黑龙江省教育厅资助项目(11531262)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅资助项目黑龙江省科技厅青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 牛γ干扰素基因的表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2011年
- 为了获得牛γ干扰素表达产物及其多克隆抗体,利用分子生物学软件分析GenBank公布的牛γ干扰素的氨基酸序列,针对这一基因序列设计了一对特异性引物,并从牛脾脏淋巴细胞提取基因组总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增出IFN-γ基因,与pMD18-T载体连接后进行酶切、PCR扩增以及序列测定和分析,并将其连接到pQE-30原核表达载体中,命名为pQE30-IFN-γ,转化到大肠埃希菌x-LI Blue感受态细胞,1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导表达,经纯化后免疫接种小鼠,用ELISA测定小鼠血清中抗体效价。结果表明,RT-PCR扩增到510 bp的片段,重组蛋白大小为22 ku,与预期大小相符。Western blot分析结果表明,重组蛋白能与His-tag的单克隆抗体反应,说明该蛋白具有良好的免疫活性。用ELISA测定小鼠血清的抗体效价均在1∶32 000以上,说明该蛋白免疫效果较好,为下一步研究干扰素的功能奠定了基础。
- 宋佰芬刘哲曹宏伟马金柱徐闯崔玉东朱战波黄玉兰
- 关键词：克隆
- 牛γ-干扰素基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
- 2011年
- 根据GenBank发表的牛γ-干扰素基因设计1对特异性引物,从牛脾脏淋巴细胞提取基因组总RNA,采用反转录?聚合酶链式反应(reverse transcriptase-PCR,RT-PCR)技术扩增出IFN-γ基因,与pMD18-T载体连接后进行酶切、PCR鉴定及序列测定和分析,并将其连接到pQE-30原核表达载体中,命名为pQE30-IFN-γ,转化到大肠杆菌x-LI Blue感受态细胞,IPTG(1.0 mmol/L)37℃诱导表达。结果显示,对重组质粒进行PCR鉴定,扩增到510 bp片段,重组蛋白大小为22 ku,与预期大小相符;Western blotting分析结果表明,重组蛋白能与抗His-tag单克隆抗体反应,为下一步研究干扰素的功能奠定了基础。
- 宋佰芬刘哲曹宏伟马金柱徐闯崔玉东朱战波黄玉兰
- 关键词：干扰素基因克隆
- 牛干扰素-γ基因的克隆与真核表达载体的构建被引量：3
- 2010年
- 根据Genebank中已发表的INF-γ蛋白cDNA序列保守区设计一对特异性引物,应用RT-PCR技术从Con A活化的牛外周血单核细胞中扩增到编码牛INF-γ蛋白基因,其大小为510 bp左右。将该基因克隆到pMD18-T载体中,测序结果与Genebank上发表的INF-γ基因序列进行比较,其同源性为99.8%。将该基因从重组pMD18T-IFN质粒中克隆到表达载体pcDNA3.1(+)质粒中,构建真核表达重组质粒,经酶切和PCR鉴定后表明构建的重组质粒为阳性。
- 宋佰芬李迎春邹珊崔玉东
- 关键词：干扰素-Γ真核表达
