国家自然科学基金(30672115)
- 作品数：5 被引量：11H指数：3
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- 融合自杀基因抑骨肉瘤生长的实验研究被引量：3
- 2009年
- 目的观察单纯疱疹病毒-胸苷激酶/胞嘧啶脱氨酶融合自杀基因(HSV-TK/CD)对骨肉瘤细胞增殖的影响和对裸鼠骨肉瘤生长的影响。方法将含TK/CD的重组腺病毒载体感染人骨肉瘤细胞系MG-63细胞,测定感染效率后分别给予不同浓度的前体药物和不同感染复数的自杀基因重组腺病毒作用于瘤细胞,测定细胞A值计算瘤细胞增殖抑制率,MTT法测定细胞存活率,并用流式细胞术和Hochest33342染色法分析其杀伤机制;人骨肉瘤细胞系MG-63细胞于裸鼠成瘤后将其分为6组(每组8只):PBS对照组(A组);重组腺病毒(Ad)-Lac-Z/GCV+5-FC组(B组);Ad-TK/GCV组(C组);Ad-CD/5-FC组(D组);Ad-TK/GCV+Ad-CD/5-FC组(E组);Ad-TK-CD/GCV+5-FC组(F组)。各组经治疗后观察肿瘤的生长状况及组织病理学改变。结果含自杀基因的重组腺病毒成功感染MG-63细胞;不同感染复数和不同前体药物浓度下,融合自杀基因系统对瘤细胞的杀伤作用明显强于单基因作用和双基因相加的作用,且有显著性差异(P<0.05);杀伤机制为致细胞坏死和细胞凋亡。裸鼠实验中,B组与A组比较,肿瘤体积与肿瘤坏死程度无明显差异(P>0.05);与A、B组相比较,C～F组肿瘤的生长均受到明显抑制(P<0.05),且E、F组与C、D比较有显著性差异(P<0.05)。结论融合自杀基因HSV-TK/CD对骨肉瘤细胞系MG-63细胞和裸鼠骨肉瘤的生长均有明显的抑制作用。
- 李伟沙丹马春燕
- 关键词：骨肉瘤胞嘧啶脱氨酶基因MG-63细胞裸鼠
- 融合自杀基因对骨肉瘤细胞作用的实验研究
- 2009年
- 目的观察单纯疱疹病毒-胸苷激酶/胞嘧啶脱氨酶融合自杀基因(HSV-TK/CD)对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法将含TK/CD的重组腺病毒载体感染人骨肉瘤细胞系MG-63细胞,测定感染效率后,分别给予不同浓度的前体药物和不同感染复数的自杀基因重组腺病毒,计算瘤细胞增殖抑制率,MTT法测定细胞存活率,并用流式细胞术和Hochest33342染色法分析杀伤机制。结果含自杀基因的重组腺病毒成功感染MG-63细胞;不同感染复数和不同前体药物浓度下,融合自杀基因系统对瘤细胞的杀伤作用明显强于单基因和双基因相加的作用(P<0.05);其杀伤机制为致细胞坏死和细胞凋亡。结论融合自杀基因HSV-TK/CD对骨肉瘤细胞系MG-63细胞的生长有明显的抑制作用。
- 李伟焦宗乾孙成良刘立成
- 关键词：骨肉瘤胸苷激酶基因胞嘧啶脱氨酶基因融合自杀基因
- 腺病毒介导的HSV-TK对骨关节炎滑膜细胞的作用被引量：6
- 2007年
- 目的:观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因(HSV-TK)对骨关节炎滑膜细胞的作用。方法:含HSV-TK基因的重组腺病毒转染骨关节炎滑膜细胞,观察转染效率,经丙氧鸟苷(GCV)处理后测定滑膜细胞的抑制率,动态观察细胞形态学变化,荧光染色观察细胞核形态学变化,定量分析细胞的凋亡和坏死率。结果:含TK基因的重组腺病毒有效感染骨关节炎滑膜细胞,治疗组对滑膜细胞有显著的抑制作用(P<0.05),转染细胞死亡有坏死和凋亡两种形式。结论:HSV-TK/GCV系统对骨关节炎滑膜细胞有显著的抑制作用。
- 丁远景张伟李伟张磊孙水王健王先泉
- 关键词：单纯疱疹病毒属胸苷激酶骨关节炎基因疗法
- 重组共表达载体pSNAV2.0-HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra的构建及其在滑膜细胞中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的引入内部核糖体进入位点(IRES),构建HSV1-tk与hIL-1Ra双基因共表达AAV重组载体并检测其在滑膜细胞中的表达。方法PCR扩增HSV1-tkI、RES及hIL-1Ra基因片段,分别与pMD18-T simple载体连接,测序后,hIL-1Ra与HSV1-tk先后插入pMD-IRES,构建重组质粒pMD-HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra,酶切出HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra片段,克隆至AAV载体质粒pSNAV2.0上,构建成重组共表达质粒pSNAV2.0-HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra,酶切鉴定后,用脂质体转染上述质粒至原代骨关节炎(OA)滑膜细胞,RT-PCR法鉴定共表达质粒在滑膜细胞中的表达。结果酶切鉴定证实重组共表达质粒构建正确;RT-PCR检测到转染后的OA滑膜细胞中表达HSV1-tk与hIL-1Ra。结论成功构建了重组共表达质粒pSNAV2.0-HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra;重组质粒转染OA滑膜细胞后,能表达HSV1-tk与hIL-1Ra。这为OA的基因治疗研究提供了理论依据。
- 刘青春李伟张伟王来城张捷杨东吴帅
- 关键词：胸苷激酶白细胞介素滑膜骨关节炎
- 腺病毒介导的HSV-TK/GCV系统对PVNS滑膜细胞的杀伤作用被引量：3
- 2008年
- 目的探讨腺病毒介导HSV-TK/GCV系统对色素沉着绒毛结节滑膜炎(PVNS)滑膜细胞的体外杀伤作用。方法将含LacZ基因的重组腺病毒载体Ad-LacZ转染PVNS滑膜细胞,X-gal染色法确定腺病毒对该细胞的转染效率,PCR检测转染细胞中HSV-TK基因的表达,MTT法检测TK阳性细胞对GCV的体外敏感性及旁观者效应,流式细胞仪检测HSV-TK/GCV系统作用后细胞的凋亡及坏死。结果感染复数为120时,近100%的细胞可被转染。HSV-TK/GCV系统对PVNS滑膜细胞的杀伤作用十分明显,且存在明显的旁观者效应。HSV-TK/GCV系统作用后细胞出现明显的凋亡及坏死。结论HSV-TK/GCV系统可明显杀伤PVNS中过度增殖滑膜细胞,可望用于PVNS的治疗。
- 杨东张伟李伟任强刘青春
- 关键词：胸苷激酶旁观者效应色素绒毛结节性
