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半滑舌鳎雌性特异AFLP标记CseF783的克隆及其在遗传性别鉴定中的应用被引量：15: 2009年; 半滑舌鳎性别控制和全雌育种等研究领域中迫切需要一种能够快速鉴定鱼类个体遗传性别的有效方法。文章采用AFLP技术,利用选择性引物组合(E-ACT/M-CAA)从半滑舌鳎中筛选到一条雌性特异的AFLP标记。对该标记进行二次PCR扩增、琼脂糖凝胶回收、克隆、测序。分析表明,序列全长为791 bp,与GenBank中的序列无同源性。以该雌性特异AFLP标记DNA序列为模板,设计了一对特异的PCR引物,成功地将其转化为SCAR(Sequence characterized amplified regions)标记,并在100尾已知性别的半滑舌鳎个体(雌雄各50尾)中进行验证,结果表明,该SCAR标记在所有雌性个体中均扩增得到一条长度为324 bp的DNA条带,而在49尾雄性个体中均扩增不到该DNA条带(有1尾雄性个体例外),证明该SCAR标记是雌性特异的,并可用于半滑舌鳎个体遗传性别鉴定。随后,利用该SCAR标记检测了3日龄半滑舌鳎幼苗,结果表明,雌性个体比例为41.7%。; 马洪雨陈松林李静田永胜季相山张立敬; 关键词：半滑舌鳎 SCAR标记

半滑舌鳎雌性特异扩增片段长度多态性标记的筛选与应用被引量：15: 2007年; 半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis Gtinther）为东北亚特有的名贵冷温性比目鱼类，为我国养殖业的新宠。半滑舌鳎雌鱼生长速度是雄性的2～3倍，若能实现单雌化养殖将大大提高养殖业的经济效益。本研究利用扩增片段长度多态性（AFLP）技术，应用64个引物组合，检测了半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis Giinther）雌雄基因组DNA的多态性，筛选与半滑舌鳎性别相关的AFLP分子标记。实验经过3轮筛选和验证，4个引物组合扩增出7个雌性个体出现频率为100％的DNA片段，我们认为这7个标记是半滑舌鳎雌性特异的AFLP标记，分别命名为CseF382、CseF575、CseF783、CseF464、CseFl36、CseF618和CseF305。同时，将标记CseF382成功转化为SCAR标记，测定了该标记的DNA序列，建立了半滑舌鳎遗传性别鉴定的PCR技术，为半滑舌鳎性别决定机制的研究和性别控制奠定了重要基础。; 李静陈松林邓思平田永胜沙珍霞王清印庄志猛徐建勇温海深; 关键词：半滑舌鳎分子标记

半滑舌鳎脑芳香化酶基因cDNA克隆及表达分析被引量：18: 2008年; 为研究脑型芳香化酶(P450aromB)在半滑舌鳎性别分化中的作用,采用同源克隆策略,从半滑舌鳎脑分离了2184bp长的脑型芳香化酶的全长cDNA,该基因编码498个氨基酸。氨基酸序列和系统发育分析表明,P450aromB属于脑型P450arom,P450aromB的氨基酸序列与其他鱼类脑型P450arom的同源性较高(48.3%-66.1%),与性腺型P450arom的同源性较低(34.2%-49.9%),与自身的性腺型芳香化酶同源性为45.1%。RT-PCR分析表明:P450aromB mRNA的表达具有明显组织特异性,P450aromB只在性腺、脑、鳃和皮肤中表达,且脑中表达量远高于性腺,而在雌雄鱼的其他组织中都不表达。经过甲基睾酮浸浴处理和高温诱导半滑舌鳎由雌性性反转为雄性后,脑中P450aromB的表达量降低,这些结果表明P450aromB参与了半滑舌鳎的性腺分化和性别决定过程。; 邓思平陈松林刘本伟徐建勇田永胜; 关键词：半滑舌鳎芳香化酶 CDNA克隆

Development of 57 Novel Polymorphic Microsatellite Markers in Half-Smooth Tongue Sole(Cynoglossus semilaevis): 2011年; Half-smooth tongue sole (Cynoglossus semilaevis) is a promising species for aquaculture in China.The wild population of C. semilaevis is under threat from environmental factors. Microsatellite markers are very suitable for assessing genetic diversity. Four microsatellite-enriched libraries of half smooth tongue sole (Cynoglossus semilaevis) were constructed,from which 57 polymorphic microsatellites were isolated and characterized.The polymorphism of these microsatellites was assessed by genotyping in 30 individual fish.The number of alleles ranged from 2 to 11, with an average of 4.614 alleles per locus.The values of observed and expected heterozygosities ranged from 0.1000 to 1.0000 and from 0.0966 to 0.8847 respectively. Polymorphism information content (PIC) ranged from 0.0905 to 0.862.These markers would be useful for population structure assessment,genetic linkage map construction and parentage analysis for this species.; MIAO GuidongXU YingWANG DiCHEN SonglinFAN TingjunTIAN Yongsheng; 关键词：微卫星多态性微卫星标记半滑舌鳎多态信息含量遗传连锁图谱

半滑舌鳎养殖群体中自然性逆转伪雄鱼的发现被引量：24: 2010年; 利用雌性特异标记遗传性别鉴定技术,对71尾4龄半滑舌鳎的生理和遗传性别进行鉴定,结果显示32尾生理型雌鱼均能扩增出205bp的雌性特异条带;39尾生理型雄鱼,仅一尾鱼体重显著高于其他雄鱼并扩增出了雌性特异条带,因此这尾鱼遗传上为雌性,是一尾伪雄鱼。对养殖的600尾半滑舌鳎生理雄鱼大规模检测发现,养殖群体自然性逆转伪雄鱼比例为1.66%。对正常雌、雄鱼和1龄自然性逆转伪雄鱼的性腺组织学观察显示,与正常雄鱼相比,伪雄鱼性腺中也有大量的精母细胞,但数量比正常雄鱼的要略少;且未在伪雄鱼的性腺组织中观察到卵母细胞,说明半滑舌鳎性逆转发生在性腺分化期。半滑舌鳎自然性逆转现象的发现有助于解释当前半滑舌鳎养殖群体中雄性率偏高的现象,为半滑舌鳎全雌苗种生产提供了一条新的技术途径,并丰富了鱼类性别分化理论。; 季相山陈松林马洪雨姜运良杨景峰董晓丽; 关键词：半滑舌鳎

半滑舌鳎精子冷冻保存被引量：14: 2009年; 半滑舌鳎精子冷冻保存对于人工繁殖育苗、杂交育种、雌核发育及其性别控制研究具有重要的意义,为此,本文对半滑舌鳎精子冷冻保存方法进行了研究。分别利用2.8mol/L的二甲基亚砜(DMSO)、甘油(Gly)和1,2-丙二醇(PG)冷冻保存该鱼精子。结果显示,DMSO冷冻保存精子的活力较高。利用MPRS+2.8mol/L DMSO以1∶0.5、1∶1、1∶1.5和1∶2的比例稀释并冷冻精子,1∶1比例在冻前能够抑制精子的运动,冻后活力可达82.50±3.54%,显著高于其他稀释比例(P<0.05)。分别利用冷冻保存液A(MPRS+2.8mol/L DMSO)和B(TS-2+2.8mol/L DMSO)稀释平衡精子,精子在A中的冻前快速运动时间、寿命分别为37.75±6.45s和145.00±78.98s,与鲜精无显著差异(P>0.05)。利用以上两种冷冻稀释液冷冻保存精子,精子在A液中的冻后活力和寿命分别可达53.50±6.69%和98.00±13.51s,冷冻效果优于B液(P<0.05)。冷冻后精子的受精率和孵化率分别为55.00±5.00%和35.00±13.23%,受精率与鲜精无显著性差异(P>0.05),因此认为MPRS+2.8mol/LDMSO可用于半滑舌鳎精子的冷冻保存。; 田永胜陈松林季相山孙礼娟翟介明; 关键词：半滑舌鳎精子冷冻保存

紫外灭活的异源和同源精子诱导的半滑舌鳎单倍体胚胎发育过程比较被引量：7: 2009年; 为探讨在雌核发育研究中紫外灭活的异源精子的细胞质等是否对"受精"卵的发育产生影响,本文对紫外灭活的异源和同源精子诱导的半滑舌鳎单倍体胚胎发育过程进行了比较研究。结果显示,在胚盘形成期、二细胞期、多细胞期和囊胚期,异源和同源精子诱导的半滑舌鳎单倍体胚胎发育时序及形态无显著差异。之后,灭活的异源精子诱导的单倍体胚胎发育速度比同源精子诱导的单倍体胚胎要慢,至受精后18 h 48 min已慢1个发育时期,说明在发育前期,异源精子诱导的单倍体胚胎发育阻力更大。肌节期后,同源精子诱导的半滑舌鳎单倍体胚胎发育也严重受阻,与异源精子诱导的单倍体胚胎发育速度无显著差异;且单倍体胚胎陆续大量死亡,但异源精子诱导的单倍体胚胎死亡率明显要大于同源精子诱导的单倍体胚胎。异源和同源精子诱导的单倍体胚胎孵出的仔鱼均表现有单倍体综合症,外形基本一致。为确保紫外线处理将精子完全灭活,当紫外灭活的异源和同源精子诱导的半滑舌鳎单倍体胚胎发育至原肠后期时,各取30粒用倍性分析仪检测其倍性,结果显示全为单倍体。; 季相山陈松林武鹏飞田永胜姜运良; 关键词：半滑舌鳎单倍体胚胎发育倍性

半滑舌鳎Dmrt1α基因的cDNA克隆及其表达被引量：28: 2008年; 在脊椎动物中,许多基因参与了性腺的分化和性别的决定过程,Doublesex and mab-3-related transcription factor1（Dmrt1）编码了一个具有DM框的转录因子,在哺乳类、鸟类、两栖类、爬行类和鱼类中与雄性性腺的分化和形成有关,是一种目前已知从无脊椎动物到人最保守的性别分化相关基因。半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）是近年来新开发的一种理想的增养殖对象,雌性个体生长速度比雄性快2-3倍,为了探索半滑舌鳎的性别决定机理,培育全雌苗种,实现单性养殖,本研究采用同源克隆策略,从半滑舌鳎精巢中获得Dmrt1α cDNA全长1149bp,其中包含777bp的开放阅读框（ORF）,45bp长的5’末端非编码区（UTR）,327bp长的3’末端UTR。氨基酸序列分析表明半滑舌鳎与其他鱼类Dmrt1基因的氨基酸序列同源性为41.9%-58.1%,与鼠和人的Dmrt1氨基酸序列同源性较低,只有32.6%和33.7%。RT-PCR分析表明,Dmrt1α只在半滑舌鳎的精巢中表达,而在雌、雄鱼的脑、肝脏、脾脏、肾脏、肌肉、皮肤、心肌、肠、头肾、鳃、皮肤、小肠、眼以及雌鱼的卵巢中都不表达。与对照组雄鱼和经过甲基睾酮（Methyltestosterone,MT）浸浴处理和高温处理的雄鱼一样,Dmrt1α也在甲基睾酮（MT）处理和高温诱导的由雌性性反转为雄性的精巢中表达,而未经诱导或诱导不成功的雌鱼中仍没有Dmrt1α表达,这些结果表明Dmrt1α可能参与了半滑舌鳎的雄性性别决定过程。; 邓思平陈松林; 关键词：半滑舌鳎 CDNA 克隆

氯化钾诱导中华绒螯蟹三倍体参数的优化被引量：6: 2009年; 基于受精卵早期发育形态学的观察，对利用氯化钾诱导中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）三倍体的条件进行了优化。实验结果表明：中华绒赘蟹受精卵在产出后经历了变圆、体积膨大及卵黄团物质位置移动的过程；在15℃下，中华绒螯蟹受精卵在产出后40min左右释放第一极体，80min左右孵化膜形成并举起，5h左右第二极体释放；氯化钾诱导中华绒螯蟹三倍体的优化参数为：产卵后1．5～2．0h，用6g／L的氯化钾处理4h；孵化膜形成并举起可以作为中华绒螯蟹三倍体诱导开始点的形态学标记，其最高诱导率可以达到100％。实验结果为实现中华绒螯蟹三倍体苗种的批量生产提供了参考和依据。; 张成松李富花于奎杰崔朝霞相建海; 关键词：氯化钾三倍体诱导

异源冷冻精子诱导大菱鲆的雌核发育被引量：18: 2008年; 采用冷冻保存的鲈（Lateolabraxjaponicus）精液不经紫外线照射直接与大菱鲆（Scophthalmusmaximus）卵进行杂交，可以刺激大菱鲆卵进行胚胎发育，胚胎发育率（发育至原肠期后胚胎成形的卵占总卵数的百分比）可达79．1％。通过与精子照射组单倍体发育过程等对比观察发现，杂交后代为大菱鲆的单倍体。如果在“受精”后2～10min内将大菱鲆卵在0～6℃冷休克处理10～50min，均能诱导卵子染色体加倍。对冷休克处理条件的筛选结果表明，在0℃条件下，卵子在受到鲈鱼精子刺激后6min开始进行冷休克处理25min，二倍体孵化率（雌核二倍体苗占受精卵的百分比）最高，可达34．8％。通过对各实验组卵发育情况的跟踪观察，发现单倍体与雌核发育二倍体在发育过程中有明显的差异，这种差异最早出现在8细胞期。单倍体胚胎头部发育不正常，眼泡较小，身体短且扭曲较严重，从肌节期开始沉积大量的黑色素颗粒。仔鱼孵化1周内单倍体即全部死亡。与正常二倍体对照组相比较，证明所得正常形态仔鱼即为雌核发育二倍体。; 苏鹏志陈松林杨景峰田永胜翟介明孙礼娟; 关键词：大菱鲆精子雌核发育冷休克

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国家高技术研究发展计划(2006AA10A403)

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