国家自然科学基金(30471649)
- 作品数：31 被引量：237H指数：10
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- 自制肝素亲和柱分离纯化载脂蛋白H及其抗体制备与鉴定被引量：6
- 2008年
- 目的:自制肝素-琼脂糖6B亲和柱提纯人血清载脂蛋白H(apoH),免疫制备多克隆抗体,为大量制备与进一步研究做准备。方法:利用间接还原胺化法制备亲和层析柱,并优化反应条件。运用高氯酸沉淀、离子交换及亲和层析从人血清中纯化抗原,制备兔源多克隆抗体。结果:自制亲和柱肝素结合量约5mg/g(介质体积)。纯化的抗原经SDS-PAGE鉴定分子量约50kD,无杂带;16种氨基酸组成分析结果与报道一致。多克隆抗体与购置的国外抗体一样,在进行ELISA与dot-ELISA时与小牛血清白蛋白有交叉反应;但在变性且还原的条件下,Western blot结果显示无交叉反应。结论:自制亲和柱成本低、亲和性好、肝素结合稳定,用之分离纯化得到了高纯度apoH;兔多克隆抗体用于检测血清中载脂蛋白H含量时需进一步纯化。
- 王相栋张春妮汪俊军田迎
- 关键词：肝素载脂蛋白H抗体
- 经皮冠状动脉介入导致ACS患者脂蛋白（a）和氧化脂蛋白（a）水平升高机制研究被引量：5
- 2010年
- 目的 研究PCI治疗对ACS患者脂蛋白（a）[Lp（a）]、氧化脂蛋白（a）[ox-Lp（a）]水平的影响和机制.方法 收集75例ACS患者PCI前、后、24 h、2 d、3 d和6个月后各时间点,以及29例未行PCI术的对照组冠状动脉造影前、后血标本;采用ELISA法测定Lp（a）、OX-Lp（a）、Lp（a）免疫复合物[Lp（a）-IC]和自身抗体水平;冠状动脉造影确认病变程度.手术前后各指标的变化采用配对t检验;PCI前、后不同时间点Lp（a）、ox-Lp（a）相对变化值间比较采用方差分析;Lp（a）与ox-Lp（a）、冠状动脉病变程度与Lp（a）、ox-Lp（a）变化值间相关性采用直线相关分析.结果 PCI术后Lp（a）水平[233.10（152.86～328.79）mg/L]高于术前[202.05（106.15～271.42）mg/L],差异有统计学意义（数据经对数转换后分析,t=6.81,P〈0.01）;PCI术后ox-Lp（a）[19.05（10.98～31.80）mg/L]与术前[10.51（4.98～17.97）mg/L]相比升高,差异有统计学意义（数据经对数转换后分析,t=13.22,P〈0.01）;PCI术后Lp（a）-IC[2.72（1.60～4.91）AU]与术前[2.11（1.04～3.97）AU]相比升高,差异有统计学意义（数据经对数转换后分析,t=3.34,P〈0.01）;而PCI术后自身抗体（A=0.81±0.33）与术前（A=0.72±0.28）相比降低,差异有统计学意义（t=5.58,P〈0.01）.PCI前（r=0.66,P〈0.01）、后（r=0.62,P〈0.01）ox-Lp（a）水平均与Lp（a）高度相关.PCI导致Lp（a）、ox-Lp（a）水平急速升高,24 h内快速下降,2～3 d内接近术前水平.Lp（a）、ox-Lp（a）变化值均与冠状动脉病变程度呈正相关.对照组造影前后Lp（a）、ox-Lp（a）、Lp（a）-IC和Lp（a）自身抗体水平均无变化.结论 PCI导致ACS患者Lp（a）、ox-Lp（a）水平升高,其增加值与冠状动脉病变程度相关.
- 汪俊军韩爱忠宫剑宾张春妮李克
- 关键词：急性冠状动脉综合征自身抗体
- γ干扰素增强LDL免疫复合物诱导的U937细胞MMP-1表达
- 动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)斑块周围存在大量激活的 T 淋巴细胞,分泌γ干扰素(inter- feron-γ,IFN-γ)等炎性细胞因子。IFN-γ对 As 的影响作用复杂,一方面,IFN-γ抑制...
- 孟扬顾振华张春妮汪俊军
- 文献传递
- 脂蛋白(a)免疫复合物对U937细胞基质金属蛋白酶1及其抑制物的作用被引量：2
- 2008年
- 目的探讨脂蛋白(a)免疫复合物对U937细胞基质金属蛋白酶1及其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA表达的影响。方法分别采用不同浓度的天然脂蛋白(a)、氧化型脂蛋白(a)及其免疫复合物作用U937细胞,通过半定量RT-PCR分析U937细胞中基质金属蛋白酶1和组织金属蛋白酶抑制剂1基因表达的变化。结果正常U937细胞低表达基质金属蛋白酶1(0.076±0.012),而高表达组织金属蛋白酶抑制剂1(0.973±0.031)。等量的天然脂蛋白(a)、氧化型脂蛋白(a),及其免疫复合物作用后,基质金属蛋白酶1mRNA表达量分别为0.361±0.016,0.330±0.019,0.106±0.006和0.089±0.008;组织金属蛋白酶抑制剂1表达量分别为0.229±0.017,0.360±0.018,0.157±0.025和0.967±0.031。天然脂蛋白(a)对细胞基质金属蛋白酶1和组织金属蛋白酶抑制剂1mR-NA表达没有影响。氧化型脂蛋白(a)引起基质金属蛋白酶1轻度表达,但显著地下调组织金属蛋白酶抑制剂1的表达;而天然、氧化型脂蛋白(a)免疫复合物均非常显著地增加基质金属蛋白酶1和降低组织金属蛋白酶抑制剂1的mRNA表达(P<0.001),且较氧化型脂蛋白(a)对基质金属蛋白酶1的作用更为显著(P<0.001),并呈剂量效应关系。结论脂蛋白(a)免疫复合物增强U937细胞基质金属蛋白酶1mRNA表达,下调其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1的表达。
- 汪俊军顾振华孟扬张春妮
- 关键词：脂蛋白免疫复合物基质金属蛋白酶1组织金属蛋白酶抑制剂1
- 采用自身抗体建立氧化脂蛋白(a)水平的ELISA检测法被引量：3
- 2007年
- 目的提取和鉴定人血清中氧化脂蛋白(a)[ox-Lp(a)]自身抗体,建立 ox-Lp(a)ELISA 检测法并进行临床研究。方法采用溴化氰活化的 sepharose 4B 交联 ox-Lp(a)制备免疫吸附层析柱,从正常人血清中提取抗 ox-Lp(a)自身抗体,分析其免疫反应性。分别建立以抗 ox-Lp(a)的自身抗体、抗氧化 LDL(ox-LDL)多克隆抗体为包被抗体,酶标抗载脂蛋白(a)[apo(a)]为检测抗体的ox-Lp(a)ELISA 检测法,并对100例冠心病患者和100名健康体检人群进行分析。结果8份正常人血清中均存在抗 ox-Lp(a)自身抗体,与 ox-Lp(a),ox-LDL 均具有良好的反应性;再经亲和层析除出抗 ox-LDL 自身抗体后,2份标本同 ox-Lp(a)仍具有较高的反应性。同对照组相比,本组冠心病患者血浆 Lp(a)水平显著升高[(279.6±162.7)mg/L 比(206.3±126.4)mg/L,P<0.01];ox-Lp(a)水平亦明显增加(P<0.01),采用自身抗体和抗 ox-LDL 抗体建立的 ELISA 法测定结果分别为:(24.3±33.4)μg/ml 比(8.4±9.3)μg/ml 和(13.0±13.8)μg/ml 比(7.3±9.7)μg/ml;两种 ELISA 法间结果高度相关(r=0.78,P<0.01)。结论提取的人血清 ox-Lp(a)自身抗体可识别 apo(a)和 apoB 氧化位点,采用自身抗体建立的 ox-Lp(a)检测法能更真实、准确地反应体内 Lp(a)的氧化状态,冠心病患者 ox-Lp(a)水平显著升高。
- 汪俊军付丽顾振华张春妮
- 关键词：自身抗体动脉硬化
- 氧化低密度脂蛋白循环免疫复合物诱导巨噬细胞胆固醇酯蓄积被引量：23
- 2005年
- 目的:探讨氧化、天然低密度脂蛋白循环免疫复合物(Ox -LDL- IC)致动脉粥样硬化作用。 方法:采用人源的氧化、天然LDL与异源的抗载脂蛋白B(apoB)结合制备IC,观察不同浓度的Ox- LDL -IC对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇酯蓄积和泡沫细胞形成的影响。 结果:氧化、天然LDL- IC均可引起巨噬细胞内胆固醇酯大量堆积,其效果强于Ox -LDL(P<0. 001),而且随剂量的增加而升高,并转化为泡沫细胞;而天然LDL、抗apoB处理的巨噬细胞内未见胆固醇酯的堆积。 结论:LDL- IC可导致巨噬细胞转化为泡沫细胞,参与动脉粥样硬化的形成。
- 汪俊军李雯刘恋周毓张春妮范乐明
- 关键词：低密度脂蛋白自身免疫巨噬细胞泡沫细胞
- 高脂血症人群血清胆固醇酯转运蛋白的水平被引量：6
- 2006年
- 目的分析不同高脂血症人群血清胆固醇酯转运蛋白水平及其对血浆各脂蛋白间脂质转运的调节作用。方法脂蛋白电泳结合酶显色法分别检测血清各脂蛋白中的甘油三酯含量;酶联免疫吸附试验测定血清胆固醇酯转运蛋白和氧化型低密度脂蛋白水平;分析胆固醇酯转运蛋白与脂质水平间的相关性。结果高甘油三酯组、高胆固醇组、混合组和对照组中胆固醇酯转运蛋白水平分别为1.89±1.32、2.37±1.30、2.33±1.73和1.58±1.00 mg/L,与对照组比较,高甘油三酯组变化无显著性(P>0.05),高胆固醇组(P<0.01)和混合组均升高(P<0.05)。高脂血症人群高密度脂蛋白中胆固醇/甘油三酯比值降低;高甘油三酯组和混合组低密度脂蛋白中甘油三酯/胆固醇比值升高,高胆固醇组无差别,其中高甘油三酯组变化程度最大,混合组次之,高胆固醇组最小;且胆固醇酯转运蛋白水平与上述比值相关。高脂血症人群血清氧化型低密度脂蛋白水平升高,与低密度脂蛋白中甘油三酯/胆固醇比值高度呈正相关。结论高脂血症人群胆固醇酯转运蛋白水平升高,促进了脂蛋白间脂质转运,使高密度脂蛋白和低密度脂蛋白脂质组成发生变化,促进了动脉粥样硬化的发生和发展。
- 汪俊军顾勤花张春妮
- 关键词：病理学与病理生理学胆固醇酯转运蛋白脂蛋白胆固醇酯高脂血症
- 人血清氧化低密度脂蛋白自身抗体的提取和初步鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的提取和鉴定人血清氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)自身抗体。方法采用溴化氰活化的Sepharose4B交联Ox-LDL制备免疫吸附层析柱,从正常人血清中提取抗Ox-LDL自身抗体,采用ELISA法鉴定其免疫反应性,散射免疫比浊法分析自身抗体种类。结果用NaHCO3、醋酸盐和KCNS溶液洗脱,分别收集洗脱峰。8份正常人血清中均收集到Ox-LDL自身抗体,与Ox-LDL均具有良好的反应性。自身抗体种类中以IgG为主,其次为IgM。结论此法提取的抗Ox-LDL自身抗体同Ox-LDL具有良好的反应能力。
- 汪俊军朱雁飞强红娟张春妮
- 关键词：低密度脂蛋白氧化修饰自身抗体动脉粥样硬化
- β_2-糖蛋白Ⅰ/氧化型低密度脂蛋白复合物的研究进展被引量：6
- 2007年
- β2-糖蛋白Ⅰ与氧化型低密度脂蛋白结合形成2β-糖蛋白Ⅰ/氧化型低密度脂蛋白复合物,它在体内存在与否和高氧化应激状态、炎症有关。自身免疫性疾病以及一些伴有心血管病变的有慢性炎性反应的疾病患者血清β2-糖蛋白Ⅰ/氧化型低密度脂蛋白复合物水平明显升高,自身免疫性疾病患者血清中还可检测到复合物自身抗体的存在。体外实验显示,β2-糖蛋白Ⅰ/氧化型低密度脂蛋白复合物与其自身抗体形成的免疫复合物,通过Fcγ受体途径被巨噬细胞摄取,这可能是导致氧化型低密度脂蛋白被巨噬细胞摄取的主要路径之一。
- 王相栋张春妮
- 关键词：自身抗体动脉粥样硬化自身免疫疾病
- 常见免疫抑制剂与高脂血症的关系被引量：9
- 2007年
- 一些免疫抑制剂影响了脂质的合成与分解,是导致器官移植术后高脂血症的主要因素。现就目前临床常用的免疫抑制剂与高脂血症关系的最新研究进展作一综述。
- 牛冬梅张春妮
- 关键词：免疫抑制剂高脂血症脂质代谢紊乱器官移植
