国家自然科学基金(81070287)
- 作品数：20 被引量：70H指数：5
- 相关作者：张建新党胜春王平江冯舒沈耀更多>>
- 相关机构：江苏大学附属医院江苏大学乐山市人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省博士后科研资助计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 一氧化氮合酶基因转染小鼠内皮祖细胞的实验研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨利用脂质体介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因体外转染小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPC)的可行性。方法密度梯度离心法分离ICR小鼠骨髓来源单个核细胞培养制备小鼠EPC并鉴定;构建、扩增、提取并纯化pcDNA3.0/eNOS基因质粒;用EPC培养基配成2×105·mL-1细胞悬液,按0.6 mL/孔重新铺6孔板,待细胞生长至80%左右融合时,用脂质体LipofectamineTM2000体外转染eNOS基因至EPC。转染48 h后,采用RT-PCR检测EPC中eNOS的表达,硝酸还原酶法检测EPC中一氧化氮(NO)的含量,荧光探针DCFH-DA活性氧检测氧自由基(ROS)的含量。结果成功培养EPC,成功构建pcDNA3.0/eNOS基因载体。转染48 h后,EPC中eNOS表达量明增加(P<0.01),NO含量明显升高(P<0.01),ROS含量明显降低。结论脂质体介导eNOS基因能够有效转染小鼠EPC,并能在EPC中有效表达。
- 党胜春陈荣芳王平江冯舒张建新
- 关键词：内皮祖细胞内皮型一氧化氮合酶基因一氧化氮氧自由基
- 一种小鼠胰腺星状细胞分离培养方法被引量：1
- 2012年
- 本研究旨在建立一种简便的小鼠胰腺星状细胞分离培养方法，现报道如下。
一、材料与方法
我们参考吴恺等分离培养大鼠胰腺星状细胞的方法，建立起一种新的小鼠胰腺星状细胞分离培养方法：组织块分离法。具体方法如下：首先采用多聚赖氨酸包被培养瓶，多聚赖氨酸可以使组织贴壁更加牢靠，同时增加细胞贴壁能力。
- 范昕卢旷逸马小艳张建新
- 关键词：胰腺星状细胞分离培养方法小鼠多聚赖氨酸组织块
- 氯屈膦酸二钠-超顺磁性氧化铁脂质体减轻重症急性胰腺炎肾损伤(英文)被引量：2
- 2014年
- 研究目的:探讨氯屈膦酸二钠-超顺磁性氧化铁(SPIO)脂质体对重症急性胰腺炎(SAP)肾损伤的保护作用。创新要点:围绕SAP并发多器官损伤这一核心问题,联系巨噬细胞在SAP发病过程中的作用,使用纳米脂质体携带氯屈膦酸二钠及SPIO,以及利用自体巨噬细胞对SAP时多器官损伤的定性靶向性以及磁性纳米颗粒的超顺磁性,应用磁共振成像(MRI)对SAP并发多器官损伤进行早期诊断。结合使用氯屈膦酸二钠,使其促进巨噬细胞的凋亡,减少其在急性胰腺炎早期产生炎症介质,阻止全身性炎症反应的进程,从而实现对多器官损伤的保护作用。研究方法:采用胰腺被膜下均匀注射5%牛磺胆酸钠制作SAP模型。SD大鼠48只,随机分为对照组(C组)、空白SPIO脂质体组(P组)和氯屈膦酸二钠+SPIO脂质体组(T组)。P组和T组大鼠制作SAP模型。制模2 h和6 h后取肠系膜上静脉血液,检测各组大鼠血清中淀粉酶、尿素氮、血肌酐和肿瘤坏死因子-α的含量,观察胰腺及肾组织的病理学变化及进行病理评分,通过检测肾组织的TUNEL染色及CD68表达研究氯屈膦酸二钠-超顺磁性氧化铁脂质体对肾组织巨噬细胞凋亡的影响并进行MRI诊断。重要结论:氯屈膦酸二钠-超顺磁性氧化铁脂质体可选择性清除单核/巨噬细胞,减少炎症介质释放,对SAP大鼠胰腺及肾损伤有保护作用。SPIO可作为MRI示踪。
- Sheng-chun DANGYan-hua ZENGPing-jiang WANGBao-ding CHENRong-fang CHENArun KUMAR SINGHPankaj KUMARShu FENGLei CUIHao WANGJian-xin ZHANG
- 关键词：氯屈膦酸二钠超顺磁性氧化铁巨噬细胞重症急性胰腺炎肾损伤
- 长链非编码RNA在脂多糖刺激的大鼠肠巨噬细胞中的差异表达被引量：3
- 2017年
- 目的:探讨脂多糖(LPS)诱导的肠巨噬细胞炎症反应与长链非编码RNA(lncRNA)表达的关系。方法:分离培养大鼠肠巨噬细胞,用lncRNA表达谱芯片技术检测LPS处理的大鼠肠巨噬细胞(实验组)和无处理的大鼠肠巨噬细胞(对照组)之间差异表达的lncRNA,并用分层聚类的方法分析了基因芯片数据;构建差异表达的lncRNA-mRNA共表达网络,利用GO分析和通路分析预测其生物学功能;最后用RT-qPCR对部分差异表达的lncRNA进行验证。结果:与对照组比较,实验组共检测出357个差异表达的lncRNA(差异表达倍数>1.5),其中上调的有245个,下调的有112个。GO分析和通路分析显示差异表达的lncRNA参与多种生物过程,包括炎症反应,免疫应答和细胞凋亡,其中lncRNA NONMMUT024673、NONMMUT047081在网络中可能起重要作用。RT-qPCR验证NONMMUT024673、NONMMUT047081的表达,结果与基因芯片数据一致。结论:LPS可诱导大鼠肠巨噬细胞lncRNA表达改变,这些差异表达的lncRNA可能参与调控LPS诱导的肠巨噬细胞的炎症反应。
- 刘路路邹松钱小宝陈吉祥瞿建国崔磊张建新党胜春
- LP17对大鼠肠巨噬细胞超微结构的影响
- 2015年
- 目的:通过观察LP17对体外培养的大鼠肠巨噬细胞超微结构的影响,探讨LP17对激活的肠巨噬细胞的作用机制,寻找对肠黏膜屏障功能障碍的可能治疗方法。方法:体外分离、培养大鼠肠巨噬细胞分为对照组[未加脂多糖(LPS)和LP17处理],及实验组[包括LPS组(用LPS处理)和LPS+LP17组(用LPS及LP17处理)]。给药浓度为LPS 1 mg/L,LP17 0.1 mg/L,培养6 h后用0.25%胰酶消化收集细胞。Tecnai 12透射电镜观察实验组及对照组大鼠肠巨噬细胞的超微结构变化。结果:经药物处理后,电镜下观察,对照组为正常巨噬细胞,实验组中LPS组巨噬细胞内出现大量溶酶体,LPS+LP17组巨噬细胞出现凋亡小体。结论:LP17能促使被激活的巨噬细胞凋亡。
- 张建新陈志明党胜春冯舒王平江
- 关键词：髓系细胞触发受体-1肠黏膜屏障功能障碍
- 髓系细胞触发受体-1对重症急性胰腺炎大鼠肠屏障功能的影响被引量：10
- 2011年
- 目的探讨髓系细胞触发受体-1（triggering receptor-1 on myeloid cells，TREM-1）的表达与重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）肠屏障功能障碍的关系。方法雄性Wistar大鼠64只，随机（随机数字法）分为假手术组（SO）和SAP组，每组32只，采用逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠制备SAP大鼠模型，分别于造模后2，6，12，24h时点取血和回肠组织。改良分光光度法检测血浆D-乳酸、二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）和内毒素浓度。逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测回肠组织TREM-1、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor—α，TNF—α）mRNA的表达水平。对数据进行单因素方差分析和spearman相关性分析，P〈0．05表示差异具有统计学意义。结果SAP组各时点血浆D一乳酸、DAO和内毒素的水平均高于假手术组（P〈0．01，P〈0．05）；SAP组各时点回肠组织TREM-1，IL-1β和TNF-α mRNA的表达水平较假手术组显著增高（P〈0．01，P〈0．05），TREM-1 mRNA表达水平与IL-1β及TNF—α mRNA表达水平均呈正相关（r=0．956，P=0．044；r=0．986，P=0．015），IL-1β mRNA表达水平与TNF—α mRNA表达水平无明显相关性（P=0．133）。结论SAP时，大鼠肠组织内TREM-1表达上调，促进炎症介质释放和肠黏膜损伤加重，TREM-1在SAP肠屏障功能障碍的发生发展中起重要作用。
- 殷凯党胜春张建新
- 关键词：重症急性胰腺炎髓系细胞触发受体-1肠屏障功能障碍白细胞介素-1Β
- 大鼠重症急性胰腺炎肺损伤时髓系细胞触发受体-1的表达被引量：3
- 2013年
- 目的探讨重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）引起急性肺损伤（acute lung injury，ALI）时髓系细胞触发受体一1（triggering receptor-1 on myeloid cells，TREM-1）以及相关炎症因子的表达。方法雄性SD大鼠24只，随机（随机数字法）分为SO组（假手术组）、SAP组和SAP＋LP17组（LP17为人工合成的TREM-1多肽），每组8只，采用逆行胰胆管技术制备SAP大鼠模型。于造模后12h提取胰腺及左肺组织，苏木精-伊红（HE）染色观察胰腺和肺组织的病理形态学变化；免疫组织化学法采用巨噬细胞特异性抗体CD68检测巨噬细胞浸润情况；通过荧光定量聚合酶链反应（QRT—PCR法）检测肺组织TREM-1、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）mRNA的表达量。计量资料采用均数4-标准差（^-x±s）表示，采用SPSS17．0统计软件进行单因素方差分析，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果HE染色结果显示，SAP组胰腺及肺组织损伤程度均较SO组及SAP＋LP17组增高，其病理评分均较SO组及SAP＋LP17组高（P〈0．05）；免疫组化染色结果显示，SAP组肺组织巨噬细胞较SO组浸润明显；SAP组肺组织TREM-1 mRNA的表达水平较SO组及SAP＋LP17组均显著增高（P〈0．01或P〈0．05），IL-1β和TNF-α mRNA表达水平亦较SO组及SAP＋LP17组显著增高（P〈0．01或P〈0．05）。结论TREM-1在SAP急性肺损伤中表达显著增高，可能是SAP引起ALI机制中的一个重要炎症调节介质。LP17可以有效降低TREM-1的表达，减少炎症因子的释放，从而有利于减轻SAP引起的ALI。
- 祝文蕊党胜春张晨王坤沈耀王平江端礼荣侯雯跻张建新
- 关键词：急性肺损伤髓系细胞触发受体-1白细胞介素-1
- 髓系细胞触发受体-1对大鼠肠巨噬细胞凋亡的影响被引量：1
- 2015年
- 目的 探讨髓系细胞触发受体-1 （triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1）的表达对大鼠肠巨噬细胞凋亡的影响.方法 体外培养肠巨噬细胞,实验3分组,每组6孔：对照组、LPS组及LPS＋LP17组.加入药物LPS（1 mg/L）和LP17 （0.1 mg/L）,培养6h后用TUNEL试剂盒及流式细胞仪对大鼠肠巨噬细胞凋亡进行检测,利用SPSS 18.0软件进行统计分析.结果 细胞生长状态良好,分布均匀,细胞活力约为80％～85％,CD14免疫荧光鉴定证实为肠巨噬细胞.经药物处理后,TUNEL检测细胞凋亡情况：LPS组（44.33±7.74）％较对照组（19.17±6.01）％明显增多（P=0.000）,LPS＋ LP17组（28.33±6.53）％的凋亡细胞比LPS组（44.33±7.74）％明显减少（P =0.004）,对照组（19.17 ±6.01）与LPS＋ LP17组（28.33±6.53）％的凋亡细胞差异无统计学意义（P =0.050）.采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况：LPS组（16.47±1.66）％较对照组（7.70±1.52）％明显增多（P=0.000）,LPS＋LP17组（11.47±3.12）％的凋亡细胞比LPS组（16.47±1.66）％明显减少（P=0.018）,对照组（7.70±1.52）％与LPS＋ LP17组（11.47±3.12）％的凋亡细胞差异无统计学意义（P =0.061）.结论 LP17能抑制肠巨噬细胞TREM-1的表达,减少肠巨噬细胞凋亡.
- 党胜春冯舒刘彬陈志明王平江顾敏张建新
- 关键词：髓系细胞触发受体-1凋亡脂多糖肠黏膜屏障TUNEL流式细胞
- TLR9对胰腺癌裸鼠增殖生长及化疗耐药性的研究
- 2017年
- 目的观察TLR9在不同的活化状态下对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长及药物抗性的影响。方法建立人胰腺癌PANC-1细胞裸鼠移植肿瘤模型,并随机分为6组:无菌生理盐水组、TLR9激动剂、TLR9抑制剂组、吉西它滨组、TLR9抑制剂+吉西它滨组、TLR9激动剂+吉西它滨组进行实验。游标卡尺记录肿瘤体积大小及生长情况,采用免疫组化方法检测肿瘤TLR9受体表达情况,核磁共振成像(MRI)观察肿瘤生长、转移及周围组织侵犯情况。结果吉西他滨组、TLR9激动剂+吉西它滨组、TLR9抑制剂+吉西它滨组肿瘤摘除后体积及生长速度明显小于其他组(P<0.05),TLR9激动剂+吉西它滨组生长速度及肿瘤摘除后体积明显大于TLR9抑制剂+吉西它滨组及吉西他滨组(P<0.05),TLR9抑制剂+吉西它滨组与吉西他滨组比较,差异有统计学意义(P<0.05),TLR9激动剂组、TLR9抑制剂组及生理盐水组差异无统计学意义(P>0.05)。种植后7周小鼠在MRI下观察,瘤成椭圆形,境界清楚,周围组织未见明显转移及对周围组织的侵犯;检测肿瘤组织中并鉴定表面明确有TLR9的表达。结论胰腺癌裸鼠移植瘤中确有TLR9的阳性表达,TLR9的激活可以明显降低胰腺癌对吉西他滨化疗的敏感性,增加肿瘤的耐药性,相反促进肿瘤生长。
- 刘宇雷泽华杜波王志旭高峰畏王清张建新
- 关键词：胰腺肿瘤裸鼠吉西他滨
- 小鼠骨髓源性内皮祖细胞的体外培养及标志物鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨小鼠骨髓来源的血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的体外培养、诱导分化及表面标志物的鉴别。方法:收集ICR小鼠骨髓EPCs,Ficoll分离单核细胞,使用含有血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)的培养基培养。分别在细胞培养5,10,15及20 d后检测细胞表面的内皮细胞标志物。结果:培养5 d后细胞开始出现上皮细胞的形态,有伪足出现;培养10 d,细胞开始增殖,成圆形,出现梭形细胞;培养15 d,细胞出现较为典型的内皮细胞形态,铺路石状;培养20 d,细胞出现长梭形拉网状,即类似成熟内皮细胞形态。免疫荧光染色及流式定量检测结果显示,CD34在EPCs中的表达随培养时间延长有渐变减弱的趋势;血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)在EPCs的表达随培养时间延长有渐变增强的趋势。结论:骨髓EPCs在特定诱导条件下可分化出典型的成熟内皮细胞,取材方便,扩增能力较强。
- 党胜春陈纪芳冯舒刘彬王平江张建新
- 关键词：骨髓内皮祖细胞体外培养
