国家自然科学基金(30671563) 作品数:12 被引量:20 H指数:3 相关作者: 张杰 刘永生 丁耀忠 马艳平 陈豪泰 更多>> 相关机构: 中国农业科学院兰州兽医研究所 甘肃农业大学 辽宁省动物疫病预防控制中心 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 甘肃省自然科学基金 甘肃省科技攻关计划 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 更多>>
O型口蹄疫病毒基因组测序与分析 被引量:1 2013年 为明了O型口蹄疫病毒基因组的结构特征及其变异与结构、功能的关系,以及系统发生关系,利用DNA Star程序进行了O型口蹄疫病毒基因组序列同源性分析、多重排比。结果表明,O型口蹄疫毒株(O/CHA/99)基因组ORF大小为6 999 nt,编码2 332个氨基酸(aa)的多聚蛋白;口蹄疫病毒RNA的保守性、变异性及其遗传变异,对理解O型口蹄疫病毒的感染、宿主范围和传播有重要作用。 陈思敏 王琳萱 张印红 刁贺军 梁淑兰 任丽杰 张秀萍关键词:口蹄疫病毒 基因组 测序 牛朊蛋白在COS-7细胞中的表达 2010年 为研究重组蛋白pCI-PrP27-30在COS-7细胞中的表达,用pCI-PrP27-30重组表达载体转染COS-7细胞后,经不同浓度的G418筛选后获得稳定的细胞系,然后用间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot技术检测目的蛋白的表达。结果表明目的蛋白在COS-7细胞中成功表达。 丁耀忠 张杰 刘永生 陈豪泰 马丽娜 马艳平 杨生海 王猛 刘文倩 殷宏关键词:COS-7细胞 重组PrP102-242在COS-1中的表达及表达产物的检测 2010年 目的重组的PrP102-242在COS-1细胞中的稳定表达以及表达产物的检测。方法重组表达载体pCI-PrP102-242转染COS-1细胞后,经不同浓度的G418筛选后获得稳定的细胞系,然后用间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot检测目的蛋白的表达。结果间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot检测到目的蛋白在COS-1细胞中的表达。结论目的蛋白PrP102-242在COS-1细胞中的成功表达为下一步研究PrPc的结构和功能奠定了基础。 丁耀忠 刘永生 陈浩泰 刘文倩 张杰关键词:朊蛋白 Expression of Recombinant Bovine Prion Protein PrP27-30 in CHO-K1 Cells 2010年 [Objective] To investigate the possibilities of expressing bovine PrP27-30 gene in CHO-K1 cells. [Method] The purified PCR products of PrP27-30 were digested and ligated to the pCI-neo vector to yield pCI-neo-PrP27-30 that was used as an expression vector. Then CHO-K1 cells were transfected by pCI-neo-PrP27-30, and stable expression clone cells were screened by methotrexate (MTX) at a concentration of 0.1 and 1.0 umol/L. The transient expression was detected by indirect immunofluorescence assay and western blot. [ Result] After drug selection with MTX, the expression of PrP27-30 gene was detected in CHO-K1 cells. [Conclusion] Recombinant protein PrP27-30 expressed in CHO-K1 cells has better immunoreactivity and can be used to study secondary structure and regulation mechanism of pathological isoform of prion protein (prpC). DING Yao-zhong MA Li-na ZHONG Jie LIU Yong-sheng牛朊蛋白在CHO/dhfr-细胞中的稳定表达 被引量:4 2009年 从T载体上得到的目的基因和dhfr共扩增基因真核表达载体构建了pCI-PrP102。纯化后的重组质粒通过脂质体转染CHO/dhfr-细胞,经MTX加压筛选获得稳定表达的细胞株,间接免疫荧光试验检测到目的蛋白的表达。 丁耀忠 张杰 刘永生 陈豪泰 曾巧英 马丽娜 马艳平 杨生海 殷宏Expression of Recombinant Protein Bovine Prion pCIp264 in COS-7 Cells and Its Detection 2010年 Yaozhong Ding Yongsbeng Liu Wenqian Liu Yanping Ma Meng Wang Shenghai Yang Jie Zhang关键词:牛海绵状脑病 细胞蛋白 COS 传染性海绵状脑病 牛叠朊编码基因缺失突变体的构建及在大肠杆菌中的表达 2011年 本实验室已制备出多株针对牛叠朊的单克隆抗体,为充分鉴定这些单克隆抗体针对的抗原表位,通过基因克隆表达的策略获取牛叠朊基因缺失突变体的重组蛋白,以期为单克隆抗体的表位鉴定提供物质材料。经过对牛成熟叠朊编码基因及预测蛋白结构特征的分析,设计表达9个缺失突变体的引物。以PCR扩增出叠朊基因的缺失突变体,与pET-30a(+)表达载体连接后转入E.coli DH5α中,经双酶切和测序鉴定后将重组质粒转入E.coliJM109和E.coli BL21表达宿主菌中,经IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达产物的相对分子质量、相对表达量和反应原性。结果表明,成功构建了9个牛叠朊编码基因的缺失突变体,通过IPTG的诱导表达,其中有6个缺失突变体被大肠杆菌高效表达,并且具有较好的反应原性,这为其单克隆抗体表位的进一步鉴定奠定了物质基础。 杨生海 殷宏 刘永生 马艳平 丁耀忠 孙彩琴 丁小丽 张杰关键词:缺失突变体 免疫印迹 酶联免疫吸附分析 细胞型朊蛋白(PrP^c)研究进展 被引量:5 2008年 张杰 路伟 刘永生关键词:海绵状脑病 慢性消耗性疾病 动物体内 蛋白构象 疯牛病 传染性海绵状脑病分子生物学及免疫学诊断技术研究进展 被引量:1 2009年 传染性海绵状脑病(TSE)也称为朊毒体病,是一种致死性神经退化性疾病,其主要的病理特点是:神经元变性、消解,形成脑实质多孔性泡化,细胞的朊蛋白(PrPC)转变成朊毒体(PrPSC)是TSE的一个基本特征。本文就TSE的分子生物学特点及免疫学诊断方面作一概述。 杨生海 殷宏 张杰 刘永生 陈豪泰 马丽娜 马艳平 丁耀忠关键词:传染性海绵状脑病 朊蛋白 牛、羊、人叠朊基因的克隆与分析 被引量:3 2007年 为了解我国哺乳动物叠朊基因Prnd的生物信息,本实验采用PCR方法克隆了秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人的Prnd,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的三种哺乳动物的Prnd均位于1个单一的外显子内,与GenBank登录的相应序列具有高度同源性。秦川黄牛与甘肃土种绵羊Prnd的同源性为96.8%,推导氨基酸序列同源性为93.3%。汉族人Prnd与秦川黄牛和甘肃土种绵羊Prnd的同源性均为80%,推导的氨基酸序列同源性均为76.3%。氨基酸一级结构分析显示3种Prnd编码的叠朊均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合区组成。二级结构预测表明,3种Prnd编码的叠朊均由3个α-螺旋和2个β-片层组成。本研究获得的这3种主要哺乳动物的Prnd信息为一进步研究叠朊的结构与功能奠定了基础。 张杰 张鹏 刘永生 陈豪泰 姜海霞 路伟 朱小玲 谢庆阁关键词:传染性海绵状脑病 朊蛋白 朊蛋白基因