国家自然科学基金(90208026)
- 作品数：18 被引量：57H指数：5
- 相关作者：刘厚奇熊俊胡凯猛汤淑萍刘善荣更多>>
- 相关机构：第二军医大学中国人民解放军南京军区福州总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 多柔比星对肝癌细胞GATA4的表达及细胞凋亡的影响被引量：5
- 2008年
- 目的:通过观察多柔比星(别名阿霉素)对肝癌细胞GATA4表达和细胞凋亡的影响,探讨多柔比星抑制肝癌细胞增殖的可能机制。方法:检测不同p53状态肝癌细胞中GATA4的表达。以300 nmol/L多柔比星加入高表达GATA4的小鼠Hepa1-6肝癌细胞培养液中。碘化丙啶染色,以流式细胞术观察用药后不同时间点(0、6、12、18、24、30 h)凋亡细胞比例,MTT法观察细胞生长,半定量RT-PCR比较不同时间点GATA4、bax、bcl-XL、bcl-2 mRNA的表达,Western blot检测GATA4和细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果:不同p53状态肝癌细胞中均有GATA4的高表达。分别与0 h或6 h相比,多柔比星处理后12、18、243、0 h的肝癌细胞凋亡率显著增加(流式细胞术检测),且肝癌细胞增殖显著减少(MTT法)。0、6、12、18、24和30 h GATA4 mRNA和GATA4蛋白质的表达呈递减趋势,Bcl-XLmRNA、PCNA蛋白质和bcl-2 mRNA/bax mRNA比值在6 h后也相继递减。结论:GATA4和p53在肝癌细胞中的表达可能不相关。多柔比星可抑制GATA4的表达,而Bcl-XLmRNAb、cl-2 mRNA、bcl-2/bax和PCNA表达的减少,以及凋亡细胞的增多则相对滞后。多柔比星可能通过抑制GATA4的表达来抑制肝癌细胞增殖或诱导肝癌细胞凋亡。
- 任传路沈红石王静刘厚奇
- 关键词：多柔比星肝肿瘤细胞凋亡GATA4
- 胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究进展
- 2006年
- 杨君杰刘厚奇
- 关键词：原始生殖细胞胚胎干细胞雄性生殖细胞生殖干细胞体外诱导细胞群体
- hVEGF_(121)基因转染对人脐静脉内皮细胞生长的作用被引量：1
- 2004年
- 目的 :构建人血管内皮生长因子 (h VEGF) - 12 1的真核细胞复制表达质粒 ,将 h VEGF1 2 1 基因转染进人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cell,HUVEC) ,通过旁分泌作用来加快其生长速度。 方法 :采用 RT- PCR方法 ,从人胚胎成纤维细胞中克隆 h VEGF1 2 1 前体蛋白全长 c DNA,构建重组真核表达质粒 pc DNA3- h VEGF1 2 1 ,用 Fu GENE6介导转染入HU VEC。收集转染的 HU VEC培养上清 ,用 EL ISA法定量检测 h VEGF蛋白的表达情况 ;绘制细胞生长曲线 ,检测 h VEGF1 2 1促进 HUVEC增殖的生物学活性。设转染 pc DNA3空质粒载体和不转染任何 DNA的 HU VEC做对照。 结果 :(1)成功构建了 pc DNA3- h VEGF1 2 1 真核表达质粒 ,经测序证明基因序列与 Gen Bank中核酸序列一致 ,且插入方向正确 ;(2 )转染细胞瞬时表达 h VEGF蛋白 ,于转染 1d后每 10 4 个细胞每天可分泌 h VEGF蛋白 5 9.95 pg,约为对照组的 10 0倍 ;之后表达水平先快后慢下降 ,于转染 7d后仍较对照组高近 1倍 ;(3)转染细胞生长速度明显加快 ,在转染 3d后细胞数与对照组相比即有显著性差异 (P<0 .0 1) ,细胞倍增时间从对照组的 7d以上缩短为 3d左右。结论 :成功构建了 pc DNA3- h VEGF1 2 1 真核表达质粒 ;该质粒能在 HU
- 李红华刘厚奇汤淑萍熊俊汤瑞宝胡凯猛
- 关键词：真核表达人脐静脉内皮细胞
- 重组CCL2小鼠黑色素瘤B-16细胞的建立及生物学活性的鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的:在小鼠黑色素瘤B-16细胞中克隆表达趋化因子CCL2,以进一步研究趋化因子与肿瘤的关系。方法:从小鼠腹腔巨噬细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增CCL2 cDNA,将此片段重组于真核表达载体pcDNA3.0,脂质体FuGENE6转染鼠黑色素瘤B-16细胞,G-418筛选阳性克隆。结果:RT-PCR和免疫细胞化学鉴定转染B-16细胞中有较强CCL2的表达,体外趋化实验表明重组CCL2有生物学活性。结论:获得有趋化活性的重组CCL2的小鼠黑色素瘤B-16细胞。
- 胡凯猛熊俊冀凯宏汤淑萍刘厚奇
- 关键词：小鼠黑色素瘤生物学活性
- 转录因子GATA4和甲胎蛋白在小鼠胎肝和肝癌细胞中的表达对比及相关性被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨转录因子GATA4和甲胎蛋白(AFP)在小鼠胎肝和肝癌细胞中的表达及二者相关性。方法:获取小鼠孕10.5d、孕13.5d、孕15.5d、孕17.5d、出生后0.5d的肝组织,半定量RT-PCR检测GATA4和AFP mRNA的表达,并以成鼠肝、正常肝细胞株和肝癌细胞株作为对照。将小鼠GATA4真核表达载体成功转染正常肝细胞并鉴定,将多柔比星作用肝癌细胞,然后均进行以下指标监测:半定量RT-PCR法检测GATA4、AFP和胎蛋白转录因子(FTF)mRNA的表达,免疫印迹法检测GATA4和AFP蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清AFP的含量。结果:随着胎肝细胞分化的不断成熟,GATA4和AFP的表达逐渐下降,至出生后0.5d已降至成肝水平。GATA4、FTF和AFP在正常肝细胞不表达,而在肝癌细胞高表达;正常肝细胞转染GATA4后,FTF和AFP表达显著增高,其细胞上清液AFP含量亦明显增高。多柔比星作用肝癌细胞后,6h内GATA4的表达首先降低;随着时间延长(≥12h),FTF和AFP表达逐渐降低,细胞上清液AFP含量亦逐渐降低,差别具有显著的统计学意义。结论:GATA4在胎肝组织和肝癌细胞中高表达并可能对AFP也有一定的上调作用。
- 任传路季健沈红石刘厚奇
- 关键词：甲胎蛋白胚胎
- 人干细胞的分化研究及临床应用探索被引量：2
- 2003年
- 人干细胞是具有自我复制和分化潜能的细胞 ,有很多种类 ,在人体发育中起着决定性的作用。干细胞的分化是干细胞研究的核心内容 ,除了受干细胞自身分化潜能制约外 ,同时受干细胞周围环境的控制。人干细胞的分化研究分为体外研究和体内研究 ,除观察人干细胞诱导分化后的形态变化外 ,同时也探索细胞分化的分子机制。人们关注人干细胞的研究 ,目的就是体外扩增干细胞并获得具有定向分化能力的干细胞 ,采用适当的手段治疗人类疾病 。
- 刘厚奇冯根生
- 关键词：干细胞细胞分化胚胎发育体外分化
- 间充质干细胞特性与应用前景被引量：5
- 2004年
- 间充质干细胞是中胚层发育的早期细胞,具备干细胞的基本特性。在发育的不同阶段和特定环境条件下,间充质干细胞可向骨、软骨、肌肉、神经、血管及血液细胞等多种方向分化。在成体的很多器官和组织中也存在着间充质干细胞,以备修复和再生所用。间充质干细胞易于体外培养,扩增迅速,可以分化为多种细胞,为干细胞生物工程提供了一个很好的种子细胞。在明确间充质干细胞生物学特性和分化的机制后,可在体外和体内将其定向诱导分化为多种细胞。间充质干细胞具有巨大的临床应用价值和科学研究价值。
- 仵敏娟刘善荣刘厚奇
- 关键词：间充质干细胞分化
- SHP-2野生型基因可促进乳腺癌转移而其突变型基因可抑制转移
- 2009年
- 目的:探讨含2个Src同源区2的蛋白酪氨酸磷酸酶(Src homology 2 domain-containing tyrosine phosphatase,SHP-2)在乳腺癌MCF-7细胞体内外移动和转移中的作用。方法:首先构建重组质粒SHP-2-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因及SHP-2C>S-GFP(SHP-2突变体),并分别转入乳腺癌MCF-7细胞中,建立2种细胞,即SHP-2-GFP-MCF-7和SHP-2C>S-MCF-7。利用荧光显微镜技术观察细胞移动情况,动物实验观察不同细胞移植组裸小鼠的肿瘤生长情况,从而确定蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动、侵袭和转移中的作用。结果:SHP-2转染的乳腺癌MCF-7细胞的体外移动能力增强,且在注射此组细胞的裸鼠中有肿瘤生长;而转染了SHP-2C>S-GFP的乳腺癌MCF-7细胞的移动能力明显减弱,且注射此组细胞的裸鼠未发现肿瘤生长。结论:SHP-2可促进乳腺癌MCF-7细胞在体外的移动及体内的侵袭和转移。
- 王凤玫傅志超徐静
- 关键词：乳腺肿瘤肿瘤转移细胞移动
- 肿瘤微环境与趋化因子家族被引量：13
- 2005年
- 肿瘤微环境中趋化因子及其受体在以下几个方面影响着肿瘤的生长与转移:调控免疫细胞向肿瘤组织的迁移;影响机体对肿瘤细胞的清除能力;调节肿瘤组织的血管新生;刺激肿瘤以自分泌或旁分泌形式产生生长分子;影响肿瘤细胞的浸润和转移。现综述近年来有关趋化因子及其受体与肿瘤细胞免疫逃逸,以及在肿瘤免疫治疗等方面的研究进展。
- 胡凯猛熊俊刘厚奇
- 关键词：趋化因子免疫耐受肿瘤逃逸
- 上皮肿瘤始于干细胞被引量：2
- 2007年
- 人类肿瘤大约90%以上源自于上皮。上皮干细胞是唯一长期存在于上皮组织的细胞,可积累多次突变生成肿瘤。所以,人们认为肿瘤多起源于正常干细胞。然而,目前研究中关于上皮肿瘤干细胞及其与正常上皮干细胞的关系了解甚少。现综述近年来有关上皮干细胞和肿瘤发生的关系及其调控机制方面的研究进展。
- 孙红玉胡凯猛刘厚奇
- 关键词：上皮干细胞肿瘤干细胞
