国家自然科学基金(30671574)
- 作品数：4 被引量：40H指数：3
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- 猪流行性腹泻病毒S1蛋白在干酪乳杆菌中的分泌表达及免疫原性分析被引量：12
- 2009年
- 将猪流行性腹泻病毒(PEDV)纤突蛋白S1基因片段插入干酪乳杆菌分泌型表达载体pPG-2中,构建了重组表达载体pPG-s1,将其电转化干酪乳杆菌L.casei393,获得了表达PEDV S1蛋白的重组乳酸菌杆菌。重组杆菌诱导后,经western blot、间接ELISA实验表明,目的蛋白获得了分泌表达。将该重组干酪乳杆菌经口服接种途径免疫BALB/c小鼠,免疫后于不同时间分别测定了粪便中特异性的sIgA和血清中IgG;用MTT法检测免疫小鼠细胞脾淋巴细胞增殖情况。结果表明该重组干酪乳杆菌表达系统能刺激动物黏膜免疫应答和系统免疫应答,在肠道可产生分泌型IgA抗体,并可检测到高水平血清IgG;不仅能诱导体液免疫反应,还可诱导细胞免疫应答。表明所构建的重组干酪乳杆菌表达系统作为口服疫苗具有潜在的应用价值,为探索新型猪流行性腹泻口服疫苗的研制奠定了基础。
- 葛俊伟姜艳平汪淼乔薪瑗徐义刚唐丽杰李一经
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S蛋白干酪乳杆菌
- 表面表达猪流行性腹泻病毒核蛋白蛋白的重组干酪乳杆菌诱导产生的免疫应答被引量：16
- 2009年
- 为探讨表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)核蛋白(N)基因的重组干酪乳杆菌口服免疫小鼠后诱导特异性免疫应答,本研究制备表达流行性腹泻病毒核蛋白的重组干酪乳杆菌,应用Western blotting、间接免疫荧光和全细胞ELISA鉴定目的蛋白的表达。然后用该重组干酪乳杆菌口服免疫BALB/c小鼠,分别测定了免疫后不同时间血清中特异性IgG、粪便中特异性的sIgA水平以及血清的中和活性;并测定免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和细胞因子水平。结果显示,目的蛋白表达在细胞表面,可被阳性血清所识别。免疫小鼠后,可分别在血清中和粪便中检测到较高水平特异性IgG、sIgA(P<0.01),但血清并没有中和活性;淋巴细胞增殖试验和细胞因子测定结果显示,免疫组可产生明显的细胞免疫应答。结果表明,该重组干酪乳杆菌表达系统可诱导小鼠产生黏膜免疫应答和系统免疫应答,具有作为口服疫苗潜在的应用价值。
- 葛俊伟姜艳平汪淼乔薪瑗刘敏唐丽杰李一经
- 关键词：猪流行性腹泻病毒N蛋白干酪乳杆菌免疫反应
- 猪流行性腹泻病毒功能性受体的鉴定被引量：10
- 2009年
- 为研究猪氨基肽酶(Porcine Aminopeptidase N,pAPN)是否作为猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的细胞感染受体,通过转染技术,使PEDV非容许性细胞MDCK表达pAPN,并用PEDV感染转染细胞。结果发现转染的MDCK细胞可以感染PEDV,并且该病毒可以在转染细胞中连续传代。免疫荧光法鉴定存在病毒抗原。进一步实验证实,抗pAPN血清可以抑制PEDV感染转染的MDCK细胞。这些结果展示转染的MDCK细胞、pAPN表达及PEDV病毒复制之间存在直接联系,证明pAPN是PEDV的细胞感染受体之一。
- 李宝贤马广鹏葛俊伟李一经
- 关键词：受体猪流行性腹泻病毒冠状病毒
- 猪氨基肽酶在昆虫细胞的分段表达及鉴定被引量：3
- 2012年
- 为研究猪的氨基肽酶(Porcine aminopeptidase,pAPN)的特异性功能区域及作用机制,将除去信号肽的pAPN分为SPA,SPB和SPC三段,利用一对同尾酶XholI和SalI将信号肽分别与SPA,SPB和SPC相连接后再构建到杆状病毒表达载体pFastBacTM1上,通过杆状病毒-昆虫细胞表达体系进行蛋白表达。结果表明,经SDS-PAGE分析可见获得的目的蛋白与预期大小相一致,即SPA约为42 ku,SPB和SPC相同,约为56 ku的分泌蛋白;经western-blot鉴定三段蛋白均可与天然的pAPN抗血清特异性结合,表明已经成功获得SPA,SPB和SPC三段蛋白,可为进一步研究pAPN特异性功能区域奠定基础。
- 单智夫唐丽杰乔薪媛葛俊伟李一经
