基碳源,为目前国内报道的最高值。因此,嗜热棉毛菌CAU44在利用农业废弃物固体发酵产木聚糖酶方面有很大的应用前景。
- 范光森杨绍青闫巧娟严烨江正强
- 关键词：木聚糖酶固体发酵农业废弃物
- 重组枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的纯化和性质研究被引量：7
- 2012年
- 研究嗜热枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组酶的纯化和性质。该基因序列全长723bp,编码240个氨基酸。根据基因同源性分析,该壳聚糖酶与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168的壳聚糖酶前体基因的同源性最高,为98%。粗酶液经Ni-IDA亲和层析得到电泳级纯酶,比活力高达1 051.8U/mg。经测定,该酶反应最适温度为45℃,最适pH为6.0,在40℃和pH 4.5～8.0下稳定。该酶为内切壳聚糖酶,能够高效降解壳聚糖,生成一系列的壳寡糖,在壳寡糖的制备生产方面具有广阔的应用前景。
- 张舒平周鹏苏春元江正强闫巧娟
- 关键词：枯草芽孢杆菌壳聚糖酶纯化酶学性质
- 膜荚黄芪种子中2种几丁质酶的分离纯化及活性测定被引量：5
- 2009年
- 运用传统的层析技术对膜荚黄芪种子中两种几丁质酶进行分离纯化,并对分离纯化中各个步骤得到的蛋白进行了活性研究。结果表明:(1)粗提液的硫酸铵沉淀经再生几丁质亲和柱和凝胶过滤层析Sephadex G-75得到几丁质酶A。(2)粗提液的硫酸铵沉淀经离子交换色谱DE-52、CM、凝胶过滤层析Sephadex G-75得到几丁质酶B。(3)几丁质酶A、B的比活性分别为35.6 U/mg和4.1 U/mg。(4)从膜荚黄芪种子中分离纯化的几丁质酶A和B均为糖蛋白,含糖量分别为6.1%和5.8%。(5)SDS-PAGE显示,几丁质酶A、B的分子量分别为35.5 ku、39.6ku;凝胶过滤层析测定几丁质酶A、B的分子量分别为36.9 ku4、0.8 ku;表明几丁质酶A、B均为单亚基蛋白。
- 费凡闫巧娟江正强Kumar Narasimha
- 关键词：几丁质酶纯化
- 一种膜荚黄芪凝集素的分离纯化研究被引量：3
- 2010年
- 目的从膜荚黄芪根中分离纯化一种凝集素。方法通过硫酸铵分级沉淀和ConA-Sepharose4B亲和色谱从膜荚黄芪根浸提液中分离纯化一种凝集素。结果经过上述两步纯化得到电泳纯的凝集素,SDS-PAGE和Superdex75凝胶过滤色谱测定该凝集素的相对分子质量分别为3.15×104和3.35×104,糖蛋白染色显示其为糖蛋白,总糖的量为10.7%。结论从膜荚黄芪根中分离纯化得到一种凝集素,该蛋白为单亚基糖蛋白,具有对兔血红细胞的凝集活性,凝集活性的比活力为391.9U/mg。
- 朱利芬闫巧娟江正强Kumar Narasimha黄林华
- 关键词：膜荚黄芪凝集素纯化
- 定向进化提高嗜热拟青霉J18耐热β-1,3-1,4-葡聚糖酶在酸性条件下的催化能力被引量：9
- 2011年
- 应用定向进化技术提高了嗜热拟青霉Paecilomyces thermophila J18耐热β-1,3-1,4-葡聚糖酶(PtLic16A)在酸性条件下的催化能力。结合易错PCR和DNA改组的方法,构建了β-葡聚糖酶的突变体文库;利用刚果红染色法建立了阳性克隆的高通量筛选体系。筛选得到的突变酶PtLic16AM1的反应最适pH由7.0变化至5.5,且保持了原有的耐热性和比酶活。突变酶的DNA序列中有4个点位发生突变,引发了4处氨基酸替换,分别是T58S、Y110N、G195E和D221G。结构模拟结果显示,发生突变的4个氨基酸位点中,Y110N位置靠近酶活性中心,而T58S、G195E和D221G则离酶活性中心较远,其中T58S、G195E可能对酶最适pH的变化起到了关键作用。
- 李一男贾会勇闫巧娟江正强杨绍青
- 关键词：易错PCRDNA改组
