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黑龙江省4例HIV-1感染者病毒包膜变异特征分析被引量：1: 2007年; 目的调查HIV-1从供体到受体中病毒包膜序列变异情况，预测结构及其抗原性的变异趋势，为进一步的表型特征和抗HIV免疫研究奠定基础。方法从4例HIV-1感染者外周血单个核细胞中提取DNA，设计跨病毒包膜的保守引物，进行PCR扩增，将扩增产物克隆至表达质粒载体，筛选阳性克隆进行序列测定。采用生物信息学方法对其进行编码氨基酸的变异性、系统发育以及包膜抗原特征进行分析和预测。结果共获得4个病人的8个有完整开放读码框的包膜表达载体。在8个克隆中，包膜糖蛋白gp120内变异程度大的区域分别为信号肽区、可变区V1／V2区、恒定区C2区内近V3区部分、V4和V5区。变异包括点突变、氨基酸插入或缺失等。系统树分析发现所获得病毒克隆为B′型并与云南分离株LTG0218距离最近。抗原性分析结果表明，除CD4结合区相对保守外，4株病毒在多处抗原表位中呈现较大变异性。结论构建并鉴定了4例HIV-1 B′亚型感染者的8个包膜克隆的包膜表达载体。表型预测其均为R5亲嗜性毒株。生物信息学技术分析预测结果表明从供者到受者发生了包膜蛋白变异。; 张唯哲周海舟李妍王福祥马英骥凌虹; 关键词：人类免疫缺陷病毒包膜抗原性

HIV-1 CHLJBF06044包膜特性分析: 2007年; 目的分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)原代分离株CHLJBF06044包膜糖蛋白的变异性及表型特征。方法从一名HIV阳性感染者外周血单个核细胞提取DNA,采用保守引物进行HIV病毒包膜直接克隆,进行序列分析及系统树分析。构建一株带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4和CCR5的靶细胞进行感染实验,观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征。结果共获得2个有功能全Env克隆,分别命名为CHLJBF06044c7和CHLJBF06044c8。获得2个有完整包膜基因的克隆,用全Env氨基酸序列与国内分离株进行系统发育分析结果表明,该株为B′亚型。对包膜蛋白结构分析结果显示,分离株CHLJBF06044c7和CHLJBF06044c8包膜在抗原性和亲水性上没有明显差别。感染性检测结果显示该病毒只能感染U87.CD4.CCR5细胞,不能感染U87.CD4.CXCR4细胞。结论黑龙江省一名HIV-1阳性者克隆到HIV-1 CHLJBF06044病毒的包膜基因,该病毒属于B’亚型(泰国亚型),为CCR5亲嗜性毒株。; 张威周海舟王开利程德春张凤民凌虹; 关键词：包膜

Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白修饰体表达载体的构建及鉴定: 2006年; 目的构建V3环完全或部分缺失的I型人类免疫缺陷病毒(hauman immunodeficiency virus type I,HIV-1)ADA株包膜糖蛋白表达体系。方法分别设计包膜糖蛋白两端及V3环删除区域两端的引物,采用重叠延伸剪接法进行HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体的构建。得到的PCR产物经EcoR I和Xho I双酶切,将酶切产物与pSM载体连接,转化大肠埃希菌后筛选阳性克隆,经PCR及基因序列测定进行鉴定。结果获得HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体PCR产物,构建了其表达载体pSM-ADA△V3和pSM- ADAmV3,经转化和筛选获得了重组质粒,经PCR及基因测序鉴定显示重组质粒序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了V3环修饰的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白的表达载体。此结果为进一步构建伪病毒,观察V3环完全或部分缺失对病毒侵入靶细胞过程的影响,为开发阻止HIV-1进入靶细胞的药物或疫苗打下基础。; 张唯哲李妍周海舟服部俊夫凌虹; 关键词：HIV-1 修饰

一个细胞融合实验体系的建立及初步应用被引量：1: 2007年; 目的建立一个细胞融合实验体系,观察凝血酶(thrombin,Th)对Ⅰ型人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus typeⅠ,HIV-1)包膜糖蛋白(envelope glycoproteins,Env)介导的细胞融合的影响。方法采用携带HIV-1 JRFL株env基因的表达质粒pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与携带HIV-1 tat基因的表达质粒pcTat共转染293T细胞,检测到细胞膜表面Env表达后。将pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat分别按1:2、2:3、1:1、2:1、5:1、10:1共转染293T细胞,然后再与Magic 5A细胞进行融合实验,计数融合细胞数目并确定最适宜的融合条件,建立稳定的细胞-细胞融合实验体系。在所建立融合体系基础上利用Th处理Env表达细胞,观察对融合作用的影响。结果pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat按1:1、2:1共转染293T细胞,可建立稳定的细胞-细胞融合实验体系。Th能够增强细胞融合,且融合细胞数随着Th浓度增高而逐渐增加。Th处理10 min与处理30 min比较,融合增强作用更加显著。结论质粒pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat按1:1、2:1共转染293T细胞,与Magic5A细胞进行融合实验可得到稳定的细胞-细胞融合实验体系,Th对HIV-1包膜介导的细胞融合有促进作用。; 程德春钟国才刘彦虹李宇星张凤民凌虹; 关键词：HIV-1 包膜糖蛋白细胞融合凝血酶

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国家自然科学基金(30471608)