国家自然科学基金(30371319)
- 作品数：13 被引量：20H指数：3
- 相关作者：张晓燕沈荣显相文华沈弢魏丽丽更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所上海市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金科技部基础研究重大项目前期研究专项留学人员科技活动项目择优资助经费更多>>
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- 马传染性贫血病毒基因表达调节机制的研究进展被引量：3
- 2005年
- 梁华沈弢张晓燕邵一鸣
- 关键词：马传染性贫血病毒长末端重复序列增强子细胞因子
- EIAVgp90与HIVgp120一个结构基序的相似性
- 2005年
- 马传染性贫血病病毒(EIAV)与艾滋病病毒(HIV)同属于逆转录病毒科慢病毒属.EIAV和HIV在基因的结构与组成上有很大的相似性.Hotzel提出EIAVgp90的2个可变区及附近氨基酸可能与HIVgp120的V1,V2和连接片层(bridgingsheet)采取了相同的结构.这个区域对应于EIAVgp90的V3和V4区及附近区域.本文在Hotzel推测的基础之上,进一步分析比较了这个区域在N-糖基化位点与抗原表位的分布两方面与HIVgp120的相似性.结果显示,EIAVgp90的V3和V4区及附近区域与HIVgp120的对应区域无论在N-糖基化位点的位置与数目,还是抗原表位的分布方面都显示了高度的相似性.EIAVgp90的V1,V2及附近区域很有可能采取了与HIVgp120的V1,V2及连接片层相同的结构.
- 李会广童骁沈弢沈荣显张晓燕邵一鸣
- 关键词：艾滋病病毒N-糖基化抗原表位
- EIAV减毒疫苗免疫后马外周血单个核细胞中IFN-γ的转录被引量：5
- 2006年
- 目的:探讨马传染性贫血病毒(Equineinfectiousa-nemiavirus,EIAV)驴白细胞减毒疫苗(DLV)免疫马后,外周血单个核细胞(PBMC)中IFN-γmRNA转录水平与免疫保护应答的关系,揭示DLV的免疫保护机制。方法:应用分子克隆及实时定量RT-PCR技术,建立马PBMC中IFN-γmRNA转录水平的定量检测方法,在不同时间点定期观察4组(疫苗免疫组、阴性对照组、强毒株阳性对照组及EIAV自然感染组)12匹马PBMC中IFN-γmRNA的转录水平及分布特征,同时监测体温变化等指标。疫苗株免疫动物8个月后,用EIAV强毒株攻击,观察攻击前后IFN-γmRNA转录水平的变化。结果:疫苗免疫马在免疫期内,PBMC中IFN-γmRNA转录的量显著高于阴性对照组及自然感染组(P<0.01)。免疫后用EIAV强毒株攻击,IFN-γ转录的量继续升高,4匹免疫马均获得完全保护;强毒株阳性对照组IFN-γmRNA转录的量随疾病的进展波动,发热期明显下降。结论:本研究首次证明,EIAV减毒疫苗可诱导马PBMC中IFN-γ基因高效转录,其转录水平与DLV的免疫保护密切相关。此结果在分子水平为阐明DLV的免疫保护机制提供了新的实验依据。
- 王盈张晓燕魏丽丽吴东来王晓钧相文华沈荣显邵一鸣
- 关键词：马传染性贫血病毒转录
- 马传染性贫血病毒减毒疫苗诱导马外周血单个核细胞白细胞介素12的转录
- 2006年
- 目的探讨马传染性贫血病毒(EIAV)驴白细胞减毒疫苗(DLV)免疫马后,外周血单个核细胞(PBMC)中白细胞介素12(IL-12)mRNA转录水平与免疫保护应答的关系,揭示DLV的免疫保护机制。方法应用分子克隆及实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,建立马PBMC中IL-12 mRNA转录水平的定量检测方法,在不同时间点定期观察4组(疫苗免疫组、阴性对照组、强毒株阳性对照组和EIAV自然感染组)12匹马PBMC中IL-12 mRNA转录水平及分布特征,同时监测体温变化等指标。疫苗株免疫动物8个月后,用EIAV强毒株攻击,观察攻击前、后IL-12 mRNA转录水平的变化。结果DLV免疫马在免疫期内,PBMC中IL-12 mRNA转录的量略高于阴性对照组及自然感染组,但免疫后8个月用EIAV强毒株攻击,IL-12 mRNA转录量显著升高,4匹免疫马获得完全保护;强毒株阳性对照组IL-12转录量随疾病进展波动,发热期下降。结论本研究首次证明EIAV减毒疫苗可诱导马外周血PBMC中IL-12基因高效转录,其转录水平与DLV的免疫保护密切相关。此结果在分子水平为阐明DLV的免疫保护机制提供了新的实验依据。
- 王盈庄鸣华魏丽丽张晓燕吴东来王晓钧相文华沈荣显邵一鸣
- 关键词：马传染性贫血病毒转录
- 假型病毒的应用研究进展被引量：2
- 2006年
- 一种病毒的核酸被另一种病毒编码的包膜蛋白所包被,称为假型病毒。假型病毒在细胞内只能进行单一周期复制,安全性好,并具有广泛的宿主范围,更高的转染效率,更容易浓缩成高滴度,能抵抗血清补体的攻击,非细胞周期依赖性地高效转染静止细胞等优点,因而假型病毒在研究病毒进入过程、受体鉴定、中和抗体检测、疫苗评价等方面具有重要作用。
- 李深伟孟庆来张晓燕
- 关键词：报告基因中和抗体
- 利用流式细胞术测定CTL活性方法在EIAV免疫学中的应用被引量：4
- 2005年
- 利用PKH-26和CFSE两种荧光染料对靶细胞染色,建立了一种通过流式细胞术进行马传染性贫血症病毒 (Equine infectious anemia virus,EIAV)抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes,CTL)反应的 新方法,避免了经典的Cr51释放法对检测人员的放射线威胁,降低了本底释放,提高了检测的灵敏度。将该检测方 法用于检测EIAV疫苗毒接种马和嵌合克隆接种马的细胞免疫反应变化趋势,数据显示细胞免疫反应在接种后3 个月达到成熟阶段而后保持在较高的反应水平。该方法的成功建立和应用为研究EIAV减毒疫苗的免疫机制提 供了好的研究手段,也为其他病毒的免疫学研究提供了新的参考方法。
- 童骁沈弢梁华孟庆来钟卫洲马燕魏丽丽相文华沈荣显徐建青张晓燕邵一鸣
- 关键词：ANEMIA
- EIAV弱毒疫苗免疫马外周血单核细胞IL-2表达水平的研究
- 2005年
- 目的:通过定量监测马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗免疫马外周血单核细胞(PBMC)IL -2表达水平的变化特征,探讨EIAV弱毒疫苗的免疫保护机制。方法:用实时定量RT- PCR技术建立了马外周血PBMCIL- 2表达水平的定量检测方法。在不同的时间点定期对4组(疫苗免疫组、健康对照组、强毒攻毒组和EIAV自然感染组) 1 2匹马的外周血PBMCIL -2表达水平进行了检测,同时观察了临床症状及体温变化等指标。疫苗株免疫动物8个月后用强毒攻毒,观察了攻毒前后IL -2表达水平的变化。结果:( 1 )疫苗免疫马外周血PBMCIL- 2的表达量显著高于健康对照组及自然感染组(P <0 .0 1 ) ,且免疫后攻毒IL 2继续升高,4匹疫苗免疫马均获得完全保护;( 2 )强毒攻毒对照组IL 2表达量随疾病进展波动,发热期明显下降。结论:首次证明EIAV弱毒疫苗可诱导马外周血PBMC表达高水平的IL -2 ,提示IL- 2在疫苗的免疫保护应答中发挥了重要作用;IL -2表达水平还与EIAV感染后的疾病进展密切相关。
- 王盈魏丽丽张晓燕吴东来相文华王晓钧吕晓玲沈荣显邵一鸣
- 关键词：马传染性贫血病毒弱毒疫苗外周血单核细胞白细胞介素2实时定量RT-PCR
- 逆向突变型EIAV全长基因组感染性克隆的构建及体外感染性评价被引量：2
- 2005年
- 在已有全长基因组感染性克隆 pLGFD3 8的基础上,按照疫苗制作过程中 EIAV结构基因的变化规律,对其中gag基因进行定点逆向回复改造。并在gag突变的基础上增加env 突变位点。将所改造的突变克隆转染驴胎皮肤细胞(FDD)以及驴单核巨噬细胞(DL),并用逆转录酶活性检测和 RT PCR方法验证其感染性。结果发现,衍生病毒感染上述两种细胞均出现明显的细胞病变效应;细胞培养上清可检测到 RT酶活性和 RT PCR阳性。电镜下可见大量典型的病毒颗粒。然而单核巨噬细胞培养病毒感染滴度要明显高于驴胎皮肤细胞培养病毒滴度。驴胎皮肤细胞内嵌合克隆衍生病毒和父本克隆衍生病毒的复制动力学比较分析显示前者的复制比后者略有滞后。此结果为深入研究马传染性贫血病毒致病的分子机制和疫苗保护机理奠定了基础。
- 沈弢张晓燕童骁范秀娟梁华马燕相文华沈荣显邵一鸣
- 关键词：马传染性贫血病毒定点突变感染性克隆
- EIAV减毒疫苗诱导的特异性细胞免疫应答被引量：5
- 2006年
- 目的研究马传染性贫血病毒(EIAV)减毒疫苗株接种动物体内诱导的细胞免疫学反应。方法选用健康没有EIAV感染的马,接种EIAV减毒疫苗株DLV,运用流式细胞术检测疫苗株诱导的马外周血单核细胞(PBMC)中CD4和CD8阳性淋巴细胞数量的变化,以及3H测定特异性淋巴细胞增殖反应和51Cr释放实验测定淋巴细胞杀伤反应。结果EIAV减毒疫苗株DLV免疫动物后,能够引起CD8+细胞明显增加,免疫马PBMC在EIAV刺激下,引起EIAV特异性淋巴细胞增殖反应(SI≥3),并能检测出EIAV特异性CTL活性,靶细胞杀伤百分率高于30%。结论EIAV减毒疫苗株DLV免疫动物能够引起特异性EIAV细胞免疫反应,极有可能参与宿主的保护免疫作用。
- 张晓燕李红梅梁华沈弢马燕相文华沈荣显邵一鸣
- 关键词：EIAV减毒疫苗细胞免疫
- 实时定量PCR检测马传染性贫血病毒载量方法的建立和应用
- 2005年
- 目的建立实时定量PCR检测血浆病毒载量的方法,对马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)强毒株攻毒马和疫苗免疫攻毒马血浆中病毒载量进行了跟踪检测,探讨病毒载量和临床疾病状态的相关性.方法以EIAV强毒株LN40序列为标准,在gag保守区设计1对引物和Taqman探针,用于实时定量PCR扩增,用含扩增目的基因的体外转录RNA作标准品,获得标准曲线,对扩增样品进行准确定量.强毒株LN40直接攻毒,或者疫苗株DLV免疫马6个月后用强毒株LN40进行攻毒,跟踪检测攻毒马及免疫攻毒马血浆中EIAV载量情况.结果反应在101～109copies/ml之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10 copies/ml.强毒攻毒马出现发热并最终死亡,发热期间马血浆中EIAV载量与体温呈正相关,载量最高达107 copies/ml.免疫攻毒马未出现发热,其血浆EIAV载量的总体水平低于强毒攻毒马,攻毒后3个月低至10 copies/ml以下.结论成功建立了实时定量PCR检测血浆EIAV载量的方法,并证实了用实时荧光定量PCR检测EIAV病毒载量的方法来监测动物感染状态具有可行性,为EIAV致病机制研究和弱毒疫苗免疫保护机制的研究提供良好的技术平台.
- 梁华张晓燕沈弢童骁马燕李红梅相文华沈荣显邵一鸣
- 关键词：马传染性贫血病毒实时定量PCR病毒载量
