国家杰出青年科学基金(30225040)
- 作品数：6 被引量：30H指数：4
- 相关作者：宁琴朱传龙罗小平严伟明习东更多>>
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- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人纤维介素在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及意义被引量：8
- 2005年
- 严小枫宁琴严伟明林能兴习东罗小平
- 关键词：外周血单个核细胞系统性红斑狼疮SLE免疫组化方法
- 小鼠纤维介素基因shRNA表达质粒的构建及体外RNA干扰被引量：1
- 2006年
- 目的探讨纤维介素蛋白(fg12)的双链RNA(dsRNA)在体外对fg12凝血酶原酶基因表达的干扰作用及其规律。方法构建能产生鼠垃12(mfg12)的发夹状双链RNA(shRNA)的载体p-mfg12shRNA,将其与mfg12- EGFP融合基因表达质粒pEGFP-mfg12共转染(用量比为1:5)到中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)作为实验组,另仅转染pEGFP-mfg12或共转染无关序列shRNA表达质粒和pEGFP-mfg12(用量比为1:5)作为对照组。转染24、48、 72 h后,观察mfg12-EGFP融合蛋白在CHO细胞中的表达情况,并通过流式细胞仪检测荧光细胞阳性率。分别将p- mfg12shRNA和mfg12cDNA表达质粒pcDNA3．1-mfg12共转染(用量比为1:5)到CHO细胞和人宫颈癌细胞(Hela 细胞),作为试验组,另转染pcDNA3．1-mfg12或共转染无关序列shRNA表达质粒和pcDNA3．1-mfg12(用量比为1:5) 或不转染任何质粒作为对照组。通过逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学检测mfg12在CHO和Hela这两种细胞株中表达的情况。结果实验组较对照组的绿色荧光强度明显减弱,荧光细胞数明显减少。在CHO和Hela两种细胞株,均显示mfg12shRNA显著抑制mfg12 mRNA和蛋白质的表达。结论本研究所构建的mfg12shRNA表达质粒p-mfg12shRNA 可在体外高效特异地抑制mfg12的表达,为进一步的体内实验奠定了基础。
- 汪之沫严伟明习东朱传龙罗小平宁琴
- 关键词：凝血酶原酶RNA干扰
- 基因治疗中非病毒载体的研究进展被引量：7
- 2004年
- 基因治疗中非病毒载体技术近年来发展迅速。与病毒载体相比,非病毒载体具有简便、安全、毒性小等特点。该方法大体可分为两种:物理方法途径和化学载体转移方式。本文综述了非病毒载体的分类及其研究进展。
- 朱传龙宁琴
- 关键词：非病毒载体基因治疗基因转移
- 组织细胞坏死性淋巴结炎13例临床和病理分析被引量：5
- 2008年
- 目的通过对13例组织细胞坏死性淋巴结炎(HNL)患者的临床和病例资料进行总结分析,以探讨其临床和病理特点。方法回顾性分析1997年6月～2006年12月住院治疗的13例HNL患者的临床及病理资料。结果所有患者均有发热和颈部淋巴结大,大多数患者白细胞减少、淋巴细胞比率增高、血沉增快,9例EBV-DNA阳性。初诊时7例误诊为淋巴瘤,4例误诊为淋巴结核,1例误诊为败血症。淋巴结活检HE染色可见典型的病理学改变。12例患者应用疗程为2～6个月的肾上腺皮质激素治疗,疗效显著,未复发。1例应用肾上腺皮质激素2周治愈,但6年后复发。结论该病临床表现缺乏特异性,易误诊,确诊需进行淋巴结活检,CD标志免疫组化为关键依据,可用于排除T、B淋巴瘤,其病因可能与EB病毒感染有关,早期长疗程的激素治疗可能有助于减少复发。
- 张振纲邹婕严伟明黄加权黄元成徐三鹏宁琴田德英
- 关键词：组织细胞坏死性淋巴结炎病理
- 人纤维介素基因真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2006年
- 目的:构建人纤维介素(hfgl2)基因的真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达。方法:提取人外周血单个核细胞的总RNA,逆转录得到cDNA,以其为模板,PCR扩增hfgl2 cDNA片段,将目的片段通过T载体过渡克隆至表达载体pcDNA3.1,将重组质粒转染CHO细胞并制作细胞爬片,对爬片进行免疫组化染色,显微镜下观察并摄片。结果:扩增出1.3 kb的目的片段,并将其克隆至pcDNA3.1,经酶切鉴定和测序鉴定无误;重组质粒转染CHO细胞,细胞爬片免疫组化染色可见细胞质中存在明显的阳性棕染。结论:成功构建hfgl2基因的真核表达载体,为进一步探讨其功能学和干预研究奠定了基础。
- 李黎朱传龙宁琴
- 关键词：基因表达病毒性肝炎
- 小鼠肿瘤坏死因子受体1基因的克隆及其与绿色荧光蛋白的融合表达被引量：8
- 2007年
- 目的：构建小鼠肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）和绿色荧光蛋白（GFP）的融合基因真核表达质粒，然后在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞表达，为TNFR1的基因干预研究提供简便的判定手段。方法：从小鼠肝组织提取总RNA，RT-PCR扩增出TNFR1基因的cDNA片段，将目的片段克隆至pMD18-T载体。酶切和测序鉴定，然后将目的片段酶切回收后插到GFP表达载体pEGFP-N2中GFP基因序列的上游，构建TNFR1-EGFP融合基因真核表达载体pEGFP-TNFR1，将该重组质粒转染到CHO细胞后24—48h，用免疫组化技术检测TNFR1的表达情况。同时荧光显微镜下观察GFP表达情况。结果：扩增出了长约1360bp的基因片段，并将其克隆至pMD18-T载体，酶切和测序鉴定无误；将pMD-TNFR1中TNFR1基因亚克隆至pEGFP-N2载体，酶切鉴定无误；重组质粒pEGFP-TNFR1转染CHO细胞后，免疫组化染色可见细胞有阳性棕染，同时荧光显微镜下也可观察到绿色荧光蛋白的表达。结论：成功构建了小鼠TNFR1-EGFP融合基因真核表达质粒；重组质粒可在CHO细胞中表达出TNFR1-EGFP融合蛋白，为进一步的TNFR1基因干扰研究奠定了基础。
- 李毓雯朱传龙宁琴罗小平
- 关键词：肿瘤坏死因子受体1绿色荧光蛋白融合蛋白
