国家科技重大专项(2008ZX09203-003)
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
- 相关作者：宋礼华王荣海周乐春李增礼储成风更多>>
- 相关机构：安徽安科生物工程(集团)股份有限公司安徽省生物医学研究所安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生理学生物学更多>>
- 高效液相色谱法测定重组人干扰素α-2b注射液中乙二胺四乙酸二钠含量被引量：4
- 2012年
- 目的：利用高效液相色谱（HPLC）法测定重组人干扰素α-2b注射液中EDTA二钠（乙二胺四乙酸二钠）的含量。方法：将EDTA二钠与氯化铁溶液于70℃水浴中反应20 min左右;色谱柱为SunFire C18（250 mm×4.6 mm,5μm,Waters）,流动相为5%甲醇＋95%0.64 g/L四丁基溴化铵和4.1 g/L三水合乙酸钠混合液,用冰乙酸调pH值至4.0,流速1 mL/min,检测波长254 nm。结果：该测定方法线性范围为0.025-0.5 g/L,线性关系良好（r=0.9997）,加样回收率为98.27%（n=9,RSD=2.55%）。结论：本方法准确、快速、可靠,可用于重组人干扰素α-2b注射液中EDTA二钠含量的测定。
- 李增礼周乐春赵辉储成风倪晓燕王荣海宋礼华
- 关键词：高效液相色谱NAFEEDTA
- HPLC法测定重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量被引量：7
- 2012年
- 目的采用HPLC法测定重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量。方法按设置的色谱条件对检测重组人干扰素α2b注射液中吐温80含量的HPLC方法进行专属性验证、系统适应性验证、线性范围测定、实验内重复性验证、日间重复性验证、最低检测限测定、准确性验证,并对3批重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量进行检测。结果该测定方法具有专属性;系统适应性良好;线性范围为0.031 25～2.5 mg/ml,R2=0.999 7,线性关系良好;实验内重复性,峰面积和浓度的RSD值分别为0.71%和0.56%;日间重复性,保留时间和峰面积的RSD值分别为0.47%和2.76%;最低检测限为10 mg/L;加样回收率分别为101.99%、99.96%和102.2%,RSD=1.16%;3批人干扰素α2b注射液中吐温80的相对含量分别为0.940、0.936和0.950 mg/ml,分别为标示量的94.0%、93.6%和95.0%。结论本方法准确、快速、可靠,可用于重组人干扰素α2b注射液中吐温80含量的测定。
- 赵辉李增礼周乐春储成风倪晓燕王荣海宋礼华
- 关键词：干扰素Α2B
- 抗基质金属蛋白酶-2单克隆抗体的制备、鉴定及其应用被引量：1
- 2012年
- 目的:制备和鉴定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)单克隆抗体(mAb),检测其在人卵巢癌组织和裸鼠移植瘤中的表达。方法:利用戊二醛法制备人工抗原MMP-2-BSA和MMP-2-KLH,并免疫小鼠,采用标准杂交瘤技术,亚克隆筛选出单克隆细胞株,制备腹水,采用辛酸-硫酸铵法纯化mAb。以ELISA、Western blot法对抗体进行鉴定。通过免疫组织化学法与商品化多抗进行对比,并联合CA125将自制抗体应用于临床人卵巢癌组织和裸鼠移植瘤的检测。结果:人工抗原MMP-2-BSA和MMP-2-KLH合成成功。获取3株稳定分泌抗MMP-2的杂交瘤细胞株(3G10、4D12、1E8),抗体亚型均为IgG1。其中3G10反应性最强。经间接ELISA法检测纯化后抗体的效价达1∶1×106。自制mAb应用于人卵巢癌组织切片和裸鼠模型检测,卵巢癌组织与正常组织之间表达差异有统计学意义(P<0.01)。卵巢癌患者CA125和MMP-2联合检测阳性率较单一检测高(P<0.01)。自制mAb的染色特性与商品化抗体相似,且检出率较商品化多抗高(P<0.01)。结论:采用人工合成多肽作为免疫原成功制备了与卵巢癌相关的特异性抗MMP-2 mAb。
- 游牧刘文徐振山宋礼华
- 关键词：基质金属蛋白酶-2单克隆抗体卵巢癌裸鼠
- 突变人干扰素-α2b基因5′端提高其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的对人干扰素-α2b(hIFN-α2b)基因的5′端进行突变,构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核高表达工程菌,以提高rhIFN-α2b的表达水平。方法依据大肠杆菌密码子偏好性,在不改变hIFN-α2b的氨基酸序列的情况下,定点突变hIFN-α2b基因5′端序列并PCR扩增出rhIFN-α2b′,克隆至温控型表达载体pJW2,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子,温度诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot鉴定分析并以WISH-VSV系统检测其抗病毒活性。结果SDS-PAGE分析表明rhIFN-α2b表达量约占菌体总蛋白20.6%,Western blot表明rhIFN-α2b具有与hIFN-α2b相同的免疫原性,WISH细胞-VSV病毒系统证实其比活性达1.2×108IU/mg,与未突变工程菌一致。结论突变hIFN-α2b基因5′端可以提高其表达水平,并成功构建出rhIFN-α2b原核高表达工程菌。
- 王参军邹文艺张玲范清林宋礼华
- 关键词：突变干扰素-Α2B基因表达大肠杆菌
- 高效液相色谱法检测重组人干扰素α2b注射液中组氨酸含量被引量：2
- 2014年
- 目的建立检测重组人干扰素α2b（recombinant human interferonα2b,rhIFNα2b）注射液中组氨酸含量的高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）法,并对方法进行验证及初步应用。方法按设定的色谱条件对检测rhIFNα2b注射液中组氨酸含量的HPLC法进行专属性、系统适应性、试验内和日间精密性、准确性验证,确定方法的线性范围和最低检测限,并用建立的方法检测6批rhIFNα2b注射液中的组氨酸含量。结果该方法专属性、系统适应性、试验内精密性、日间精密性和准确性良好;线性范围为6.0645-775μg/ml（R2=0.999 8）;最低检测限为50ng/ml;用建立的方法检测6批rhIFNα2b注射液中组氨酸含量与标示浓度接近。结论建立的HPLC法准确可靠,可用于rhIFNα2b注射液中组氨酸含量的测定。
- 陆春燕李增礼周乐春王荣海宋礼华
- 关键词：高效液相色谱法组氨酸干扰素Α2B
- 利用大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶去除重组人干扰素-α2b N端的起始甲硫氨酸被引量：1
- 2012年
- 目的构建重组大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶(re-MAP)的原核表达体系,并利用表达的reMAP切除重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)N末端的初始甲硫氨酸。方法将PCR扩增得到的大肠杆菌MAP基因克隆到表达载体质粒pACYCDuet-1中,并在宿主菌E.coli BL21中通过IPTG诱导进行可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot分析及活性检测后,通过两种方法作用rhIFN-α2b:①将纯化后reMAP和rhIFN-α2b在体外适当的缓冲液中作用;②构建reMAP和rhIFN-α2b的共表达体系,实现在细胞内对rhIFN-α2b进行作用,并对两种作用方式的结果进行比较。结果 reMAP和rhIFN-α2b均得到正确表达,酶活性检测结果表明reMAP具有水解N端甲硫氨酸的活性,两种方法作用后的rhIFN-α2b经氨基酸序列测定后显示N端起始甲硫氨酸均被切除,其中体内作用切除率>94%、体外作用切除率>96%。结论 reMAP可以用于rhIFN-α2b N末端的初始甲硫氨酸的切除。
- 王中安邹文艺刘磊范清林宋礼华
- 关键词：干扰素-Α2B基因表达大肠杆菌
- 重组人干扰素α2b凝胶的制备及安全性评价
- 2020年
- 目的研制出安全有效、稳定性好的重组人干扰素α2b凝胶。方法以重组人干扰素α2b为主药,卡波姆、明胶为凝胶基质,制备重组人干扰素α2b凝胶;通过扫描电镜(SEM)观察其微观结构;对生物学活性等主要质量指标进行稳定性考察;采用豚鼠进行皮肤过敏研究、采用新西兰兔进行皮肤刺激和局部刺激研究。结果制备的重组人干扰素α2b凝胶外观光滑透明、触感细腻,电镜扫描其微观结构呈三维网络状;干扰素生物学活性稳定,外观及pH等主要质量指标在18个月内稳定;重组人干扰素α2b凝胶给予豚鼠皮肤涂抹,未见皮肤过敏反应发生;新西兰兔破损皮肤重复涂抹给予重组人干扰素α2b凝胶后,未见与供试品相关的皮肤刺激性反应;新西兰兔完整皮肤和阴道重复给予重组人干扰素α2b凝胶后,皮肤给药和阴道给药未见与供试品相关的刺激性反应。结论研制的重组人干扰素α2b凝胶具有良好的稳定性,安全性,有广阔的临床应用前景。
- 倪晓燕周乐春储成风王荣海宋礼华
- 关键词：重组人干扰素Α2B凝胶安全性
