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人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用被引量：4: 2008年; 本研究旨在建立人IFN-γ体外释放检测法,用于人结核病的特异性诊断。克隆表达了人IFN-γ基因,利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠,获得两株高效价的单克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测人IFN-γ的夹心ELISA,检测灵敏度达到31.25pg/mL。采集111位结核病阳性病人与292位临床健康对照者肝素抗凝全血,利用结核菌特异性抗原ESAT-6/CFP-10融合蛋白体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ,用所建立的夹心ELISA及商品化试剂盒平行检测所有样本,结果表明两种方法的检测结果相符。结核患者的检测灵敏度为95.5%,健康对照的阳性检出率为16.7%,患者与健康对照的阳性检出率差异极显著(P<0.01),证实所建立的方法灵敏度与特异性均很高,具有良好的应用前景。; 陈颖钰邓铨涛詹枝华郭爱珍项杰陈军周金海曾庆志杜义祥魏武童庆伟晁彦杰匡有吉陈焕春; 关键词：结核病 IFN-Γ ELISA

人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用: 本研究旨在建立人IFN-γ体外释放检测法,用于人结核病的特异性诊断。克隆表达了人IFNγ7基因,利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠,获得两株高效价的单克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测人IF...; 陈颖钰邓铨涛詹枝华郭爱珍项杰陈军周金海曾庆志杜义祥魏武童庆伟晁彦杰匡有吉陈焕春; 关键词：结核病 IFN-Γ ELISA; 文献传递

牛传染性鼻气管炎病毒gG蛋白的表达及gG-ELISA的建立被引量：15: 2007年; 以牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG。SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21（DE3）中呈可溶性及包涵体两种形式表达,重组蛋白质具有免疫学活性。包涵体蛋白经提纯、变性、复性后,作为包被抗原建立了gG-ELISA诊断方法。应用该方法与进口试剂盒（IDEXX）平行检测380份血清样品,两种方法的符合率为92%（351/380）。对6份病毒分离阳性血清的检测均为阳性,对非相关病原的阳性血清及中监所的阴性血清检测均为阴性,表明所建立的IBRVgG抗体的ELISA检测具有良好的灵敏度与特异性。对1248份奶牛血清样本进行了检测,进口牛群的IBRV抗体阳性率平均为21.7%,湖北本地中国黑白花奶牛的抗体阳性率在不同牧场之间变化很大,范围为0.0%-41.5%。; 颜邦芬陈锃张书环林祥梅陈颖钰晁彦杰李德学宋念华陈焕春郭爱珍; 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 ELISA 原核表达

四种牛分枝杆菌特异性蛋白融合表达及在牛结核病诊断中的临床应用被引量：8: 2007年; 以原核表达的MPB70-MPB83-CFP10-ESAT-6融合蛋白作为诊断抗原,建立牛结核病抗体检测间接ELISA(iELISA)。该iELISA与导致常见牛病的非相关抗原无交叉反应。用iELISA检测90份健康牛血清,确定样本阴阳性临界值(S/P)为0.17。与商品化胶体金试剂条(ICG)平行检测150份临床奶牛血清样本,结果与ICG的符合率为93.33%(140/150)。以结核菌素皮内试验(TST)为参考方法,检测了华中地区四个奶牛场的560头中国荷斯坦奶牛和90份进口奶牛结核阴性血清,结果iELISA与TST的总符合率为87.32%(489/560)。对其中22头奶牛进行鼻拭子分菌检验,4头分菌阳性奶牛的血清抗体检测也为阳性,iELISA与细菌培养的总符合率为77.27%(17/22)。以TST为参考方法,iELISA的敏感性和特异性分别为72.37%和89.67%。; 吴波张书环邓铨涛项杰陈军刘朝陈鑫宋念华陶淑珍黄继根韩永佩赵波林祥梅陈焕春郭爱珍; 关键词：IELISA 牛结核病 MPB70 CFP10 ESAT-6

肉牛传染性牛支原体肺炎流行的初步诊断被引量：66: 2008年; 石磊龚瑞尹争艳周勇裴洁胡智斌王利霞胡长敏刘涛陈颖钰廖娟红赵俊龙陈焕春郭爱珍; 关键词：牛支原体肺炎

肉牛传染性牛支原体肺炎流行的诊断被引量：139: 2008年; 采用多种诊断方法,对2008年以来湖北省多个地区新引进育肥肉牛呼吸道传染病进行了病原学研究。患牛病理变化主要集中在肺部,轻者可见肺局部肉样变,严重者可见肺广泛分布干酪样或化脓性坏死灶。将肺坏死组织制作石蜡切片,显微镜观察发现,肺组织表现为坏死性肺炎,未见典型的结核结节。实验室病原检测项目包括:支原体培养鉴定,PCR检测与目的基因测序鉴定;细菌分离鉴定;牛结核检测;泰勒虫血涂片检测与PCR检测等。最终确定该新发呼吸道传染病为牛支原体(Mycoplasma bovis)肺炎。同时,环形泰勒虫混合感染与细菌继发感染率很高,使病情复杂化。通过药敏试验发现,不同牛场分离的牛支原体最敏感药物为环丙沙星,其次为左氟沙星、四环素。文中还对该病的综合防治提供了合理的建议。; 石磊龚瑞尹争艳周勇裴洁胡智斌王利霞胡长敏刘涛陈颖钰廖娟红赵俊龙陈焕春郭爱珍; 关键词：牛支原体肺炎

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国家科技重大专项(2006BAD04A12)