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国家自然科学基金(81070258)

作品数：2 被引量：1H指数：1
相关作者：王深明朱峥嵘肖颖殷恒讳王文见更多>>
相关机构：中山大学附属第一医院更多>>
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相关领域：生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 2篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 2篇逆转
  • 2篇逆转录
  • 2篇逆转录病毒
  • 2篇逆转录病毒载...
  • 2篇转录
  • 2篇病毒载体
  • 1篇血管
  • 1篇血管平滑肌
  • 1篇血管平滑肌细...
  • 1篇增殖
  • 1篇平滑肌
  • 1篇平滑肌细胞
  • 1篇平滑肌细胞增...
  • 1篇曲张
  • 1篇曲张静脉
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞增殖
  • 1篇静脉
  • 1篇静脉曲张
  • 1篇基因

机构

  • 2篇中山大学附属...

作者

  • 2篇张远起
  • 2篇王文见
  • 2篇殷恒讳
  • 2篇肖颖
  • 2篇朱峥嵘
  • 2篇王深明
  • 1篇姜雨刚
  • 1篇黄水传

传媒

  • 2篇中华实验外科...

年份

  • 1篇2014
  • 1篇2012
共 2 条 记 录，以下是 1-2
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排序方式：
Desmuslin基因逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞株的建立被引量：1
2012年
目的构建Desmuslin（DMN）基因的逆转录病毒表达载体，并建立其包装细胞株。方法聚合酶链式反应（PCR）扩增DMN基因的全长编码框（约3700bp），PCR产物（PCR—DMN）亚克隆至逆转录病毒载体pRetroQ—AcGFP1-C1，构建DMN基因的逆转录病毒表达载体pRetroQ—AcGFP1-C1-DMN，酶切及测序鉴定后，把重组质粒通过转染导人包装细胞株PT67，嘌呤霉素筛选后获得抗性克隆，293细胞进行病毒颗粒滴度测定。结果pRetroQ—AcGFP1-C1-DMN克隆的酶切鉴定和测序鉴定结果表明DMN基因的全长编码框被准确克隆至载体pRetroQ—AcGFP1-C1，其序列与理论序列完全-致；获取了稳定产生DMN逆转录病毒的PT67细胞克隆株，其产生的病毒原液平均病毒滴度为（2．80±1．46）×10^6cfu／ml。结论成功构建了Desmuslin基因逆转录病毒表达载体并建立了其包装细胞株。
张远起王文见殷恒讳肖颖姜雨刚朱峥嵘王深明
关键词：逆转录病毒载体
Desmuslin基因过表达对曲张静脉源性平滑肌细胞增殖及迁移功能的影响
2014年
目的 通过Desmuslin （DMN）重组逆转录病毒表达载体感染曲张大隐静脉源性平滑肌细胞（SMCs）,观察上调DMN的表达后对SMCs功能的影响,探讨DMN与下肢静脉曲张发生发展的关系.方法 贴块法行曲张静脉源性SMCs原代培养,免疫荧光细胞化学法鉴定SMCs的纯度;分别运用已制备好平均滴度为（2.80±1.46）×10^6 cfu/ml的pRetroQ-AcGFP1-C1-DMN重组逆转录病毒与pRetroQ-AcGFP1-C1空载逆转录病毒感染SMCs;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）及Western blot检测转染效率;细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测比较SMCs的增殖活性;Transwell技术检测SMCs的迁移活性.结果 免疫荧光细胞化学法显示特异性的平滑肌α-肌动蛋白（α-actin）染色阳性的细胞数占总细胞数的99％以上;DMN过表达组的DMN mRNA水平为空载组的（8.3±1.1）×10^4倍（P＜0.01）,DMN蛋白表达为空载组的（4.5±1.2）倍（P＜0.01）;DMN过表达组SMCs增殖活性为空载组的（48.2±4.5）％（P＜0.01）;DMN过表达组细胞的迁移活性为空载组的（44.3±4.7）％（P＜0.01）.结论 在曲张静脉源性SMCs中上调DMN的表达后显著抑制SMCs的增殖及迁移活性,DMN蛋白可能在下肢静脉曲张的发生发展中起着重要作用.
张远起王文见殷恒讳肖颖朱峥嵘黄水传王深明
关键词：逆转录病毒载体血管平滑肌细胞静脉曲张
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