广东省自然科学基金(7301732)
- 作品数：7 被引量：59H指数：5
- 相关作者：白俊杰叶星李胜杰李小慧于凌云更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所上海海洋大学广东海洋大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家科技基础条件平台建设计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 大口黑鲈MyoD cDNA的克隆和序列分析被引量：7
- 2008年
- MyoD基因是生肌调节因子MRFs家族的主要成员之一,是脊椎动物胚胎期肌肉发育的主导调控基因之一,对骨骼肌的形成和分化起主要作用。采用RT-PCR和RACE方法获得大口黑鲈MyoD基因的cDNA序列长为1 157bp,其中3'非编码区为314bp,开放阅读框长843bp,编码280个氨基酸。结构分析表明该肽链无信号肽,第1～110个氨基酸为MyoD基因的Basic区(碱性氨基酸区),第124～167个氨基酸为MyoD基因的HLH结构(螺旋环螺旋结构)。通过对比分析已知GenBank中其它脊椎动物MyoD基因发现,该基因编码的氨基酸肽链随动物由低等向高等进化有加长的趋势,且核苷酸以及推测的氨基酸同源性和动物之间的亲缘关系相一致;大口黑鲈MyoD基因的克隆为研究该基因打靶和鱼类肌肉发育调控机理奠定基础。
- 于凌云白俊杰叶星李胜杰
- 关键词：大口黑鲈MYOD克隆
- RNA干扰技术在鱼类中的研究进展被引量：8
- 2009年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是真核生物体内利用双链RNA(double strand RNA,dsRNA)诱导同源靶基因的mRNA特异性降解,从而导致转录后基因沉默(posttranscriptional gene silencing,PTGS)的现象。RNAi主要通过核酸酶Dicer切割dsRNA生成21～23nt的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),继而由siRNA识别并靶向降解同源靶基因mRNA,从而抑制靶基因的蛋白表达。文章综述了RNA干扰技术的原理、siR-NA的制备及在鱼类中的研究进展。
- 韩林强李胜杰于凌云白俊杰
- 关键词：RNA干扰基因沉默鱼类
- 大口黑鲈IGF-I基因内含子1、3和4序列多态性研究被引量：11
- 2009年
- 根据大口黑鲈IGF-I基因的cDNA序列设计引物,克隆IGF-I基因内含子核苷酸序列,采用PCR产物直接测序方法,在中国养殖群体和美国野生群体中筛选IGF-I基因内含子上的多态位点。应用RFLP、CRS-RFLP和SSCP技术建立多态位点的检测方法,同时比较分析其中4个多态位点在两个群体中基因频率分布。结果表明:(1)IGF-I基因内含子1、3和4序列长分别为1 317 bp、712 bp和1 941 bp;(2)在3个内含子上共发现7个多态位点,其中在内含子1的208和1070位为G-A突变;内含子3的第40个碱基为一个"A"的插入-缺失突变,第307位为C-T突变,683位是G-A突变;内含子4上的696碱基处有一个20 bp的插入-缺失突变,在1 563位为G-A突变,表明大口黑鲈IGF-I基因序列上存在较多的SNPs;(3)内含子1上SNPG1070A的A等位基因能为Hind III限制性内切酶识别,采用RFLP技术分型。根据内含子1上SNP G208A侧翼序列,设计错配引物,使错配碱基和A等位基因共同形成TaqI酶切位点,建立CRS-RFLP检测方法。内含子4上SNP G1563A采用SSCP检测方法,同时对内含子4上的插入-缺失突变进行PAGE电泳分型。试验结果显示,RFLP、CRS-RFLP和SSCP三种SNP检测方法简单易行,适于在水产动物SNP标记研究中推广应用;(4)在中国养殖群体中,只有内含子1上的SNP G1070A具有多态性,其它3个多态位点只在美国野生群体中存在多态,证实中国养殖群体的遗传多样性相对较低。
- 李小慧白俊杰叶星胡隐昌
- 关键词：大口黑鲈内含子多态性
- 大口黑鲈肌肉生长抑制素多克隆抗体的制备及其对仔鱼生长影响被引量：6
- 2009年
- 肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)是抑制肌肉生长和发育的生长调控因子。将大口黑鲈(Micropterus salmoides)MSTN成熟肽cDNA改造后克隆到pET32a(+)载体上,构建原核表达质粒,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE检测表明重组表达的融合蛋白分子大小约28kD,含量为菌体总蛋白的34%。用纯化后的表达蛋白免疫新西兰兔制备抗大口黑鲈MSTN多克隆抗体,Western blot和ELISA检测证实所获得的抗体可与抗原蛋白特异性结合,抗体的效价为1∶62500。将获得的抗体显微注射到大口黑鲈的受精卵卵黄区,结果显示具有促进仔鱼生长的作用。
- 张宁宁白俊杰李胜杰叶星何小平夏仕玲杜晓东
- 关键词：大口黑鲈MSTN原核表达多克隆抗体仔鱼
- 大口黑鲈内含子1上SNP G208A的CRS-PCR检测方法被引量：4
- 2009年
- 创造限制酶切位点PCR法是应用引物错配技术结合单核苷酸多态性(SNP)而配合成一个酶切位点,使SNP可用于PCR-RFLP分析的一种方法。应用CRS-PCR技术检测了大口黑鲈(Micropterus salmoides)IGF-I基因内含子1上SNPG 208A的多态性,并详述了CRS-PCR错配引物的设计方法,CRS-PCR引物设计和应用的注意事项,以促进CRS-PCR单核苷酸多态检测方法在水产动物研究领域的应用。
- 李小慧白俊杰胡隐昌叶星
- 关键词：大口黑鲈单核苷酸多态性
- 大口黑鲈MyoD基因结构和单核苷酸多态性位点的筛选被引量：25
- 2009年
- 采用PCR技术和基因组步移技术从大口黑鲈基因组DNA中扩增得到MyoD基因及其5′调控区序列。该基因序列全长3797bp，其中5′调控区长1077bp，MyoD基因转录区由3个外显子（分别为591、81和78bp）和2个内含子（分别为1077和486bp）组成。5′调控区含有与肌肉特异性基因转录密切相关的转录调控元件Ebox、肌细胞增强因子2（MEF2）、肌肉特异性金属硫蛋白结合位点（MTBF）及一些转录反应调控元件（TATA box、OCAAT box、OCT1、PRE、AP4、Pit1）。运用PCR—SSCP技术和直接测序法进行大口黑鲈MyoD基因SNP位点筛选，结果表明MyoD基因序列中存在7个突变点，均位于内含子上。养殖群体中这7个突变点分析结果显示突变比例范围在0．042～0．353之间。本研究结果为SNPs位点与大口黑鲈生长性能关联分析奠定了基础。
- 于凌云白俊杰叶星李胜杰李小慧
- 关键词：大口黑鲈MYODSNPS
- 大口黑鲈肌肉生长抑制素前肽真核表达载体的构建及其在肌肉组织中的表达被引量：2
- 2009年
- 将大口黑鲈(Micropterus salmoide)肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)前肽(MSTN-Pro)的cDNA定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)/mycHisB中,双酶切检测和测序鉴定证实,插入pcDNA3.1(-)/mycHisB载体中的片段为目的基因的核苷酸序列,MSTN基因前肽cDNA为正向插入,且重组质粒无错配或插入移位等突变。采用肌肉注射法将重组表达质粒注入大口黑鲈背部肌肉组织,在注射后第2天经RT-PCR检测到MSTN前肽基因mRNA的表达,第6天经免疫组化学检测到MSTN前肽蛋白的表达,第8天蛋白表达强度增强,对照组始终未检测到MSTN前肽基因的表达。
- 张宁宁白俊杰何小平郭玉函叶星李胜杰杜晓东
- 关键词：大口黑鲈真核表达肌肉注射
