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Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体的制备被引量：3: 2006年; 目的:用不同的方法制备Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体,探索Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗可行的应用途径。方法:采用冻融法、逆相蒸发法、钙融合法分别制备Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体,在透射电镜下观察脂质体颗粒的大小,应用紫外分光光度计检测蛋白疫苗的包封率,并用ELISA法对Hsp70-HSV-2gD抗原活性进行测定。结果:逆相蒸发法制备的Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体包封率最大,达到(53±2.0)%,所制备的脂质体粒圆形,直径大小较一致,约600 nm,具有抗原活性。结论:成功制备了Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体,逆相蒸发法为制备Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体的最好方法。; 樊建勇杨慧兰王捷关蕾王颖成桂明仕瑶慧; 关键词：单纯疱疹病毒阳离子脂质体蛋白疫苗

单纯疱疹病毒II型CTL表位DNA疫苗的Th1/Th2免疫应答研究被引量：6: 2007年; 目的探讨单纯疱疹病毒II型(HSV-2)CTL表位疫苗对小鼠Th1/Th2型免疫应答的影响。方法用构建的HSV-2pVAX-gD-CTL重组质粒免疫BALB/c小鼠3次,末次免疫后第4周检测小鼠血清中gDIgG水平;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中INF-γ,IL-4水平;流式细胞仪测定小鼠CD4+,CD8+T淋巴细胞亚群。结果HSV-2pVAX-gD-CTL疫苗免疫小鼠后可以诱导脾淋巴细胞增殖及分泌INF-γ和IL-4,诱导CD4+,CD8+T细胞百分比的升高;并能刺激血清HSV-2gD特异性抗体的产生。其中pVAX-gD-CTL组在脾淋巴细胞刺激指数及其分泌INF-γ水平、CD4+,CD8+T细胞百分比升高方面均显著高于pVAX-gD对照组。结论CTL表位对单纯疱疹II型重组DNA疫苗诱导的Th1型免疫应答有促进作用。; 杨慧兰周翠关蕾赵举峰樊建勇; 关键词：CTL表位 TH1/TH2免疫应答

脂质体包裹HSV-2gD-HSP70融合蛋白诱导小鼠免疫应答的研究被引量：1: 2007年; 目的探讨局部外用脂质体包裹单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白D(glycoprotein D,gD)与结核杆菌热休克蛋白(heat shock protein,HSP)70融合蛋白疫苗在小鼠体内诱导产生特异性免疫应答的情况。方法局部外用脂质体包裹gD,gD+HSP70,HSP70-gD融合蛋白分别免疫BALB/c小鼠3周,末次免疫后第4周检测小鼠血清中gD IgG水平,同时分离小鼠脾淋巴细胞,并用HSV-2gD蛋白刺激,用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况及ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中γ-干扰素(INF-γ)、白细胞介素4(IL-4)水平。结果脂质体包裹gD、gD+HSP70和HSP70-gD均可以诱导小鼠产生针对HSV-2gD蛋白的抗体并诱导脾淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ和IL-4,脂质体包裹HSP70-gD组在血清抗体水平、脾淋巴细胞刺激指数及其分泌IFN-γ、IL-4水平方面均显著高于脂质体包裹gD+HSP70组和gD组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HSP70可以促进gD蛋白诱导小鼠特异性免疫应答反应。; 樊建勇杨慧兰; 关键词：HSP70热休克蛋白质类糖蛋白类脂质体

单纯疱疹病毒Ⅱ型新型DNA疫苗的构建被引量：1: 2009年; 目的:针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)包膜糖蛋白gD以及包膜糖蛋白gB的CTL表位,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。方法:根据Gene Bank提供的HSV-2 G株糖蛋白D基因(gD)序列设计PCR引物,以已构建好的pc-gD为模板,特异性扩增HSV-2 gD片段,将其克隆于pVAX1载体中构建成质粒pVAX-gD,再将其双酶切后引入CTL片段构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。结果:将重组的pVAX-gD-CTL真核表达质粒转化大肠杆菌后,筛选阳性克隆进行酶切及测序鉴定。结论:初步构建HSV-2 pVAX-gD-CTL重组真核表达质粒。; 关蕾赖维杨慧兰朱国兴许庆芳陆春; 关键词：CTL表位 DNA疫苗

全长单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D毕赤酵母表达载体的构建被引量：3: 2005年; 目的:构建单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)糖蛋白D(gD)的毕赤酵母表达载体,为进一步研制重组抗原诊断试剂、研究亚单位疫苗奠定基础。方法:PCR从HSV-2基因组中扩增gD2基因,再用PCR的方法在基因两端加入两个限制性内切酶切位点XhoⅠ和XbaⅠ;PCR产物经过双酶切后按照正确的读码框顺序克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA中;转化到大肠杆菌感受态细胞TOP10F'中,抗生素得到筛选转化子。结果:核酸序列测定PCR扩增的gD2片段与GeneBank中HSV-2G株gDDNA碱基同源性达98.4%,氨基酸同源性达95.7%。在实验过程中构建了四个表达载体,经过双酶切后琼脂糖电泳鉴定正确。结论:构建了gD2毕赤酵母表达载体四个,其中两个含有HSV-2gB的CTL表位序列。; 刘仲荣曹春来杨慧兰郭勇王捷; 关键词：糖蛋白D 毕赤酵母

pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗阳离子脂质体的制备被引量：1: 2006年; 目的制备pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗阳离子脂质体，为基因免疫和基因治疗寻找一种简单、经济、有效的DNA投递系统。方法采用逆向蒸发法，用卵磷脂、胆固醇、十八胺制备成阳离子脂质体包封pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗，在透射电镜下观察脂质体颗粒的大小，应用紫外分光光度计检测DNA疫苗的包封率，免疫组化检测其转染真核细胞的效果。结果制备的脂质体呈圆形、粒径大小较一致，平均粒径为580nm，DNA疫苗脂质体包封率达到50％～55％，能有效转染真核细胞。结论成功制备了pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗阳离子脂质体。该方法作为提高基因免疫效果的简单、经济、有效的手段之一，为其进一步的研究打下了基础。; 樊建勇杨慧兰关蕾王颖仕瑶慧; 关键词：单纯疱疹病毒阳离子脂质体包封率 DNA疫苗

单纯疱疹病毒2型全长糖蛋白D抗原的原核表达及抗原性分析被引量：1: 2008年; 目的:构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)全长糖蛋白D(gD)基因原核表达质粒,研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达,并鉴定重组蛋白的gD抗原性。方法:提取病毒DNA,PCR扩增出gD基因,克隆于原核表达载体pGEX-4T-1,并转化大肠杆菌BL21。PCR、双酶切及测序证实插入的gD基因序列正确后,IPTG诱导表达融合蛋白GST-gD,并进行免疫学鉴定。结果:获得了gDDNA。测序鉴定表明,该序列与Gen Bank中的序列一致,gD基因已正确插入到pGEX-4T-1中。重组融合蛋白表达载体pGEX-4T-gD经IPTG诱导后能在大肠杆菌中高效表达,Western Blotting证实,该蛋白具有天然gD抗原性。结论:成功构建了融合蛋白表达载体pGEX-4T-gD,在大肠杆菌中获得了有效表达,并证实融合蛋白具有gD免疫原性。为进一步研究gD蛋白的免疫学特性,制备gD亚单位疫苗和单克隆抗体奠定了基础。; 周翠曹春来樊建勇杨慧兰; 关键词：单纯疱疹病毒属糖蛋白D 重组融合蛋白抗原性

热休克蛋白70-Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白DDNA疫苗的构建及表达被引量：7: 2007年; 目的:针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)包膜糖蛋白D(gD),以热休克蛋白70(Hsp70)为载体,构建pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗。方法:将Hsp70和HSV-2gD蛋白的基因分别克隆至真核表达载体pVAX,构建成重组质粒pVAX-Hsp70-gD并测序鉴定。重组质粒pVAX-Hsp70-gD转染COS-7细胞,用免疫组化、SDS-PAGE和W est-ern b lotting方法鉴定重组质粒的表达情况。结果:测序证实重组质粒序列正确,表达产物的SDS-PAGE分析发现,在相对分子量为92 000处有外源蛋白表达,与预期蛋白带一致。免疫组化方法和W estern b lotting也证明,构建的重组质粒能在COS-7细胞内表达。pVAX-Hsp70-HSV2gD组核酸疫苗免疫的小鼠,其脾淋巴细胞培养上清中γ-干扰素的水平高于其他组(P<0.05)。结论:成功构建了pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗,为其进一步的研究打下了基础。; 樊建勇杨慧兰关蕾王颖仕瑶慧; 关键词：热休克蛋白70 糖蛋白D 单纯疱疹病毒 DNA疫苗

单纯疱疹病毒2gD-Hsp70融合蛋白基因的构建及表达被引量：4: 2006年; 构建并原核表达Hsp70-HSV2gD融合蛋白。将Hsp70和HSV-2gD蛋白基因分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,构建成重组质粒pGEX-4T-Hsp70-gD,并测序鉴定。重组质粒pGEX-4T-Hsp70-gD转化大肠杆菌DH5α后,IPTG诱导表达并进行SDS-PAGE分析。表达产物纯化后做Westernblot检测。将其肌注免疫BALB/c小鼠,检测融合蛋白对免疫小鼠脾淋巴细胞增殖、γ-干扰素产生以及血清中gDIgG水平的影响。表达产物的SDS-PAGE分析发现,在相对分子量为118kD处有外源蛋白表达,与预期蛋白带一致。用GST柱得到了纯化的Hsp70-HSV2gD融合蛋白。Westernblot证实,表达产物具有良好的活性。GST-Hsp70-gD组蛋白疫苗免疫的小鼠,其脾淋巴细胞刺激指数和脾淋巴细胞培养上清中γ-干扰素的水平高于其它组(P<0.05)。血清单纯疱疹病毒-2gD蛋白的抗体水平高于其它组(P<0.05)。; 樊建勇杨慧兰王颖关蕾; 关键词：热休克蛋白70 单纯疱疹病毒疫苗

单纯疱疹病毒2 gD蛋白T细胞表位区的预测及克隆: 2007年; 目的预测并克隆单纯疱疹病毒2 gD蛋白T细胞抗原表位集中区。方法根据相关计算机软件和互联网服务器进行表位预测;提取单纯疱疹病毒2基因组,用特异性引物扩增预测的gD蛋白T细胞抗原表位集中区基因,酶切后将目的基因插入载体pGEX-4T-1,对重组载体酶切及测序鉴定。结果预测得到了单纯疱疹病毒2gD蛋白T细胞抗原表位集中区,构建成功重组载体pGEX-gD,经测序确认序列正确。结论单纯疱疹病毒2 gD蛋白T细胞表位集中区的成功预测及克隆可为今后单纯疱疹病毒疫苗的研究打下基础。; 樊建勇杨慧兰关蕾王颖仕瑶慧; 关键词：单纯疱疹病毒表位

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