长春市科技局科研基金(2011122)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：李江杨柳秦晖王娜赵超悦更多>>
- 相关机构：东北师范大学吉林大学口腔医院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科技发展计划项目长春市科技局科研基金吉林省科技厅科研基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- EMMPRIN糖基化突变质粒的构建及功能检测被引量：1
- 2014年
- 目的:构建细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)糖基化位点突变质粒,探讨其与肿瘤细胞增殖的关系。方法:利用PCR定点诱变技术构建EMMPRIN糖基化位点突变质粒。突变成功后,对突变质粒进行功能检测,Western blotting法检测EMMPRIN蛋白表达;免疫荧光法检测细胞形态学变化;MTT法检测突变质粒与肿瘤细胞增殖的关系。结果:酶切鉴定和测序证实,将EMMPRIN序列中第44、152和186位的天冬酰胺突变成谷氨酰胺,成功构建EMMPRIN/GFP(N44Q)、EMMPRIN/GFP(N152Q)和EMMPRIN/GFP(N186Q)糖基化单点突变质粒;糖基化位点突变后,突变型细胞核分裂相显著减少,伪足数减少;MTT法检测,与对照组比较,野生型组细胞存活率明显升高(P<0.05);而EMMPRIN糖基化位点突变后,与野生型比较,EMMPRIN(N44Q)、EMMPRIN(N152Q)和EMMPRIN(N186Q)细胞存活率均明显降低(P<0.05)。结论:EMMPRIN突变型能抑制肿瘤细胞的增殖,且随作用时间增加,抑制作用减弱;EMMPRIN糖基化修饰与肿瘤细胞的增殖有关联。
- 赵超悦宋润敏秦晖王娜杨柳李江
- 关键词：细胞外基质金属蛋白酶诱导因子点突变糖基化细胞增殖
- GST-hZimp10融合蛋白的重组及抗体制备被引量：1
- 2015年
- 目的:构建pGEX-4T-1/hZimp10重组质粒,并在大肠杆菌中表达,纯化出GST-hZimp10融合蛋白,用以制备抗hZimp10抗体。方法:采用PCR技术以pcCDNA3.1-Flag-hZimp10为模板,扩增出hZimp10蛋白N端128个氨基酸对应DNA片段,并将其与谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1进行重组,酶切鉴定后获得重组质粒,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达,获得GST-hZimp10融合蛋白,纯化后将其作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体,用间接ELISA法检测抗体效价,Western blotting法检测抗体特异性。结果:经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定,确定PGEX-4T-1/hZimp10重组质粒中包含384bp的片段,与测序结果一致,表明pGEX-4T-1/hZimp10重组质粒构建成功。SDS-PAGE电泳,融合蛋白成功表达,蛋白相对分子质量大小与预期相符。间接ELISA法检测抗hZimp10抗体效价可达1∶100 000以上。Western blotting法,hZimp10在LNCaP细胞中具有很高的特异性。结论:成功获得GST-hZimp10融合蛋白,且制备了抗hZimp10抗体。
- 杨柳汪小菀王冰瑜宋润敏李江
- 关键词：多克隆抗体
