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LRP16基因的多克隆抗体制备及表达的探索被引量：3: 2007年; 目的:制备人LRP16蛋白多克隆抗体并利用该抗体检测LRP16蛋白表达及亚细胞定位。方法:利用已构建的pRSET-C载体和LRP16基因组成的连接产物转化BL-21缺陷型大肠杆菌。诱导该基因原核表达,快速蛋白免疫法获取相应的多克隆抗体,利用免疫组化法观察LRP16基因产物在人多种组织中的表达差异。结果:成功获得高效的LRP16抗体,利用该抗体初步证实LRP16基因编码产物的在不同雌激素受体水平的组织分布特点。结论:制备的LRP16抗体及其全长基因可用于LRP16基因的生理功能及病理学研究,初步发现LRP16基因的表达与雌激素受体呈正相关。; 黄柯孟元光韩为东赵亚力李琦宋磊; 关键词：LRP16基因雌激素类多克隆抗体

小鼠LRP16基因同源重组ES细胞克隆的鉴定被引量：2: 2006年; 目的:为深入研究LRP16基因的生理功能,本研究将小鼠LRP16基因特异打靶载体pBΔ16转染小鼠胚胎干细胞(embryon ic stem cell),并筛选同源重组克隆。方法:通过电转染方法将LRP16插入失活型打靶载体导入ES细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southern b lot方法鉴定同源重组ES细胞克隆。结果:打靶载体成功转染ES细胞,Southern b lot筛选100个抗性克隆,结果显示有一个打靶序列同源重组型插入的ES细胞克隆。结论:筛选到同源重组型ES细胞,为下一步建立LRP16缺失型小鼠并为从整体水平研究LRP16基因的生理功能奠定基础。; 韩为东伍志强赵亚力司艺玲母义明孟元光Masatoshi Nomura; 关键词：LRP16 基因打靶 ES细胞

Induction of the LRP16 gene by estrogen promotes the invasive growth of Ishikawa human endometrial cancer cells through the downregulation of E-cadherin被引量：27: 2007年; LRP16 以前在乳癌房间作为导致雌激素的基因被识别。到在子宫内膜的癌症(EC ) 的雌激素和它的功能的效果的 LRP16 的应答的海角房间仍然是不清楚的。这里，我们证明 LRP16 基因的信使 rna 水平和倡导者活动被 17beta-estradiol (E2 ) 显著地在雌激素受体高山增加哈(嗯高山哈)-positiveIshikawa 人 EC 房间。尽管 Ishikawa 细胞的生长率没被 LRP16 的宫外的表示显然影响， Transwell 试金的结果显示出 LRP16-overexpressing 细胞的侵略能力的近似 one-thirdincrease。由于分子的屏蔽，我们观察到 E-cadherin 的表示，与肿瘤转移联系的一个必要粘附分子，被 LRP16 镇压。进一步的倡导者分析以一种剂量依赖者方式表明了那 LRP16 inhibitedE-cadherin transactivation。然而，抑制被雌激素剥夺废除，显示由 LRP16requires 的 E-cadherin 抄写的 down 规定嗯高山哈调停。染色质免疫降水分析表明到 E-cadherin 倡导者的 ERalpha 的绑定被 LRP16 反对，建议那 LRP16 能防碍嗯调停 alpha 的抄写。这些结果建议起来由雌激素的 LRP16 的规定能被在人的 EC 调整 E-cadherin 的 down 涉及侵略生长。; Yuan Guang MengWei Dong HanYa Li ZhaoKe HuangYi Ling SiZhi Qiang WuYi Ming Mu

小鼠LRP16基因打靶载体的构建和胚胎干细胞同源重组克隆鉴定被引量：4: 2006年; 目的既往研究表明LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关。为对该基因进行生理功能研究,本文构建了针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(embryonicstem cell,ES cells)并筛选同源重组克隆。方法PCR方法筛选129品系小鼠基因组文库中LRP16克隆,在第5外显子内插入SA-RIES-βgeo序列,构建插入失活型打靶载体并转染ES细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southern blot方法鉴定同源重组ES细胞克隆。结果将包含第5至11外显子的LRP16基因组片段亚克隆到pBluescript SKⅡ+载体,SA-IRES-βgeo序列的正确插入第五外显子中,打靶载体成功转染ES细胞,Southern blot结果显示具有一个打靶序列同源重组型插入的ES细胞克隆。结论成功构建了第五外显子插入失活型LRP16基因打靶载体并筛选到同源重组型ES细胞,为下一步建立LRP16缺失型小鼠并为从整体水平研究LRP16基因的生理功能奠定基础。; 伍志强韩为东赵亚力司艺玲母义明孟元光Masatoshi Nomura; 关键词：LRP16 基因打靶 ES细胞

LRP16、E-cadherin、ER与PR在子宫内膜异位症中的表达及其意义被引量：9: 2007年; 目的探讨LRP16与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)在子宫内膜异位症(EM)患者在位和异位内膜中的表达及其意义。方法采用免疫组化SP二步染色法,对72例EM患者在位和异位内膜中的LRP16、E-cadherin、ER、PR进行免疫组化染色。结果腺上皮细胞胞质中LRP16在在位内膜中的表达高于异位内膜(P<0.05);胞核中LRP16在位和异位内膜中的表达无明显差异;腺上皮细胞膜中E-cadherin在在位内膜中的表达低于异位内膜(P<0.05)。但在位和异位内膜中LRP16和E-cadherin的表达无相关性(P>0.05)。腺上皮细胞核中ER、PR在在位内膜中的阳性表达率高于异位内膜(P<0.05),异位内膜中PR的阳性表达率高于胞核中LRP16的阳性表达率(P<0.05),ER的阳性表达率低于LRP16,且ER与胞核中LRP16表达存在相关性。在位内膜胞核中LRP16的表达高于ER、PR(P<0.05)。结论LRP16和E-cadherin、ER、PR在在位和异位内膜中的表达异常可能与EM的发生发展有关。; 张燕孟元光陈美霞赵亚力韩为东田丽媛; 关键词：E-CADHERIN 子宫内膜异位症

LRP16融合蛋白载体的构建及其原核表达被引量：2: 2006年; 目的观察和鉴定LRP16在大肠杆菌中的表达,并分离、纯化其蛋白产物。方法应用DNA重组技术,用RT-PCR方法从正常人血液中扩增出LRP16基因全长及其抗原表位区,构建重组表达质粒pRSET-C-LRP16,IPTG诱导表达并纯化融合蛋白采用SDS-PAGE凝胶电泳进行鉴定。结果成功构建LRP16基因融合蛋白载体,SDS-PAGE显示pRSET-C-LRP16表达于原核细胞,蛋白经电泳分离,切胶后获得纯化的LRP16蛋白。结论制备的高纯度的LRP16蛋白,可在大肠杆菌中稳定表达。; 孟元光韩为东黄柯李琦伍志强宋磊; 关键词：LRP16基因融合蛋白

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国家自然科学基金(30471813)