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梅花鹿生茸区骨膜细胞基因片段测序分析: 2013年; 在已经构建的梅花鹿生茸区骨膜细胞cDNA表达文库的基础上对文库中的噬菌斑进行随机挑取筛选,对筛选出来的噬菌斑进行质粒亚克隆、鉴定及表达序列标签序列测定和生物信息学分析。通过随机筛选及生物信息学分析的方法发现,在梅花鹿生茸区骨膜细胞中有特殊意义的基因或者基因片段。随机挑选表达频率比较高的11个基因片段中有6个基因片段具有重要意义,对这6个基因片段进行了生物信息学分析,为进一步的鹿茸生物学研究打下了基础。; 鲁晓萍孙红梅褚文辉王大涛赵海平李春义; 关键词：鹿茸 CDNA文库基因克隆

草原红牛胰岛素样生长因子结合蛋白6基因外显子2的遗传多态性及遗传效应分析: 2014年; 本试验旨在研究草原红牛不同基因型与屠宰肉用性状的关联性。选用草原红牛作为试验群体,采用PCR-SSCP方法检测胰岛素样生长因子结合蛋白6(insulin-like growth factors binding proteins 6,IGFBP6)基因外显子2的多态性,采用最小二乘法拟合线性模型将突变位点的不同基因型与牛屠宰肉用性状进行关联分析。结果表明,在IGFBP6基因外显子2上发现1个多态性位点A180G,具有3种基因型:AA、AB和BB。SPSS 13.0统计分析结果表明,IGFBP6基因外显子2AB和BB基因型净肉重极显著高于AA基因型(P<0.01);眼肌面积和骨重显著高于AA基因型(P<0.05),而在宰前活重、胴体重、肾脂重和肋脂重方面3种基因型个体之间差异不显著(P>0.05)。结果显示,IGFBP6基因的多态性与屠宰肉用性状具有一定的关联性,可为今后草原红牛的育种保种工作提供理论依据,并对草原红牛肉用性状的改善提供参考。; 杨春刘振李春义; 关键词：草原红牛遗传多态性

高通量测序技术及其在鹿茸生物学领域的应用被引量：1: 2011年; 随着测序技术的快速发展,各种新方法层出不穷,其测序数据量也在呈几何级数增长。文章对目前最具有代表性的4种高通量测序技术———焦磷酸(GS FLX)测序法、单分子阵列技术(Solexa)测序法、连接酶(SOLiD)测序法和单分子(HeliScope)测序法的测序原理、基本操作流程和测序能力作一综述,并对高通量测序技术在鹿茸生物学研究方面的应用进行了分析。; 赵海平杨福合邢秀梅吴琼李春义; 关键词：高通量测序

东北梅花鹿Galectin-1基因RNAi载体的构建被引量：1: 2013年; 构建东北梅花鹿galectin-1基因特异小分子干扰RNA(shRNAs)真核干扰载体,并获得稳定感染生茸区骨膜细胞系。设计2对galectin-1 mRNA特异性shRNAs,两端分别带有ClaⅠ/MluⅠ酶切位点和一个9 nt发夹结构,通过基因克隆技术将其插入真核表达质粒pLVTHM中,构建galectin-1 shRNA表达载体,利用PCR和测序筛选出阳性质粒。将重组质粒与PPAX及pMD2.G共转染到293 t细胞中,在倒置显微镜下观察转染效果并收集、浓缩病毒质粒,感染生茸区骨膜细胞。结果表明,成功构建东北梅花鹿galectin-1基因RNAi载体,获得稳定传代被感染生茸区骨膜细胞系,为进一步研究galectin-1基因在鹿茸再生中的作用奠定基础。; 秦欣欣孙红梅褚文辉王大涛郭倩倩章秀婷李春义; 关键词：RNAI

梅花鹿S100A4基因RNAi重组慢病毒载体的构建被引量：2: 2012年; 本研究针对东北梅花鹿S100A4基因筛选出若干条RNAi靶位点,并利用NCBI中的BLAST工具去除脱靶情况,最终得到2条高分靶位点。然后在T4连接酶的作用下,将其与载体质粒pLVTHM的酶切产物进行连接,并通过PCR鉴定及测序筛选出阳性质粒。pLVTHM阳性重组质粒与pMD2.G及pCMV-dr8.91共转染到293T细胞中。在倒置荧光显微镜下观察转染效果并进行收获病毒质粒。结果显示在转染24h后,在293T细胞中观察到了绿色荧光。本研究成功构建出针对梅花鹿S100A4基因的慢病毒载体,为以后进一步研究S100A4基因在鹿茸再生中的具体功能与机制打下了基础。; 魏明立褚文辉赵海平王大涛孙红梅李春义; 关键词：S100A4基因慢病毒载体

用GFP基因标记梅花鹿生茸骨膜细胞被引量：1: 2014年; 为了用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记梅花鹿生茸区骨膜(antlerogenic periosteum,AP)细胞,试验首先构建了含GFP基因的重组质粒pLNHX-GFP,将重组质粒与包装质粒VSV共转染包装细胞GP 2-293,获得复制缺陷型逆转录病毒上清液,感染培养的梅花鹿生茸区骨膜细胞,检测GFP在骨膜细胞中的表达情况,用G418对感染后的细胞进行筛选。结果表明:试验获得了能稳定地表达GFP的生茸骨膜细胞。; 王大涛赵海平楮文辉李春义; 关键词：逆转录病毒绿色荧光蛋白标记基因

半乳糖凝集素1蛋白及其生物学功能被引量：10: 2012年; 半乳糖凝集素1(Galectin-1)是一种分子质量约为14ku的β-糖结合蛋白,是动物凝集素家族的成员之一。作为多种癌症的诊断指标,治疗癌症的新突破口,对Galectin-1的研究备受关注。此外,Galectin-1分布广泛,与多种正常生物功能相关,如细胞生长、神经修复、血管再生、软骨形成等。现阶段,关于Galectin-1在鹿茸再生中的研究很少,但鹿茸再生中许多过程与Galectin-1的功能高度相关。与肿瘤同样高速生长且高表达Galectin-1的鹿茸组织并不发生癌变,这可能对癌症的研究有所启发。为了寻找治疗癌症的新方法,解释鹿茸再生机制,了解Galectin-1蛋白在肿瘤和鹿茸中的功能研究进展至关重要,文章就其进行了综述。; 秦欣欣孙红梅赵海平褚文辉王大涛李春义

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国家重点基础研究发展计划(2011CB111515)