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水禽源禽1型副黏病毒强毒RT-PCR方法的建立被引量：2: 2009年; 参照GenBank上登录的水禽源禽1型副黏病毒强毒株F基因序列设计引物,建立检测水禽源禽1型副黏病毒强毒株的RT-PCR方法。该方法能从水禽源禽1型副黏病毒强毒株扩增出1条400 bp的特异片段,从水禽源禽1型副黏病毒弱毒、鸭瘟病毒、鸭1型肝炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性法氏囊病病毒、H9亚型禽流感病毒和禽多杀性巴氏杆菌等均不能扩增出目的片段。敏感性试验显示该RT-PCR方法最低可检测出10 pg的病毒核酸。因此,该RT-PCR方法可用于水禽源禽1型副黏病毒强毒的临床诊断。; 施少华程龙飞陈红梅傅光华杨维星黄瑜; 关键词：强毒株

企鹅源禽1型副黏病毒基因组序列分析被引量：1: 2009年; 为了从分子水平上探讨企鹅源禽1型副黏病毒BP01的演化,根据GenBank登录的鹅源禽1型副黏病毒基因序列设计引物,运用RT-PCR方法于国内外首次测定了企鹅源禽1型副黏病毒全基因组序列,其全长为15192nt。经分析表明BP01病毒基因组与SF02株和ZJ1株等鹅源禽1型副黏病毒同源性最高,分别为99.1%和99.0%;与IT-227/82和dove/Italy/2736/00等鸽源禽1型副黏病毒同源性分别为90.2%和88.1%;而与Hert/33和LaSota等鸡源禽1型副黏病毒的同源性最低,仅分别为87.9%和83.2%。对F基因第47～435nt进行系统进化树分析和F基因第334～1682nt进行HinfⅠ、BstOⅠ、RsaⅠ酶切位点分析,确定BP01株病毒为基因Ⅶ型。F蛋白裂解位点氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,符合禽1型副黏病毒强毒株的特性,经预测发现BP01株病毒F蛋白的七肽重复序列分别在第143～189位氨基酸残基和第461～503位氨基酸。通过对主要毒力基因推导的氨基酸序列进行比较发现,水禽源与其它源F蛋白有14个氨基酸不同,HN蛋白上有2个氨基酸的不同,而P蛋白有20个氨基酸的不同,且在第151～166位氨基酸存在一个明显的突变域。; 施少华黄瑜程龙飞傅光华陈红梅陈珍苏敬良; 关键词：企鹅全基因组

番鸭源禽1型副黏病毒HN基因主要抗原结构域和V基因融合表达载体的构建: 2009年; 为构建番鸭源禽1型副黏病毒HN主要抗原结构域(HNd)和V基因融合表达载体,经PCR及融合PCR分别从重组质粒pMDHN和pMDP中扩增HN基因主要结构域和V基因cDNA。将HNd经KpnⅠ和BamHⅠ双酶切、V基因用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,分别定向插入真核载体pcDNA3的多克隆位点相应的酶切位点中,对2个单表达质粒pcDNAHNd和pcDNAV进行酶切和测序鉴定。利用融合PCR技术扩增出HNd-V基因,定向克隆至pcDNA3的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切酶切位点之间,转化感受态细胞后,经PCR反应初筛后,对阳性克隆进行酶切分析及测序鉴定。对单表达重组质粒进行酶切分析及测序鉴定,结果表明:HNd和V基因已被正确定向克隆至真核表达载体pcDNA3,成功构建了2个基因的单表达质粒pcDNAHNd和pcDNAV;对融合重组质粒酶切分析和测序鉴定表明,HNd-V融合基因正确克隆进真核表达质粒pcDNA3中,成功构建了融合表达载体pcDNAHNd-V。; 傅光华程龙飞施少华陈红梅彭春香黄瑜; 关键词：融合表达载体

番鸭源禽1型副粘病毒PX2/03株P基因的克隆及原核表达被引量：4: 2007年; 根据GenBank中水禽源1型副粘病毒(ZJ1)P基因序列设计2对引物,运用RT-PCR技术从1株雏番鸭源禽1型副粘病毒(PX2/03)的基因组中扩增出P全基因的cDNA.测序结果表明,P基因全长1441 nt,包含1个完整的开放阅读框架,编码395个氨基酸.与GenBank中已发表的P基因比对发现,该基因与近年来分离的鹅源禽1型副粘病毒分离株的亲缘关系很近.以分别含BamHⅠ、XhoⅠ的1对引物对该目的基因进行亚克隆后插入到pET32 a原核表达载体中,构建了pETP原核重组载体,将该重组载体转化入BL21(DE3)后,成功诱导表达了分子质量大小约为62 ku的P融合蛋白,经W estern b lotting检测证实表达产物具有免疫活性.; 傅光华程龙飞施少华彭春香黄瑜; 关键词：番鸭 P基因克隆原核表达

鸭圆环病毒全基因组克隆与序列分析被引量：44: 2008年; 为研究鸭圆环病毒全基因组的分子生物学特性,运用重叠PCR技术从鸭组织脏器提取的DNA中扩增出2条核苷酸序列,拼接后对其核酸组成、基因组结构及病毒的遗传变异进行分析。结果表明所获病毒核酸为大小1995nt的环型DNA,包含6个ORF,与登录在GenBank中克隆株MuDCV(AY228555)的同源性高达97·4%,可见所扩增的核酸序列为鸭圆环病毒基因组序列。; 傅光华程龙飞施少华彭春香陈红梅黄瑜; 关键词：鸭圆环病毒全基因组克隆

鸡新城疫病毒F48E9强毒株NP基因的序列分析: 2009年; 根据GenBank登录的鸡新城疫病毒NP基因序列设计引物,利用RT-PCR对F48E9强毒株NP基因进行扩增,将扩增产物经纯化后连入pMD18-T载体,通过PCR和酶切鉴定出阳性重组质粒,经测序后获得F48E9 NP基因序列。经分析发现该基因的ORF总长为1 470 bp,编码489 aa,NP蛋白有4个高度保守的Cys位点,分别位于第55、78、139、213位,且在401～440位和461～481位区域变异较大。将F48E9株与19株参考毒株的相应序列进行比较得到核苷酸序列同源性为87.9%～92.3%,氨基酸序列同源性较高,为92.2%～98.0%,遗传进化分析表明F48E9株相对独立,与参考毒株的遗传距离较远。; 陈珍施少华程龙飞傅光华陈红梅万春和林芳林建生黄瑜; 关键词：鸡新城疫病毒 NP基因

鸭圆环病毒基因组序列分析及其C1截短基因的原核表达被引量：4: 2009年; 本试验参照GenBank登录的鸭圆环病毒（DuCV）基因组序列，设计2对DuCV特异性引物，运用PCR方法从病死番鸭法氏囊中分段扩增出DuCV LJ07株基因组，将扩增片段分别克隆获得重组质粒，测序后得到全长为1995 nt的DuCV LJ07株全基因组序列，与GenBank登录的DuCV基因组序列的同源性达83．6％～96．5％。经基因结构分析发现，DuCV LJ07株的基因组有6个开放阅读框（ORF），其中V1、C1是2个最主要的ORF，分别编码Rep蛋白和Cap蛋白；在V1和C1的5’起始端之间有与启动滚环复制有关的一茎环结构和2个正向重复序列。本试验同时还构建了去除核定位信号的C1截短基因的原核表达载体，诱导表达后经sDS-PAGE和Western-blotting分析表明C1截短基因已成功地在大肠杆菌中表达出Cap截短蛋白，为建立DuCV抗体血清学检测方法和开展DuCV感染的血清学调查奠定了基础。; 施少华陈珍杨维星傅光华程龙飞陈红梅彭春香黄瑜; 关键词：鸭圆环病毒基因组原核表达

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