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国际科技合作与交流专项项目(S2012ZR0233)
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相关作者:
唐华
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相关机构:
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国际科技合作与交流专项项目
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2013
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西藏小型猪胰岛细胞体外分离和纯化方法
2013年
的确定成体西藏小型猪胰岛细胞体外分离、纯化的理想条件,为异种移植治疗糖尿病提供高质量的胰岛细胞。方法对比不同质量浓度的胶原酶(1mg/ml,2mg/ml,3mg/ml,4mg/m1)和同一质量浓度不同时间点(0min,15min,30min,45min,60min,75min,90min)分离获得胰岛细胞的数量和效果;使用Ficoll400密度梯度离心、淋巴分离液分离、离心和静置4种方法纯化胰岛细胞悬液,比较最终收集到的胰岛细胞数量和效果;用DTZ染色计算胰岛细胞的纯度;用AO/PI染色计算胰岛细胞存活率。结果确定了不同质量浓度的胶原酶获取胰岛细胞的最佳时间,胶原酶lmg/ml和2mg/ml组为45min,3mg/ml和4mg/ml组为30min,各组在最佳时间点获得胰岛细胞的数量最多的为1mg/ml组,胰岛细胞形态完整;4种纯化方法中,收集的胰岛细胞数量由多到少依次为静置组〉Ficoll400密度梯度离心组〉离心组〉淋巴分离液离心组。经AO/PI染色后检测胰岛细胞的存活率为95.00%以上。结论在组织块剪碎消化的情况下,胶原酶质量浓度lmg/ml、消化时间45min的分离条件可获得数量较多的胰岛细胞,Ficoll400密度梯度离心的纯化手段收集到的胰岛细胞效果最好。
戚文军
汪亦男
胡强
唐华
那顺巴雅尔
顾为望
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西藏小型猪
胰岛细胞
纯化
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