国家重点基础研究发展计划(2002BA711A05)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 相关作者：罗敏李晓华郑升刘优萍骆天红更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院北京军区总医院上海市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划上海市教育委员会重点学科基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人脂肪细胞新乙二醛酶的发现及结构功能分析被引量：2
- 2007年
- 目的通过蛋白组学技术筛选人脂肪细胞新蛋白,并对新蛋白的结构及功能进行分析。方法利用双向电泳及质谱技术观察人脂肪细胞蛋白表达谱,对发现的新蛋白先通过RT-PCR及原核表达证实该蛋白在脂肪细胞的表达,再利用生物信息学对新蛋白的结构,同源性及结构域进行预测。结果发现了脂肪细胞表达的新蛋白My027,证实了该蛋白的表达,生物信息学分析显示该蛋白定位于胞浆,具有高度保守的结构域。141-253氨基酸之间有一个完整的乙二醛酶(glyoxalse,GLO)功能域,与GLO的同源性为96.7%,144-244氨基酸序列与GLO I的同源性为95.7%。结论脂肪细胞表达的蛋白My027具有与GLO I基本相同的功能域,很可能具有同样的生理功能。
- 李晓华郑升刘优萍骆天红罗敏
- 关键词：脂细胞
- My027融合蛋白表达载体构建及其在大肠杆菌的表达
- 2008年
- 目的探索My027蛋白的体外表达,通过原核表达获得大量可溶性My027融合蛋白。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,亲和层析法获得融合蛋白,采用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)、Western印迹法及质谱进行鉴定。结果融合蛋白以水溶形式分泌于大肠杆菌BL-21胞质中,纯化后的目的蛋白经SDS-PAGE、Western印迹法及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确。结论人脂肪细胞新蛋白My027在pGEX-4T-2原核表达载体可获高效表达,为进一步研究其功能奠定基础。
- 李晓华郑升刘优萍骆天红罗敏
- 关键词：融合蛋白原核表达
- 脂肪细胞新蛋白My027原核表达、纯化及生物活性研究
- 2008年
- 目的通过原核表达获得大量脂肪新蛋白质My027,并在体外初步研究其生物活性。方法RT-PCR法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,经亲和层析法获得融合蛋白,利用SDS-PAGE、Western印迹及质谱进行鉴定。在还原性谷胱甘肽存在的条件下,将纯化得到的融合蛋白作用于乙二醛酶Ⅰ的底物甲基乙二醛,通过分光光度法检测产物乳酸谷胱甘肽的生成。结果融合蛋白以水溶形式分泌于大肠埃希菌BL-21胞浆中,纯化后的目的蛋白SDS-PAGE、Western印迹及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确。结论人脂肪细胞新蛋白质My027在pGEX-4T-2原核表达载体中可获高效表达,所纯化蛋白具有类似于乙二醛酶Ⅰ的作用。
- 李晓华郑升刘优萍骆天红罗敏
- 关键词：原核表达生物活性
