重庆市科技攻关计划(30111-14281)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 相关作者：李树民刘中禄陶翠兰莘旭妮赵翠波更多>>
- 相关机构：第三军医大学大坪医院军事医学科学院更多>>
- 发文基金：重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 重组胸腺素α1 pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌的构建与表达被引量：5
- 2012年
- 目的构建表达重组胸腺素α1(Tα1)的pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌。方法将人工合成的Tα1序列进行PCR扩增,将扩增的片段和pMAL-C2x质粒载体分别经BamHI和EcoR I双酶切后,用T4 DNA快速连接酶连接构建pMAL-C2x-Tα1融合表达质粒,再经测序正确后,将重组体转化至大肠埃希菌TB1菌中,pMAL-C2x-Tα1/TB1菌在LB液体培养基中培养,经IPTG诱导表达麦芽糖结合蛋白与Tα1的融合蛋白(MBP-Tα1),采用Westernblot对MBP-Tα1进行鉴定。结果 pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌能有效表达MBP-Tα1,融合蛋白占菌体蛋白的33.6%,分子量约为45×103。结论工程菌的成功构建和表达为重组Tα1的纯化、生物学活性等研究奠定了基础。
- 刘中禄陶翠兰莘旭妮李树民
- 关键词：基因克隆
- 重组胸腺素α1的发酵、纯化及药效研究被引量：2
- 2013年
- 为获得重组胸腺素α1(recombinant thymosinα1,Tα1),采用融合表达方式表达Tα1基因,重组融合表达载体Tα1/pMAL-C2x转化大肠杆菌TB1构建工程菌。对工程菌进行发酵并诱导表达,得到可溶性表达的目的蛋白。亲和层析纯化融合蛋白MBP-Tα1,经凝血酶裂解融合蛋白,Source Q离子交换,得到Tα1单体,最终目的蛋白纯度大于95%。应用犬细小病毒模型进行抗病毒药效学分析显示,重组Tα1具有抗病毒疗效,其药效与阳性药物日达仙相近。
- 刘中禄陶翠兰莘旭妮赵翠波李树民
- 关键词：发酵纯化细小病毒
