国家自然科学基金(81070222)
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 相关作者：于超杨竹王应雄吴明军琚娜娜更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属第二医院更多>>
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- 白细胞介素1β通过β1整合素糖基化修饰诱导EA.hy926细胞凋亡被引量：2
- 2012年
- 目的探讨IL-1β对血管内皮细胞损伤机制。方法以EA.hy926血管内皮细胞为研究对象,利用不同浓度IL-1β刺激24 h,采用Western blot方法检测IL-1β对β1整合素、Bcl-2、Bax、Caspase-3及N-乙酞氨基葡萄糖转移-V(GnT-V)表达的影响;通过Lectin blot方法显示IL-1β对GnT-V所修饰的所有糖蛋白量的影响;免疫共沉淀方法检测IL-1β对β1整合素糖基化修饰量的变化;流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果 IL-1β可从蛋白翻译水平抑制β1整合素的表达,同时可以下调Bcl-2/Bax的比例,上调Caspase-3的表达。初步揭示IL-1β诱导血管内皮细胞凋亡可能是通过β1整合素N-连接糖基化作用来完成的。结论 IL-1β可通过调控EA.hy926细胞β1整合素的糖基化修饰,增加细胞凋亡率,损伤血管内皮细胞。
- 李佳佳杨竹王应雄于超
- 关键词：IL-1ΒGNT-VΒ1整合素糖基化凋亡
- 功能蛋白的O-糖基化和p38磷酸化共同参与调控单核细胞对血管内皮的粘附和侵袭被引量：1
- 2012年
- 探讨单核细胞在炎症因子刺激下通过功能蛋白O-糖基化和p38 MAPK磷酸化、调控其对血管内皮的粘附和侵袭的分子机制。将IFN-γ与LPS体外共刺激后的THP-1细胞加至单层血管内皮细胞EA.hy926共培养,观察单核细胞对血管内皮的粘附和侵袭;并通过测量电阻变化来反应血管内皮通透性的改变。采用Western blot方法检测单核细胞THP-1中p38 MAPK磷酸化的变化,O-GLcNAc糖基转移酶(OGT)和O-GLcNAc糖基化蛋白表达量的变化。分析验证p38 MAPK抑制剂对IFN-γ与LPS诱导的单核细胞对血管内皮粘附和迁移的影响,同时检测OGT、O-GLcNAc糖基化蛋白差异表达的影响。结果显示,IFN-γ与LPS可以共作用促进THP-1对血管内皮的粘附和侵袭,降低血管内皮通透性。同时激活p38 MAPK,此过程与OGT及O-GLcNAc糖基化蛋白表达降低相关。采用p38抑制剂预处理,可逆转上述IFN-γ与LPS诱导的生物学变化。综上,在炎症反应中,单核细胞对血管内皮的粘附和侵袭力的变化受功能蛋白糖基化和磷酸化的双向调控。
- 杨火梅于超杨竹
- 关键词：P38THP-1
- 没食子酸及其氧化产物对大鼠肝微粒体CYP3A的抑制效应被引量：8
- 2014年
- 目的体外研究没食子酸对大鼠肝微粒体CYP3A的抑制效应。方法将不同浓度没食子酸与鼠肝微粒体及探针底物在37℃下孵育,用高效液相色谱-紫外法测定探针底物的代谢产物生成率,计算IC50值。在NADPH存在或不存在时,将没食子酸与鼠肝微粒体在37℃下分别预孵育0、15、30 min后继续孵育15 min,测定探针底物的代谢产物生成率,观察没食子酸对CYP3A抑制的时间依赖性。在无NADPH存在时,将不同浓度没食子酸与鼠肝微粒体在37℃下分别预孵育0、30 min后继续孵育15 min,测定探针底物的代谢产物生成率,计算出两实验组IC50平移值(IC50shift)。观察2.5 h内没食子酸在紫外-可见光光谱下的变化。在无NADPH存在时,将抗氧剂与没食子酸及鼠肝微粒体在37℃下共同预孵育,观察抗氧剂谷胱甘肽和维生素C的加入对没食子酸抑制强度的影响。结果没食子酸对CYP3A表现出浓度依赖性抑制(P<0.05),IC50为130.2μg/mL。预孵育无NADPH存在时,没食子酸对CYP3A表现出时间依赖性抑制(P<0.05),且抑制强度远大于NADPH存在的实验组。在无NADPH存在时,没食子酸与鼠肝微粒体在37℃下分别预孵育0 min和30 min,两实验组间的IC50平移值达11.9。紫外-可见光全波长扫描观察显示,没食子酸在孵育过程中生成了2种反应产物。抗氧剂的加入能显著降低没食子酸对CYP3A的抑制能力(P<0.05)。结论没食子酸对CYP3A的活性表现出较强的不可逆性抑制,具有诱导药物-药物相互作用的风险。
- 石亮张远冬王二豪惠俊敏郭延垒于超
- 关键词：没食子酸肝微粒体CYP3A
- ST6Gal-I通过上调整合素β1的唾液酸化促进绒毛膜癌细胞的迁移
- 2013年
- 为了研究β-半乳糖α2,6-唾液酸转移酶1(ST6Gal-I)对人绒毛膜癌细胞(JAR)和人绒毛膜外滋养层细胞(HTR-8/SVneo)迁移能力的影响。首先采用Transwell小室的实验方法比较两种细胞的迁移能力,再用PCR和Western blot的方法检测ST6Gal-I mRNA及其蛋白的表达差异,最后通过Transwell检测经siRNA干扰ST6Gal-I的表达后对细胞迁移能力的影响,并通过免疫共沉淀技术检测ST6Gal-I的靶蛋白整合素β1唾液酸化程度的变化。结果表明,JAR细胞的迁移能力强于HTR-8/SVneo细胞;JAR细胞中ST6Gal-I在mRNA及蛋白水平表达均高于HTR-8/SVneo细胞,同时检测到JAR细胞中靶蛋白整合素β1的唾液酸化程度亦高于对照组。用siRNA干扰相对高表达的JAR细胞中ST6Gal-I基因,发现其迁移能力随之下降,且ST6Gal-I的靶蛋白整合素β1的唾液酸化程度也发生降低。表明ST6Gal-I参与了肿瘤细胞的迁移调控。该研究结果对发现新的治疗靶点有重要的启示。
- 朱影于超刘学庆陈雪梅丁裕斌王应雄何俊琳
- 关键词：JAR细胞整合素Β1细胞迁移
- 白介素-1β通过上调血管内皮细胞中FucT-Ⅶ及蛋白糖基化调控细胞间黏附作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨炎症因子白介素-1β(IL-1β)是否通过α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ(FucT-Ⅶ)对血管内皮细胞中功能蛋白糖基化修饰调控单核细胞与内皮细胞的黏附作用,为揭示炎症因子损伤血管内皮细胞的分子机制奠定基础。方法建立不同浓度IL-1β损伤EA.hy926血管内皮细胞的模型,通过与荧光标记的THP-1单核细胞共培养,观察细胞间的黏附作用;采用Real time-PCR及Western blot检测EA.hy926细胞中FucT-Ⅶ差异表达;用蛋白免疫印迹法检测细胞内sLex糖支链蛋白差异表达;运用siRNA干扰FucT-Ⅶ基因,观察细胞间黏附的变化。结果 IL-1β可以促进内皮细胞与单核细胞的黏附,同时内皮细胞中FucT-Ⅶ表达上调;sLex糖支链蛋白表达也上调。当干扰内皮细胞中FucT-Ⅶ基因后,细胞间的黏附能力明显下降,且sLex糖支链蛋白表达下调。结论 IL-1β可能通过调控EA.hy926细胞中FucT-Ⅶ的糖基化修饰作用增加其对单核细胞的黏附能力,这可能是炎症早期发生时影响血管内皮功能新的重要分子机制之一。
- 琚娜娜吴明军赵德璋屈茹楠王应雄杨竹于超
- 关键词：SLEXEA糖基化细胞黏附
- O-糖基转移酶介导的O-糖基化在卵巢癌细胞迁移过程中的作用及其机制研究被引量：1
- 2013年
- 探讨O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)介导的O-GlcNAc糖基化在卵巢癌细胞迁移过程中的作用及其分子机制。采用RNAi基因干扰技术,干扰OGT基因的表达,构建低表达O-GlcNAc糖基化的卵巢癌HO-8910PM细胞模型;采用O-GlcNAc糖苷酶(OGA)抑制剂PUGNAc或Thiamet G诱导,构建高表达O-GlcNAc糖基化的卵巢癌OVCAR3细胞模型;通过qPCR和Western blot法验证细胞模型的有效性;通过体外细胞迁移实验观察O-GlcNAc糖基化对卵巢癌细胞迁移的影响;并通过qPCR法进一步检测不同的细胞模型中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的表达。结果显示,在HO-8910PM细胞中,干扰OGT基因的表达,可以降低MMP-2和MMP-9的mRNA水平,抑制HO-8910PM细胞的迁移。综上,OGT介导的O-GlcNAc糖基化可以通过调节MMP-2和MMP-9的表达参与调控卵巢癌细胞的迁移。
- 晋凤珍于超杨竹
- 关键词：OGTOVCAR3HO-8910PM基质金属蛋白酶-2
- 功能蛋白O-GlcNAc糖基化修饰调控绒毛膜癌细胞的转移被引量：1
- 2013年
- 为研究氧连接N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)糖基化修饰调控人绒毛膜癌细胞(JAR)迁移的分子机制,首先采用siRNA和酶特异性抑制剂作用细胞,构建O-GlcNAc修饰总蛋白低表达和高表达的细胞模型;利用Transwell方法及黏附实验比较细胞迁移及与血管内皮细胞黏附能力的变化;并通过免疫共沉淀技术检测重要的功能蛋白β-catenin的O-GlcNAc程度,从而分析蛋白转录翻译后调控对肿瘤细胞迁移影响的分子机制。结果表明,增加JAR细胞中O-GlcNAc修饰水平可促进细胞迁移及与血管内皮细胞的黏附活性,且O-GlcNAc修饰作用的靶蛋白β-catenin的糖基化水平也显著增加。当下调细胞中O-GlcNAc蛋白修饰水平,其迁移及黏附能力随之下降。表明O-GlcNAc修饰参与了绒毛膜癌细胞转移的调控。
- 屈茹楠琚娜娜吴明军赵德璋王应雄杨竹于超
- 关键词：O-GLCNAC绒毛膜癌细胞迁移Β-CATENIN
