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A型口蹄疫病毒多抗原表位杆状病毒表达载体的构建及表达被引量：1: 2014年; 为构建A型口蹄疫病毒(FMDV)多抗原表位杆状病毒表达载体,将A型FMDV上5个B细胞表位(VP1140-160aa、VP270-80aa、VP352-67aa、3B29-42aa和3D16-30aa)和4个辅助性T细胞表位(VP1200-213aa、VP420-34aa、3A21-35aa和3D346-370aa)通过人工合成的方法串联起来构建复合多表位基因B。然后将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac HTB。将酶切和测序鉴定正确的阳性重组质粒pFastBac HTB-B转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将PCR鉴定正确的重组杆状病毒质粒利用CellfectinⅡReagent转染至Sf9细胞。通过间接免疫荧光试验和Western-blot检测表达情况。结果显示,能够得到与A型FMDV猪抗阳性血清结合的蛋白,大小约为22.3ku,与预期结果相符。结果表明,成功构建了A型FMDV多抗原表位杆状病毒表达载体,并在昆虫细胞中正确表达,为下一步蛋白纯化奠定了基础。; 李登科刘新生方玉珍潘丽吕建亮张中旺周鹏蒋守田张永光王永录; 关键词：A型口蹄疫病毒 SF9细胞

口蹄疫病毒A型AF/72株衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及鉴定被引量：1: 2015年; 通过限制性酶切位点将P12A和3C基因插入到带有双启动子(Pp10和PPH)的杆状病毒表达载体p Fast BacTMDual,转化E.coli DH10感受态细胞进行蓝白斑筛选,将鉴定正确的重组杆状病毒质粒转染Sf9细胞后收获重组杆状病毒r Bac-Dual-P12A3C,通过间接免疫荧光(IFA)和蛋白质印迹(Western-blot)检测衣壳蛋白的表达。IFA结果表明表达产物能够被A型FMDV猪抗阳性血清所识别,鉴定正确并具有良好反应原性。Western-blot检测到81 k D(P12A)、57 k D(VP0+VP3)、47 k D(VP3+VP1)、33 k D(VP0)和24 k D(VP1/VP3)5条蛋白条带,与预期相符。该研究为进一步研究A型口蹄疫病毒空衣壳的体外组装提供了试验依据。; 张庆勋刘新生方玉珍王永录张永光; 关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白

A型口蹄疫病毒真核表达载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达被引量：2: 2013年; 为了构建A型口蹄疫重组表达质粒,并鉴定其在BHK-21细胞中的表达效果及免疫活性,通过设计引物及酶切位点,获得A型口蹄疫毒株AF/72的P1,2A及3C编码区的目的基因片段,利用设计的BamHⅠ及XbaⅠ酶切位点,定向将片段克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+),经筛选、鉴定及序列分析后,将重组阳性质粒pcDNA3.1/P12A3C转染BHK-21细胞,通过双抗体夹心ELISA方法、间接免疫荧光标记方法及电镜透射法,检测细胞中表达的蛋白。结果表明:目的片段正确克隆到pcDNA3.1真核表达载体上,转染BHK-21细胞后,几种方法都能够检测表达蛋白。由此得出结论,构建的A型pcDNA3.1/P12A3C重组质粒能够在BHK-21细胞中正确表达目的蛋白并能组装成病毒空衣壳,表达蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。; 胡文发张永光王永录张攀唐华方玉珍蒋守田吕建亮周鹏张中旺刘新生潘丽; 关键词：口蹄疫病毒 BHK-21细胞电镜

Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒的构建及表达被引量：1: 2013年; 为了构建Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒,采用多表位基因串联策略,合成包括口蹄疫病毒T细胞和B细胞表位基因的基因片段F,该基因片段由结构蛋白VP1上的2个B细胞表位(VP1135-159aa、VP1194-211aa)基因、非结构蛋白3A和3D上的T细胞表位(3A21-35aa、3D795-803aa)基因组成。利用限制性内切酶HindⅢ、XbaⅠ将基因片段F克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)。经酶切鉴定、序列分析正确后,利用LipofectamineTM2000将阳性重组质粒pc-F转染至BHK-21细胞。Western-blot和IFA分析结果显示,所表达的蛋白大小约25.4ku,能够与Asia 1型口蹄疫病毒标准兔抗血清发生特异性反应,证实所表达的蛋白具有较好的反应原性。结果表明,Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒pc-F构建成功,且能在BHK-21细胞中正确表达。; 张攀张永光王永录潘丽胡文发唐华方玉珍蒋守田吕建亮周鹏张中旺刘新生; 关键词：ASIA BHK-21细胞

口蹄疫病毒病毒样颗粒研究进展被引量：7: 2014年; 口蹄疫病毒病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是不含口蹄疫病毒RNA的空衣壳结构,由口蹄疫病毒的4种结构蛋白体外自组装形成的,形态上与天然病毒粒子相似,具有很强的免疫原性和生物学活性。文章介绍了口蹄疫病毒衣壳的组装、口蹄疫病毒VLPs在国内外的研究进展和影响VLPs形成的因素,并对VLPs在疫苗研制等方面的应用前景作了展望。; 张庆勋刘新生周鹏方玉珍王永录张永光; 关键词：口蹄疫病毒病毒样颗粒疫苗

口蹄疫病毒免疫学研究进展被引量：8: 2013年; 口蹄疫是偶蹄动物所患的一种顽固的急性、热性、高度接触性传染病,国际兽疫局(OIE)将其列为通报疫病。一旦暴发,经济损失巨大,影响恶劣。本文从口蹄疫病毒的主要抗原位点、口蹄疫病毒的细胞受体、口蹄疫病毒的免疫机理以及口蹄疫疫苗发展现状等几个方面做一综述。; 胡文发潘丽张永光; 关键词：口蹄疫病毒抗原位点细胞受体免疫机理口蹄疫疫苗

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