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利用RNAi抑制曼地亚红豆杉细胞紫杉烷14β-羟基化酶基因的表达被引量：5: 2009年; 目的:利用RNA干扰技术抑制紫杉烷14β-羟基化酶(简称14OH)基因的表达。方法:以曼地亚红豆杉(Taxus×media)为材料,通过农杆菌介导的双元载体转化系统将针对14OH基因构建的RNA干扰载体导入该植物细胞中。应用PCR-Southern技术对转基因细胞进行了鉴定。另外,利用RT-PCR技术检测14OH基因mRNA表达水平,并采用HPLC技术对转基因细胞系中三种C-14氧取代的紫杉烷成分进行测定。结果:Southern检测证实转基因实验获得成功,RT-PCR结果表明转基因细胞系中14OH基因mRNA表达水平与对照组相比显著下降,HPLC分析显示C-14氧取代的紫杉烷含量也有明显降低。结论:该RNA干扰技术有效地抑制了曼地亚红豆杉细胞内14OH基因的表达,有望为提高紫杉醇的生物合成产量提供一条新途径。; 李凤岚邱德有邱德有马小军刘敏; 关键词：曼地亚红豆杉 RNA干扰基因表达

草莓多酚氧化酶基因的克隆、反义表达载体构建及转化烟草的研究: 植物多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)是诱导许多果蔬等农产品产生酶促褐变的主要原因,同时在植物的生长发育、抗病虫害及果实品质形成等方面也起到了一定的作用。; 刘敏晁慧娟邱德有董清华; 文献传递

利用反向PCR方法克隆草莓多酚氧化酶基因及基因两侧非编码序列: 多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)是一类普遍存在于果蔬等农产品中,核基因编码的铜离子结合蛋白酶。它是许多果蔬等农产品酶促褐变的主因,也在植物的光合作用、; 刘敏邱德有晁慧娟董清华; 文献传递

木本药用植物红豆杉研究的新进展被引量：12: 2009年; 红豆杉是当今十分重要的一种木本药用植物,从中提取出的二萜类抗癌化合物紫杉醇在全世界已广泛应用于卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌等癌症的临床治疗,效果显著。近年来,人们还发现紫杉醇在其它疾病的治疗中也具有很好的作用。本文综述了近年来国内外在红豆杉人工栽培、紫杉醇化学半合成、红豆杉细胞培养、产紫杉醇内生真菌培养、代谢工程方面的最新研究进展,对当前工作中存在的问题进行了探讨,并对有关研究的发展前景进行了展望。; 邱德有吴小红黄璐琦; 关键词：红豆杉人工栽培紫杉醇内生真菌代谢工程

草莓果实外源基因瞬时表达系统的建立: 本研究首先以含东北红豆杉紫杉烷13α-羟基化酶(Taxane13α-hydroxylase,简称13OH)基因全长cDNA的pT13OH质粒DNA为模板,通过PCR技术扩增得到东北红豆杉13OH基因的全长cDNA。; 刘敏滕文静晁慧娟董清华邱德有; 文献传递

草莓果实外源基因瞬时表达系统的建立被引量：7: 2009年; 将东北红豆杉紫杉烷13α-羟基化酶(Taxane13α-hydroxylase,13OH)基因全长cDNA正向插入到pCAMBI-A1304,构建其植物表达载体pCT13OH;将水稻小RNA169d(microRNA169d,miRNA169d)基因前体(precursor)全长DNA正向插入到pCAMBIA1305.1,构建其植物表达载体pCO169d。用电击法把它们导入根癌农杆菌GV3101,获得有关工程菌株。用1mL无菌注射器分别将这2种工程农杆菌悬浮液注射到草莓(Fragaria×ananassa)授粉后1周、2周、3周的果实中,发现授粉后2周果实适宜注射,可用于瞬时表达。对授粉后2周的果实进行不同注射部位、根癌农杆菌不同活化时期和根癌农杆菌悬浮液不同注射量试验,以蒂部注射、根癌农杆菌活化12h和0.5mL悬浮液注射量的效果最好,与结构基因13OH和调节基因miRNA169d相融合的GUS基因都得到表达,瞬时表达成功。; 刘敏滕文静董清华晁慧娟李凤岚邱德有; 关键词：草莓果实根癌农杆菌基因功能

紫杉烷13α-羟基化酶基因的克隆及其转化烟草的研究被引量：4: 2008年; 利用东北红豆杉(Taxus cuspidata)cDNA文库作为模版,通过PCR技术扩增得到我国东北红豆杉紫杉烷13α-羟基化酶(Taxane13α-hydroxylase,简称13OH)的全长cDNA,将PCR产物克隆到pGM-T载体后测序结果表明该序列长度为1458bp。同源性比较分析结果表明:其碱基序列与已经报道的东北红豆杉(Taxus cuspidata)的13OH基因的一致性为99.38%,其氨基酸序列同与已经报道的东北红豆杉的13OH氨基酸序列的一致性为99.18%。将获得的cDNA全长序列正向插入到含有GUS报告基因的pCambia1305.1后成功地构建出东北红豆杉13OH植物表达载体pC13OH,通过电击法把pC13OH转入根癌农杆菌GV3101中。利用该工程菌株对普通烟草进行了转化,在潮霉素选择压力下获得了完整的再生植株。利用13OH基因特异引物,通过PCR技术筛选到4株阳性再生植株。在这4株再生植株中,有3株植株GUS报告基因的组织化学染色呈现阳性反应,表明该植物载体表达载体中与13OH相融合的GUS基因成功地得到了表达。为今后深入研究13OH基因在烟草中的表达和开展紫杉烷13α-羟基化酶基因对红豆杉细胞的转化以及研究作用于该基因的小RNA调节子打下了基础。; 滕文静胡新玲王伟程克棣邱德有; 关键词：紫杉烷全长 CDNA 烟草

曼地亚红豆杉细胞高效转基因体系的建立: 紫杉醇(taxol)是Wall等首次从短叶红豆杉(Taxus Brevifolia)树皮中分离得到的一种重要的次生代谢产物。临床可用于治疗卵巢癌、肺癌、膀胱癌、子宫癌及AIDS相关的Karposis肉瘤等,是目前应用最广...; 李凤岚马小军邱德有; 文献传递

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