国家自然科学基金(30371391)
- 作品数：5 被引量：23H指数：3
- 相关作者：丁义涛施晓雷朱章华仇毓东谢婷更多>>
- 相关机构：南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金卫生部科技专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人骨髓干细胞在中空纤维滤器中诱导分化构建生物人工肝反应器的可行性研究
- 2010年
- 目的 探讨以人骨髓干细胞在中空纤维滤器中直接扩增并诱导分化为类肝细胞,从而直接构建成生物人工肝反应器的可行性. 方法 取志愿者骨髓血,人骨髓间充质干细胞分离、扩增至107数量级后种植入中空纤维滤器,继续培养扩增10 d后,以含重组人肝细胞生长因子（rhHGF）、重组人碱性成纤维细胞生长因子4（rhFGF-4）、重组人制瘤素M（rhOSM）等细胞因子的培养液诱导分化,检测培养上清液中白蛋白、甲胎蛋白（AFP）水平;诱导18 d后检测氨代谢、安定代谢及尿素合成等功能.培养结束后以流式细胞仪检测消化滤器内细胞白蛋白表达率.培养全过程监测滤器内培养液葡萄糖浓度变化. 结果 ①扩增培养期人骨髓间充质干细胞在中空纤维滤器内种植后的葡萄糖摄取量呈进行性升高,在诱导分化期保持相对平稳,诱导培养结束时细胞总数达109数量级.②进行诱导培养后6 d,培养上清液中出现AFP,12 d达到峰值;9 d出现白蛋白并持续进行性升高;诱导培养18 d时,滤器内细胞总体氨清除速率为2.0～2.7 mmol/24 h,尿素产生速率为1.8～2.2 mmol/24 h,安定清除速率为3.2～3.8 mg/24 h.③21 d滤器内细胞白蛋白表达率为66.18%～76.91%. 结论 人骨髓干细胞可在中空纤维滤器内扩增,并分化为肝细胞样细胞,成为具有一定功能的生物人工肝反应器.
- 朱章华仇毓东施晓雷谢婷丁义涛
- 关键词：间充质干细胞生物人工肝生物反应器
- 人骨髓间充质干细胞体外扩增并诱导为肝细胞的试验研究被引量：3
- 2010年
- 目的寻找人骨髓间充质干细胞(hBMSC)扩增并向肝细胞方向诱导分化的培养体系,并验证该体系的诱导效率。方法健康成人志愿者骨髓,经密度梯度离心分离人骨髓单个核细胞(hBMMNC),采用含表皮生长因子(EGF)和血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)的培养液进行扩增培养至1010数量级后,以含肝细胞生长因子(HGF)、碱性成纤维样细胞生长因子4(FGF-4)、制瘤素(OSM)质量浓度各20ng/mL的培养液进行诱导培养,以RT-PCR、酶联免疫吸附分析(ELISA)、流式细胞分析、生物化学检测等方法检测其白蛋白、CK18、甲胎蛋白、尿素等的合成能力及氨代谢能力。结果培养液扩增hBMSC至1010数量级平均需(22.1±2.2)d,扩增后细胞表型特征仍符合hBMSC特征。扩增后的细胞经上述诱导体系诱导后,6d出现甲胎蛋白的合成,9～12d出现白蛋白的合成,18d达到高峰;对氨的代谢和尿素的合成功能在9～12d出现并持续存在。结论以含EGF和PDGF-BB的培养液扩增hBMSC快速,并能很好地保持干细胞的表型特征和诱导潜能。以含HGF、FGF-4、OSM质量浓度各20ng/mL的诱导培养体系,能成功地诱导经扩增后的hBMSC向肝细胞方向转化。
- 朱章华仇毓东施晓雷谢婷丁义涛
- 关键词：生物人工肝干细胞体外诱导肝细胞
- 小鼠骨髓干细胞向肝细胞转化的体外实验研究被引量：3
- 2006年
- 目的建立以30 ng/ml FGF-4和30 ng/ml OSM 为主的诱导培养体系,研究体外骨髓干细胞向肝细胞的转化过程中细胞形态、结构、功能的变化。方法建立以30 ng/ml FGF,30 ng/mlOSM 为主的小鼠骨髓干细胞诱导培养体系。观察细胞形态和数量的变化;RT-PCR、Western blot、免疫荧光染色检测肝细胞特异性标记物的表达;通过 PAS 糖原染色、白蛋白 ELISA、尿素合成试验,检测细胞的合成和代谢功能。结果诱导12 d,观察到多极性的肝细胞样细胞,且逐渐增多、集落不断增大。在诱导过程中,不同的时间点可以分别检测到 HNF-3βmRNA、ALBmRNA、CK18mRNA、TTRmRNA、G-6-PasemRNA 和 TATmRNA 的表达。诱导21 d,细胞表达 HNF-3β、ALB、CK18蛋白;免疫荧光定位示 ALB 表达于胞浆和胞膜,而 CK18表达于胞浆。诱导21 d,细胞胞浆内可见红染的糖原颗粒;在诱导过程中,不同的时间点检测到细胞分泌 ALB、合成尿素的量的变化。结论我们建立的以30 ng/ml FGF、30 ng/ml OSM 为主的诱导培养体系,可以有效地促进骨髓干细胞体外定向转化为肝细胞。
- 施晓雷丁义涛仇毓东谢婷朱章华李雷陈蕾蕾
- 关键词：骨髓干细胞肝细胞
- 小鼠骨髓干细胞体外定向诱导为肝细胞样细胞的实验研究被引量：8
- 2006年
- 目的来源于骨髓干细胞的有功能的干细胞,可能成为生物人工肝和肝细胞移植的细胞来源。我们建立恰当的体外诱导培养体系,促使骨髓干细胞转化为肝细胞。方法获取骨髓干细胞,建立以FGF、HGF、OSM、EGF为主的细胞诱导培养体系。在细胞分化过程中,观察细胞形态和数量的变化,RT-PCR检测基因表达的变化,免疫荧光染色技术在蛋白水平检测ALB和CK18表达情况。PAS染色检测其糖代谢功能。结果在诱导过程中,多极性的肝细胞样细胞在12 d内可以观察到,且其随着细胞分化过程逐渐增多、集落增大。诱导细胞在7 d内表达AFPmRNA并维持到第21天,但后期表达减弱;在7天内表达ALBmRNA和CK18mRNA,随着分化时间的延长,其表达不断增强;在14 d内表达TTRmRNA,随着分化时间的延长,其表达不断增强。免疫荧光染色进行定位:在诱导组,诱导21 d的细胞表达ALB和CK18,其中ALB表达于胞浆和胞膜,而CK18表达于胞浆。糖原染色发现诱导组中,细胞胞浆内出现大小不等的红染的糖原颗粒。结论我们建立的以细胞因子FGF、HGF、OSM、EGF为主的细胞诱导培养体系是有效的,通过诱导骨髓干细胞,我们获得了有部分肝细胞形态结构和功能的肝细胞样细胞。
- 施晓雷丁义涛仇毓东谢婷朱章华李雷陈蕾蕾
- 关键词：骨髓干细胞肝细胞
