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巴马小型猪主要固有免疫分子的克隆及序列分析被引量：2: 2014年; 为了开展巴马猪的固有免疫相关研究,试验采用巴马小型猪的外周血分离淋巴细胞,提取总RNA,利用特异性引物进行RT-PCR,将克隆片段与pc DNA3.1载体相连接,转化到大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆并进行测序,并将测序结果提交NCBI,比较克隆序列与已知序列的同源性。结果表明:克隆的巴马猪TLR7、TLR8、TLR9、VISA、STING和IRF3序列长度分别为3 075,3 087,3 097,1 575,1 260,1 137 bp,测序结果与预期相符,各序列与猪的同源性较高。; 胡晓亮姜骞郭东春刘家森仇铮林欢刘培欣田进李志杰曲娟娟曲连东; 关键词：巴马小型猪固有免疫克隆

产肠毒素大肠杆菌双重PCR检测方法的建立被引量：10: 2013年; 为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314bp;最终确定dNTP终浓度0.4mmol/L,K88、K99的引物终浓度均为25μmol/L,退火温度为52℃。试验结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性。用所建立的双重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果显示,K88单重PCR阳性2株,K99单重PCR阳性3株,K88和K99双重PCR阳性5株。本研究建立的双重PCR检测方法为致幼畜腹泻产肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供了方法。; 曲泽慧陈佩佩张爱芹郭东春林欢姜骞刘家森师东方曲连东; 关键词：产肠毒素大肠杆菌双重PCR K88菌毛

加系SPF大白猪和长白猪群体遗传学分析被引量：7: 2015年; 目的研究中国农业科学院哈尔滨兽医研究所从加拿大引进的SPF大白猪和长白猪的遗传学背景。方法实验采用19对微卫星引物对该群体进行群体遗传学分析。结果 19个位点在大白猪群中检测到84个等位基因,长白猪群中检测到89个等位基因。大白猪的平均多态信息含量和平均杂合度分别为0.5271和0.5877;长白猪的平均多态信息含量和平均杂合度分别为0.5652和0.6066。由于S0155、S0143、S0178、Sw857和Sw936位点内等位基因大小和含量差异显著(P<0.01)可作为大白猪和长白猪品种鉴定的候选位点。F-统计和迁移率分析结果表明,群体内的分化较小,遗传结构稳定。结论引进加系SPF纯种大白猪和长白猪的遗传结构与国内部分纯种大白猪和长白猪相比更为稳定,可作为实验动物模型应用于动物医学和科学研究。; 贺希文高彩霞姜骞权金强蔡原曲连东; 关键词：SPF猪微卫星标记

实验用巴马小型猪的遗传多样性研究被引量：1: 2013年; 为了研究屏障环境下小规模保存实验用巴马小型猪的遗传学背景,试验运用19个微卫星基因座,对长期在屏障环境下封闭饲养的同世代、同父本但不同母本的3窝巴马小型猪(BM/HVRI猪)进行分子群体遗传学检测,计算平均等位基因数(Na)、平均观察杂合度(Ho)和平均期望杂合度(He),检验Hardy-Weinberg平衡并进行遗传分化分析。结果表明:该群体的Na、Ho和He分别为3.05±0.71,0.703 7±0.019 2和0.574 6±0.023 1,3窝仔猪的He分别为0.558 3±0.029 3,0.552 0±0.037 3和0.549 2±0.030 8,且差异不显著(P>0.05);经完全枚举法检验,A窝和C窝分别有3个和5个基因座偏离Hardy-Weinberg平衡;经U检验,A窝和C窝分别有4个和6个基因座存在杂合子过剩,仅C窝1个基因座表现出杂合子缺失现象。说明该猪群遗传多样性较低,处于低度杂合状态,窝系之间不存在遗传分化。; 武永淑张海燕杨柳杨超李海超廉传江韩建林曲连东韩凌霞; 关键词：屏障环境

口蹄疫病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2: 2014年; 为建立检测口蹄疫病毒(FMDV)的方法,本研究根据Gen Bank中FMDV的2B基因序列,设计合成一对引物和一条Taq Man探针,将2B基因克隆到p Blue Script SK(-)载体中,利用T7体外转录试剂盒制备标准品,通过优化反应条件,建立了Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该检测方法的敏感性达到102拷贝/μL;与其它主要相关病毒均不发生交叉反应,批内和批间试验重复性的变异系数(CV)均小于3%。本研究建立的FMDV Taq Man荧光定量PCR方法对FMDV的快速检测具有重要意义。; 胡晓亮姜骞仇铮郭东春刘家森林欢刘培新田进李志杰刘大飞刘春国曲娟娟曲连东; 关键词：口蹄疫病毒 TAQMAN探针荧光定量PCR

国内部分地区多杀性巴氏杆菌荚膜血清型和基因型的研究被引量：20: 2016年; 为了解国内部分地区不同动物多杀性巴氏杆菌(P.multicida)流行情况,本研究以36株P.multicida为研究对象,通过多重荚膜PCR、多位点序列分型(MLST)和脂多糖多重PCR(LPS-m PCR)对其荚膜型和基因型进行鉴定。采用多重荚膜PCR方法将36株细菌的荚膜血清型分为A、B和D 3种,其中禽源P.multicida主要以A为主;以LPS-m PCR方法将P.multicida分为L1、L2、L3和L6 4种LPS基因型,禽源P.multicida主要为L1型;通过MLST技术将P.multicida分为ST-129、ST-8、ST-58、ST-5、ST-13、ST-50和ST-122 7种ST型,禽源P.multicida主要为ST-129型。本研究为P.multicida的流行病学监测和基因多样性提供了技术支撑。; 王林柏孙久鹤郭东春曹培丽刘家森刘春国刘大飞曲连东; 关键词：多杀性巴氏杆菌多位点序列分型

巴马小型猪主要细胞因子的克隆及序列分析被引量：4: 2012年; 为了丰富广西巴马小型猪细胞因子生物学数据,本试验采取广西巴马小型猪的外周血,分离淋巴细胞,提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR扩增,将克隆出的与目的基因大小相符的片段回收,再与T载体连接,转化到大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆,将重组菌测序后提交NCBI,比较克隆序列与已知序列的同源性,并利用软件对克隆序列进行分析。结果表明,已克隆出的巴马小型猪细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α基因序列长度分别为338、377、380、402bp,测序结果均与目的基因预期估计值吻合。序列分析结果发现与已知的家猪或野猪的相应基因同源性较高,IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α序列同源性分别为98.9%、99.5%、99.2%、100%。研究巴马小型猪细胞因子基因序列不仅丰富了生物学数据,而且为细胞因子的功能研究提供了依据,也为细胞因子的定量检测奠定了基础。; 李连峰姜骞林欢李红刘家森郭东春原冬伟崔玉东曲连东; 关键词：巴马小型猪细胞因子克隆

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国际科技合作与交流专项项目(2010DFB33620)