东莞市科技计划项目(200910815229)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：张国良郑学宝杨辉邓小凤姚思敏更多>>
- 相关机构：深圳市第三人民医院广东医学院深圳市宝安区慢性病防治院更多>>
- 发文基金：东莞市科技计划项目深圳市科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用果蝇S2细胞高效表达甲型H1N1流感病毒可溶性HA蛋白及其活性分析被引量：1
- 2013年
- 目的应用果蝇s2细胞表达甲型H1Nl流感病毒可溶性HA蛋白，并评估其免疫活性。方法以甲型H1N1流感A／Shenzhen／7I／09病毒株作为模版，采用RT-PCR技术扩增HA基因，构建持续性表达载体pAC5．1-HA，协同筛选载体pCoblast共转染至s2细胞，通过Blasticindin抗生素筛选获得稳定转染的s2细胞株。利用WesternBlot技术鉴定细胞上清HA蛋白表达，使用Ni亲和柱纯化重组HA蛋白。使用HA免疫BALB／c小鼠3次，利用ELISA检测HA特异性抗体效价。结果成功克隆A／Shenzhen／7I／09HA基因，长度约1．7×10^3bp。将HA基因克隆入pAC5．1-V5／His载体，经过转染、抗生素筛选后获得稳定表达HA的s2细胞株，目的蛋白以分泌形式表达于上清，相对分子质量约75×10^3D。免疫小鼠后可诱导机体产生抗HA特异性抗体，免疫后10d、30d效价分别为1：1280、1：5120。结论获得可溶性表达的HA蛋白，并具有良好的免疫活性，为后期流感免疫诊断试剂的研制、亚单位疫苗的开发、单克隆抗体的制备奠定了基础。
- 姚思敏林巧张国良杨辉邓小凤聂广郑学宝刘映霞
- 关键词：果蝇属流感病毒A型血凝素类
- 白细胞介素-1β基因多态性与新型甲型H1N1流感的关系被引量：1
- 2012年
- 目的探讨白细胞介素-1β（IL-1β）基因单核苷酸多态性（SNP）与新型甲型H1N1流感易感性的关系。方法针对IL-1β基因5’端的4个SNP位点（rs1143623,rs1143639,rs16944,rs3917345）,使用飞行时间质谱分析技术（TOF-MS）对167例H1N1流感组患者和192例健康对照组人群检测其基因多态性。结果rs16944有A和G两种等位基因,H1N1组A等位基因频率为61.9%,对照组为49.5%,差异有统计学意义（χ2=10.761,P=0.001,OR=0.602,95%CI0.444~0.816）;rs1143639有G和A两种等位基因,G等位基因频率在H1N1组中为95.5%,对照组为98.7%,差异也有统计学意义（χ2=6.708,P=0.0096,OR=3.564,95%CI 1.281~9.917）;其余两个位点在两组人群间无统计学意义。结论rs16944和rs1143639位点与新型甲型H1N1流感易感性相关。
- 杨辉张国良汪文斐陈心春郑学宝吴爱武
- 关键词：白细胞介素-1Β单核苷酸多态性甲型H1N1流感
- 新型甲型H1N1流感病毒深圳分离株HA基因的克隆与进化
- 2012年
- 目的分析2009年新型甲型H1N1流感病毒深圳分离株A/Shenzhen/71/09血凝素(Hemagglutinin,HA)基因序列,探讨其基因变异与分子进化。方法采用RT-PCR技术扩增A/Shenzhen/71/09 HA基因片段并进行测序,利用Cluster和Mega3.1软件对不同亚型毒株HA基因核苷酸序列进行分析,绘制发育进化树。结果A/Shenzhen/71/09毒株HA基因包含HA1和HA2两个片段,长度分别约为1 032bp和669bp,HA蛋白裂解位点为VPSIQSR↓GLF,不含连续碱性氨基酸。进化分析表明该病毒株与其它亚型病毒株遗传距离较远,而与深圳地区同期分离的其它H1N1毒株高度同源,同源性在99.0%以上。结论新型甲型H1N1流感病毒HA基因不具备高致病流感病毒序列特征,深圳地区同期分离的毒株变异率低,但仍需密切关注新型甲型流感的传播情况。
- 张国良邹颖杨辉朱宇珍迟宏罡刘映霞郑学宝
- 关键词：甲型H1N1流感病毒血凝素进化分析
- 甲型H1N1流感病毒NA蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备
- 2012年
- 目的:利用原核系统表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白,制备NA特异性单克隆抗体。方法:采用RT-PCR技术扩增A/Shenzhen/71/09病毒株NA基因,通过原核表达系统表达含6×His标签NA重组蛋白,利用镍离子亲和柱进行纯化。使用NA蛋白以100g/只剂量免疫BALB/C小鼠,3次免疫后,利用杂交瘤技术筛选分泌NA特异性单克隆抗体的细胞株,采用Western-blot方法对单抗进一步验证。结果:成功克隆A/Shenzhen/71/09NA基因,长度约1400bp。将NA基因克隆入原核表达载体pET-21b(+),经IPTG诱导后在大肠杆菌包涵体中检测到目的蛋白,分子量约50kd。采用尿素变性处理后借助6×His标签对蛋白进行纯化。用纯化蛋白免疫小鼠,将脾细胞与SP2/0细胞融合,使用ELISA检测细胞上清NA抗体,共筛选1株持续分泌NA抗体的杂交瘤细胞株7C11。Western-blot验证该单克隆抗体可以特异性结合NA抗原。结论:成功表达甲型H1N1流感NA蛋白,获得1株分泌NA抗体的单克隆细胞株,从而为后续甲流诊断及疫苗研制奠定基础。
- 林巧姚思敏张国良杨辉邓小凤杨榕青聂广郑学宝刘晋洪
- 关键词：甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶单克隆抗体
