国家重点基础研究发展计划(2011CB111612)
- 作品数：24 被引量：82H指数：6
- 相关作者：缪卫国郑服丛刘文波梁鹏张宇更多>>
- 相关机构：海南大学漯河市农业科学院教育部更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程经济管理更多>>
- 一种适用于田间LAMP检测的橡胶树白粉菌DNA粗提取方法被引量：2
- 2018年
- 为了探索建立一种快速、简便适用于田间LAMP (loop-mediated isothermal amplification)检测的橡胶树白粉菌DNA粗提取方法,在无液氮也不需要研磨的情况下,利用渗透压破壁的方法提取橡胶树白粉菌DNA。通过改变渗透压对橡胶树白粉菌DNA进行提取,使用特异性引物OH-666A (5'-ACTGACACCCCAT CACGACTAAAA-3'),OH-666S (5'-CATATTCTCACGAAGGAAAGCATTG-3')进行PCR扩增,并与试剂盒提取DNA的PCR产物进行比较,对提取的DNA进行LAMP检测。20μL甘油加入600μL ddH2O,离心10 min,去上清,加50μL水离心2 min即可提出橡胶树白粉菌的DNA,PCR扩增能获得清晰目的条带,对得到的扩增产物进行测序,同时对提取的DNA进行LAMP检测,并与实验室常规方法比对,所有结果均一致。破壁法可用于橡胶树白粉菌DNA的快速提取,由于不需要特殊仪器,且快速方便,在田间容易实现,所以更适用于田间橡胶树白粉菌DNA的田间粗提取,对开展橡胶树白粉病田间分子预测提供了技术支持。
- 史梦玉林春花刘文波缪卫国郑服丛
- 关键词：DNA
- 解淀粉芽孢杆菌HAB-6抑菌物质及其相关基因的分析被引量：6
- 2018年
- 芽孢杆菌是重要的生防菌株,分析了解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HAB-6菌株的抑菌物质及其抑菌活性。采用特异性PCR和液质联用(LC-MS)等方法对HAB-6菌株的抑菌物质进行初步研究。通过对编码合成脂肽类抗生素的10个基因进行PCR扩增,分别得到与yndj、srf AB、itu D、fen D、itu C同源的基因5个;扩增编码合成脂肽类物质关键合成酶基因,得到与fen B、lpa-14、sfp、myc B、itu A同源的基因5个;LC-MS结果显示,HAB-6菌株能产生C14Iturin A、C17Iturin A、C13Surfactin A、C15Surfactin C等脂肽类化合物,但通过与病原真菌对峙抑菌活性检测,脂肽类物质没有抑制真菌活性。结果表明,HAB-6菌株具有脂肽类物质的合成基因和相关调控基因,代谢产生伊枯草菌素(iturin)、表面活性素(surfactin),但是酸沉淀提取得到的脂肽类物质不是HAB-6菌株抑制真菌的主要物质,其抑菌成分种类和代谢脂肽类物质的途径可能与已知的途径有所不同,有待进一步研究。
- 王皓楠靳鹏飞康迅谢清标刘文波郑服丛缪卫国
- 关键词：抑菌活性
- hpaXm和hpaXm-IP基因对棉花角斑病菌V8表型及HR的影响
- 2020年
- 试验前期通过构建相应敲除载体,采用电转化的方法,分别获得Xanthmonas.citri subsp.malvacearum(简称Xcm)菌株的hpaXm基因缺失突变菌株V8ΔhpaXm和hpaXm-IP基因缺失突变菌株V8ΔhpaXm-IP。通过特殊生长平板及烟草接种试验表明,与V8菌株相比,突变菌株胞外多糖产量以及胞外纤维素酶、脂酶活性不变,V8ΔhpaXm菌株的胞外淀粉酶活性显著降低;3种菌株都不能产生胞外蛋白酶;突变菌株在烟草上形成的坏死斑面积变小。表明hpaXm和hpaXm-IP基因与病菌胞外淀粉酶活性及病菌激发烟草过敏反应的能力有关,与胞外多糖、纤维素酶、蛋白酶和脂酶产生无关。同时预示了hpaXm-IP可能具有牵引HpaXm蛋白泌出的能力,且HpaXm蛋白不是V8菌株中唯一激发烟草HR的活性物质,hpaXm及hpaXm-IP可能会影响V8菌株的致病性,但不是必然的。
- 王清张勇跃孟凡奇刘志坚缪卫国
- 关键词：细菌病害表型胞外酶
- 转hpa5Xm烟草的获得及其对TMV抗病性分析
- 从棉花角斑病菌(Xanthomonas citri subsp.malvacearum)中克隆并鉴定出的hpa Xm是一类新的harpin蛋白,本研究首次将来自棉花角斑病菌的hpa Xm基因采用农杆菌介导法导入模式生物三...
- 李乐刘悦谢琳琳刘文波林春花郑服丛缪卫国
- 关键词：转基因烟草TMV抗性
- 文献传递
- 橡胶树白粉菌MAPK级联信号途径全基因组鉴定及途径模型建立被引量：1
- 2015年
- 从全基因组水平鉴定橡胶树白粉菌(Oidium heveae)的MAPK级联信号途径基因,并对其进行Blast比对、蛋白质结构域及聚类分析,构建橡胶树白粉菌中的MAPK级联途径简图,为深入研究其MAPK级联途径的功能奠定基础。利用橡胶树白粉菌基因组数据库和小麦白粉菌(Blumeria graminis)的同源序列进行比对,获得25个MAPK信号途径相关基因。在橡胶树白粉菌基因组中发现了2个MAPK基因、2个MAPKK基因和5个MAPKKK基因。多重序列比对与保守位点分析表明,橡胶树白粉菌MAPK信号途径的激酶结构域均高度保守。在橡胶树白粉菌中构建Fus3/Kss1MAPK、Hog1 MAPK、Slt2(Mpk1)MAPK 3条MAPK级联途径,为深入探究植物病原真菌MAPK超家族的功能奠定了基础。
- 孙雅琦梁鹏刘文波缪卫国郑服丛
- 一株广谱生防芽孢杆菌的鉴定及脂肽类物质的研究
- 本实验室从棉花根系土壤中分离得到一株具有抑菌效果的细菌HAB‐2,采用形态学观察、特异PCR以及平板对峙和抑菌率计算等方法,研究了该菌的种类及其对植物病原真菌拮抗谱,并检测其脂肽类抗菌物质合成相关基因表达情况。结果表明:...
- 靳鹏飞王皓楠刘文波邬国良郑服丛缪卫国
- 关键词：抗真菌活性
- 文献传递
- 橡胶树白粉病菌在疏水介质表面的侵染特征和RNA提取被引量：1
- 2017年
- 将白粉菌孢子接种到石蜡膜(parafilm)介质表面,观察不同温度条件下橡胶树白粉菌(Oidium heveae B.A.Steinmann)菌株孢子在疏水介质上的侵染过程,确定0~24 hpi孢子侵染结构发育特征,提取侵染发育过程白粉菌的总RNA,采用RT-PCK扩增分析18S保守基因并评价其质量。结果表明:橡胶树白粉菌孢子在15~34℃温度条件下接种于parafilm介质表面能萌发并形成附着胞,萌发和附着胞形成的适温范围22~28℃,最适离体诱导温度22℃。孢子在parafilm介质表面0~24 hpi(hour Post moculation)侵染发育过程可分为未萌发(0hpi)、萌发(4 hpi)、附着胞形成(6,8 hpi)和次生附着胞形成(16,24 hpi)等4个阶段;采用改良Trizol方法提取白粉菌孢子侵染发育过程4个阶段总RNA,可满足转录组文库要求,并扩增18S序列,进化分析显示其与白粉菌科物种为同一分支。结果表明,病原菌孢子在22~28℃温度条件下能够在介质表面形成侵染结构,0,4,6,8,16,24 hpi侵染发育阶段总RNA可用于转录组测序分析研究。
- 梁鹏李响何其光刘文波缪卫国郑服丛
- 关键词：萌发附着胞
- Harpin类蛋白纳米粒的制备及促生作用
- 2012年
- HarpinXoo和HarpinXm分别来自水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)和棉花角斑病菌(Xanthomonas citri subsp.malvacearum,Xcm),都具有Harpin的特性。笔者将HarpinXoo和HarpinXm蛋白制成纳米粒剂型进行诱导烟草过敏性反应等研究,结果表明,这2种蛋白与其蛋白纳米粒都能在烟草叶片上激发过敏性反应和氧爆发现象,对烟草种子萌发具有促进作用,尤其HarpinXm蛋白纳米粒能更好地激发烟草产生氧爆发,促生效果达104.5%。HarpinXoo与HarpinXm蛋白纳米粒在释放的初始阶段即出现突释,至48h时分别达到83.9%和84.5%,起到持续性的促生效果。
- 李琳万三连刘文波张宇缪卫国郑服丛
- 关键词：纳米粒过敏性反应
- 一株广谱生防芽孢杆菌的鉴定及脂肽类物质的研究
- 本实验室从棉花根系土壤中分离得到一株具有抑菌效果的细菌HAB-2,采用形态学观察、特异PCR以及平板对峙和抑菌率计算等方法,研究了该菌的种类及其对植物病原真菌拮抗谱,并检测其脂肽类抗菌物质合成相关基因表达情况。结果表明:...
- 靳鹏飞王皓楠刘文波邬国良郑服丛缪卫国
- 关键词：抗真菌活性
- 文献传递
- 棉花角斑病菌遗传驯化体系的建立被引量：2
- 2016年
- Xanthmonas citri subsp.malvacearum（Xcm）是棉花角斑病的病原,由于缺乏适合的遗传驯化体系,难于对其特定的基因进行研究,所以建立高效的基因缺失突变系统,是迫切需要解决的问题。采用去甲基化氮胞苷（5-AZA）驯化野生菌株Xcm 8号小种菌株V8和V8无细胞胞外物（CFEs）驯化重组质粒p K18mobsac B：：N1012及p K18mobsac B：：m762这2种驯化方法,以来自V8的hpa Xm N和hpa Xm为靶基因验证其有效性。结果表明,成功获得了△hpa Xm N和△hpa Xm突变体;虽然2种驯化方式都能获得转化子,但驯化菌株的电转化效率是驯化质粒的10~100倍。遗传驯化体系的建立消除了Xcm V8由于限制修饰系统引起的转化障碍,实现了特定基因的定点突变,为后续获得Xcm V8其他基因缺失突变体奠定了基础。
- 王清梁鹏李响刘文波林春花郑服丛缪卫国
- 关键词：V8驯化定点突变
