国家自然科学基金(30471601)
- 作品数：14 被引量：44H指数：5
- 相关作者：何韶衡魏继福黄阗刘岳宁傅意玲更多>>
- 相关机构：汕头大学汕头市澄海区人民医院汕头大学医学院第二附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 中华眼镜蛇毒金属蛋白酶诱导人肥大细胞释放组胺的作用被引量：9
- 2006年
- 目的:探索中华眼镜蛇毒金属蛋白酶(MT)对人肥大细胞释放组胺的诱导作用及其机制。方法:用肝素凝胶和Superdex75亲和力凝胶纯化MT。将手术切除的人肺、大肠和扁桃体组织在37℃用Ⅰ型胶原酶和Ⅰ型透明质酸酶消化,悬浮细胞均匀地加入含MT、刺激剂或缓冲液的试管中,进行激发实验并用荧光显色法测量上清液的组胺水平。结果:纯化后的MT在SDS-PAGE上呈1条带。MT能诱导人肺、大肠和扁桃体肥大细胞发生剂量依赖性组胺释放。浓度低至0.03 mg/L时,MT就能诱导大肠肥大细胞显著性的组胺释放,但对于肺和扁桃体的肥大细胞,MT的最低有效浓度分别为0.3 mg/L和30 mg/L。MT诱导大肠和肺肥大细胞组胺释放,12 min时达高峰,而扁桃体肥大细胞的组胺释放则在8 min时达高峰。人大肠、肺和扁桃体肥大细胞经代谢抑制剂和百日咳毒素预处理后,MT诱导其释放组胺的作用明显减弱。缺乏外源性钙、镁离子时,MT诱导肥大细胞释放组胺的能力也明显减弱。结论:MT可能通过G蛋白偶联受体途径激活人肥大细胞,从而参与毒蛇咬伤人体后所发生的病理生理过程。
- 莫雅贞何韶衡魏继福林梓霞傅意玲
- 关键词：肥大细胞中华眼镜蛇毒组胺
- 人脐静脉内皮细胞表达蛋白酶激活受体
- 2011年
- 目的研究蛋白酶激活受体(Protease-activated receptors,PARs)在人脐静脉内皮细胞(Human umbil-ical vein endothelial cells,HUVECs)上的组成型表达。方法采用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)和流式细胞术,检测PARs的mRNA和蛋白质表达。结果未经任何激活剂处理的HUVECs表达PAR1、PAR2和PAR3mRNA。PAR1、PAR2和PAR3的阳性细胞率分别为43.3%、49.2%和56.7%,其平均荧光强度分别为42.1、22.5和24.3。结论 HUVECs组成型表达PAR1、PAR2和PAR3,以为PARs的生理和病理生理功能研究提供依据。
- 牛青霞陈卓毅郑坚林洁莲
- 关键词：内皮细胞蛋白酶激活受体组成型表达
- 抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的制备抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(hSL-PI)单克隆抗体(mAb)。方法以hSLPI为免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗hSLPI mAb。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、Western blot、免疫组化染色法、流式细胞术、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果获得4株可稳定分泌抗hSLPI mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM。Western blot分析表明,此株mAb所识别的靶分子的相对分子质量(Mr)约为12000。免疫组化染色表明,mAb与肺和结肠组织的上皮细胞、疑似肥大细胞、扁桃体和包皮组织的疑似肥大细胞的反应性均呈阳性。流式细胞术分析显示,4株mAb与人肺腺癌细胞系A549细胞中的SLPI均呈阳性反应。激光共聚焦扫描显微镜观察,荧光标记的阳性反应物主要位于A549细胞的胞质内。结论成功地制备抗hSLPI mAb,为变态反应性疾病和炎症性疾病的研究工作提供了有用的试剂。
- 陈玉珍何韶衡周艳春黄阗刘岳宁陈霖霏
- 关键词：单克隆抗体
- IL-12刺激肥大细胞IL-13分泌与ERK信号转导通路的关系被引量：3
- 2009年
- 目的:检测IL-12对肥大细胞介质分泌的影响并探讨其可能的信号转导通路。方法:小鼠肥大细胞P815培养后,用不同浓度IL-12激发后收集细胞和上清,上清用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测组胺、IL-6和IL-13的分泌量,P815细胞用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测信号转导通路蛋白ERK和P38磷酸化情况。结果:不同浓度IL-12(0、1.0、10.0和100.0μg·L-1)激发后,P815细胞IL-13分泌量较基础分泌量均增加,并且随IL-12浓度增加而增加;而P815细胞IL-6和组胺释放量与基础分泌量比较差异均无显著性。ERK信号转导通路抑制剂PD98059、U0126预处理的经不同浓度IL-12激发P815细胞后,细胞内ERK磷酸化百分比较未加抑制剂组均显著降低(P<0.05);且P815细胞IL-13分泌量较未加抑制剂组亦显著降低(P<0.05)。P38信号转导通路抑制剂SB203580预处理的不同浓度IL-12激发P815细胞后,细胞内P38磷酸化百分比与未加抑制剂组比较差异均无显著性;且P815细胞IL-13分泌量与未加抑制剂组比较差异均无显著性。结论:IL-12刺激肥大细胞P815分泌IL-13可能是通过激活ERK信号转导通路实现的。
- 张慧云王顺兰林丽艳林青贝宁何韶衡
- 关键词：肥大细胞白细胞介素12白细胞介素13信号转导
- 变态反应疾病免疫治疗机制的研究进展被引量：7
- 2006年
- 张忠芳何韶衡
- 关键词：变态反应疾病疾病免疫特异性免疫治疗过敏性哮喘过敏症状SIT
- 胰蛋白酶对内皮细胞释放IL-10、IL-12和INF-γ的影响
- 2011年
- 目的研究胰蛋白酶对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放IL-10、IL-12和INF-γ释放的影响。方法分离、培养HUVECs,倒置显微镜观察原代细胞形态变化,免疫荧光染色检测蛋白酶激活受体2(PAR2)表达,ELISA法检测HUVECs培养上清中IL-10、IL-12和INF-γ水平。结果贴壁后的原代HUVECs经历呈圆形或类圆形、梭性和多角形的形态变化。HUVECs表达PAR2,荧光分布于细胞周边。胰蛋白酶诱导HUVECs上清中的IL-10和IL-12水平显著升高,INF-γ水平几乎未被检出。蛋白酶激活受体-2抑制剂能够降低胰蛋白酶诱导的IL-10和IL-12水平。结论胰蛋白酶可能通过PAR2激活促进内皮细胞释放IL-10和IL-12。
- 牛青霞郑坚陈卓毅林洁莲
- 关键词：胰蛋白酶白细胞介素-12Γ干扰素
- 蛋白酶激活受体-2激活剂对人脐静脉内皮细胞释放IL-1α的影响
- 2011年
- 目的研究蛋白酶激活受体-2(protease-activated receptor-2,PAR2)激活剂对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)释放白细胞介素(IL)-1α的影响。方法分离、培养原代HU-VECs。胰蛋白酶和PAR2激活肽刺激HUVECs 16 h,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HUVECs培养上清中的IL-1α水平。结果胰蛋白酶和PAR2激活肽诱导HUVECs培养上清中IL-1α水平显著升高,升高水平分别为基础水平的4.8和4.6倍。相应浓度的对照肽则不能够诱导HUVECs释放IL-1α。大豆胰蛋白酶抑制剂和PAR2抑制肽能够显著抑制胰蛋白酶和PAR2激活肽诱导的IL-1α分泌。结论 PAR2激活剂能够通过诱导HUVECs释放IL-1α参与炎症反应。
- 牛青霞林洁莲郑坚陈卓毅
- 关键词：蛋白酶激活受体白细胞介素-1
- 白眉蝮蛇蛇毒中L-氨基酸氧化酶的分离及其诱导急性肺损伤的作用被引量：7
- 2006年
- 目的:从白眉蝮蛇蛇毒分离纯化L-氨基酸氧化酶,并研究其对肺组织的影响.方法:通过Heparin-Sepharose FF及Q-Sepharose HP从白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化得到一个L-氨基酸氧化酶,命名为ABU-LAO.给Balb/c小鼠静脉注射50,5,0.5μg药物或生理盐水100μL,每组6只,6 h或24 h后取材,肺组织常规切片,HE染色.高倍镜视野下计算平均红细胞数(RBCs)、平均肺泡内多形核白细胞数(IAPLs)、平均肺泡隔多形核白细胞数(ASPLs);用图像分析仪测平均肺泡面积(MACA).结果:纯化ABU-LAO并在SDS-PAGE上测定其表观M r约为60000.与生理盐水组相比RBCs,IAPLs,ASPLs,MACA在注射ABU-LAO后有显著改变(P<0.0125).结论:通过两步层析法分离纯化得到ABU-LAO,它能诱导小鼠发生严重的急性肺损伤.
- 魏晓龙魏继福黄阗陈秋玉刘岳宁何韶衡
- 关键词：L-氨基酸氧化酶白眉蝮蛇急性病小鼠近交BALBC
- 蛋白酶活化受体-1单克隆抗体的制备与鉴定
- 2007年
- 目的制备蛋白酶活化受体-1(PAR-1)单克隆抗体(mAb)。方法以PAR-1特异性片段为免疫原(13肽)免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗PAR-1 mAb。采用捕获酶联免疫吸附试验(capture ELISA)鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、Dot blot、免疫组化染色法、流式细胞仪分析、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果获得2株可稳定分泌抗PAR-1 mAb的杂交瘤细胞,其亚型分别为IgMI、gG2b。免疫组化染色表明,mAb与人扁桃体、结肠组织中的淋巴细胞、包皮组织中的成纤维细胞、肺组织中的巨噬细胞反应呈阳性。流式细胞仪分析显示,2株mAb与人肺腺癌细胞系A549细胞胞浆内及细胞膜上的PAR-1均呈阳性反应。激光共聚焦扫描显微镜观察,荧光标记的阳性反应物在A549细胞胞浆内及细胞膜上均可见。结论成功地制备出抗PAR-1 mAb,为进一步研究炎症性疾病提供有用的试剂。
- 马文静何韶衡周艳春陈玉珍黄阗方泽漫陈霖霏
- 关键词：蛋白酶活化受体-1单克隆抗体酶联免疫吸附试验
- 金环蛇L-氨基酸氧化酶诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的研究被引量：8
- 2006年
- 目的:探讨金环蛇毒中L-氨基酸氧化酶对人脐静脉内皮细胞株(HUVCE)增殖和凋亡作用的影响。方法:通过阳离子交换层析和肝素亲和层析从金环蛇蛇毒中分离纯化到一个L-氨基酸氧化酶,SDS电泳鉴定其纯度。SDS电泳和HPLC凝胶过滤确定其分子量,并采用MTT法、流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测L-氨基酸氧化酶对人脐静脉内皮细胞株生长情况、细胞周期以及细胞形态的影响。结果:通过两步层析法从金环蛇毒中分离得到L-氨基酸氧化酶,L-氨基酸氧化酶的表观分子量通过SDS-PAGE测定约为60kD,通过凝胶过滤测定分子量为70kD。L-氨基酸氧化酶作用于HUVCE细胞12h后,细胞的生长明显受到抑制,L-氨基酸氧化酶作用的半数抑制量为2·8mg/L。流式细胞仪直方图上可见明显的亚二倍体峰,随着L-氨基酸氧化酶作用浓度的增加,凋亡率增加(P<0·05),细胞分裂增殖指数降低(P<0·05);激光共聚焦显微镜观察0·03mg/L的L-氨基酸氧化酶作用12h细胞出现早期凋亡,3mg/L的L-氨基酸氧化酶作用12h细胞核浓缩,部分细胞碎裂。结论:通过两步层析法从金环蛇毒中分离得到L-氨基酸氧化酶,该氨基酸氧化酶是由单亚基组成的。L-氨基酸氧化酶能诱导HUVCE凋亡从而对其生长具有抑制作用。
- 魏继福杨海伟乔丽雅魏晓龙何韶衡
- 关键词：内皮细胞细胞周期细胞凋亡
