国家自然科学基金(81370873)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 糖基化终末产物上调人胰岛微血管内皮细胞黏附分子的表达和白细胞黏附被引量：1
- 2014年
- 目的 研究糖基化终末产物（AGEs）对人胰岛微血管内皮细胞（HIMVEC）黏附分子表达和白细胞黏附的影响.方法 HIMVEC细胞在200 mg/L的AGEs刺激后,用细胞基础的酶联免疫吸附法（ELISA）和Western blotting法检测细胞表面黏附分子的表达;并与BCECF标记的白细胞共培养检测与白细胞的黏附能力.采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting分别检测HIMVEC细胞上AGEs受体（RAGE）、蛋白激酶Cβ（PKC β）和蛋白激酶A（PKA）的mRNA表达情况.随后给予PKC β抑制剂LY333531或PKA激活剂8-Br-cAMP,观察对HIMVEC黏附分子表达的影响及和白细胞黏附的影响.两组间比较采用t检验进行分析.结果 与对照组相比,AGEs处理后HIMVEC表达P选择素、E选择素和血管细胞黏附分子1（VCAM-1）均上调（分别为1.10 ±0.13比0.64±0.14,0.83 ±0.06比0.47 ±0.05,0.87 ±0.09比0.43±0.07,t =4.93、9.40、7.61,均P＜0.05）,并且与白细胞的黏附较对照组明显增加（54 ±4比23 ±3,t=12.69,P＜0.05）.与AGEs组比较,RAGE抗体组P选择素、E选择素和VCAM-1的表达明显降低,组间差异具有统计学意义（t=5.69、6.89、5.43,均P＜0.05）.RAGE抗体组白细胞黏附明显少于AGEs组（54±4比31 ±4,t=8.22,P＜0.05）.与对照组相比,AGEs处理HIMVEC 4 h和18h,在mRNA水平和蛋白质水平均检测到RAGE和PKCβ的表达上调,但PKA的表达下调（t=10.94、7.76、21.82、5.85、10.96、11.47,均P＜0.05）.与AGEs组相比,在AGEs处理时给予PKCβ抑制剂LY333531或PKA激活剂8-Br-cAMP,均可降低HIMVEC上P选择素、E选择素和VCAM-1的表达水平（=7.60、6.60、6.25、11.58、4.08、3.47,均P＜0.05）,并减少白细胞的黏附（t=7.67、8.89,均P＜0.05）.结论 AGEs通过RAGE受体上调PKCβ和下调PKA增加HIMVEC上黏附分子的表达,促进白细胞的黏附,可能是糖尿病状态下胰岛中白细胞浸润的机制之一.
- 刘虹麟许世清王在彭亮房青邓婷婷游嘉娄晋宁张文健
- 关键词：糖基化终末产物黏附分子白细胞
- C肽对晚期糖基化终末产物诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响被引量：3
- 2015年
- 目的研究C肽对晚期糖基化终末产物（AGEs）诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响及其机制。方法将大鼠。肾小球系膜细胞按照下列分组培养：对照组：正常培养基培养；AGEs组：培养基中含有200mg／LAGEs；AGEs＋C肽组：培养基中含有200mg／LAGEs和5μmol／LC肽；AGEs＋C肽＋H89组：预先用含有H89（终浓度10μmol／L）的培养基培养30min后加入AGEs（终浓度200mg／L）和c肽（终浓度5μmol／L）。采用荧光法检测细胞内活性氧的水平，应用格里斯反应检测细胞一氧化氮（NO）的生成水平，采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）或Western blotting检测晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、蛋白激酶A（PKA）、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达水平。采用非参数检验（Kruskal—WallisH检验）进行组间比较，采用Mann-WhitnevU检验进行两两比较。结果AGEs组系膜细胞生成ROS和NO较对照组增多（分别为193．7±6．4比136．1±4．9和27．2±4．7比15．5±0．7，均U=0，P〈0．05），C肽可以抑制ROS和NO的产生，AGEs＋C肽组的ROS和NO水平与AGEs组差异有统计学意义（分别为136．9±14．3比193．7±6．4；16．0±2．1比27.2±4．7；均U=0，P〈0．05）。与对照组相比，AGEs上调RAGE的表达，下调PKA的表达，并且AGEs可上调NOX4和iNOS的表达（分别为0．565±0．027比0．148±0．006，0．085±0．035比0．518±0．019，0．912±0．055比0．105±0．012，0．279±0．003比0．126±0．004，均U=0，P〈0．05）；C肽处理组较AGEs组RAGE的表达下调，PKA的表达上调，NOX4和iNOS的表达下调（分别为0．159±0．003比0．565±0．027，0．594±0．079比0．085±0．035，0．085±0．005比0．912±0．055，0．071±0．016比0．279±0．003，均U=0，P〈0．05）。与C肽组比较，H89组阻断PKA激活后，ROS和NO生成增多（分别为195．7±9．3比149
- 许世清刘虹麟娄晋宁王在彭亮房青游嘉邓婷婷郭彬张文健
- 关键词：C肽系膜细胞氧化应激蛋白激酶A晚期糖基化终末产物
