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利用SMART技术构建羊驼皮肤全长cDNA文库被引量：2: 2008年; 为了快速、经济和有效地寻找新基因,利用大规模测序及分析技术构建羊驼皮肤组织的基因表达谱,实验构建了羊驼皮肤cDNA文库。Trizol提取皮肤总RNA后,用SMART法构建文库:经反转录反应合成第一链cDNA,用LD PCR法将第一链产物再合成第二链和双链cDNA;经蛋白酶K和Sfi消化后,用CHROMA APIN-400分离双链cDNA;将合适大小的ds cDNA通过16℃过夜孵育使其转入到载体中,将重组产物在22℃下用λ-phage孵育2h进行包装,制成文库。该cDNA文库的特征为:包装效率为106(pfu/mL),重组率在80%以上。该cDNA文库质量可达到进行后续研究的要求。; 赫晓燕范瑞文张俊珍程志学李鹏飞白瑞董常生; 关键词：全长CDNA文库 SMART技术羊驼皮肤

羊驼垂体催乳素(PRL)基因全长cDNA的克隆及序列分析被引量：2: 2011年; 获得并分析羊驼PRL基因cDNA全序列结构,为研究羊驼催乳素(PRL)的各种生物学作用和生产应用提供理论依据。根据已知的不同哺乳动物的PRL基因cDNA序列,设计羊驼PRL引物,运用RT-PCR方法和cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得羊驼PRL基因cDNA全序列。羊驼PRL基因cDNA序列全长959bp,编码区为687bp,编码229个氨基酸的PRL前体蛋白。预测羊驼PRL蛋白质的空间结构类似人生长激素(GH),但在81位(成熟肽为51位)为蛋氨酸可能导致蛋白空间结构的不同而影响羊驼PRL的功能;序列比对结果表明,羊驼PRL的cDNA序列与大多数哺乳动物相似。构建的基因进化树分析结果显示,羊驼PRL与骆驼的亲缘关系最近;同多数哺乳动物一样,羊驼PRL进化速度极缓慢,没有发生人、灵长类、啮齿类、反刍动物的"episodic"式进化。; 薛霖莉董常生赫晓燕范瑞文王海东曹靖郝欢庆; 关键词：羊驼催乳素基因全长CDNA

miR-193b及其靶基因Kit在不同毛色羊驼皮肤中的表达被引量：6: 2013年; 本研究旨在检测miR-193b及其靶基因Kit在不同毛色羊驼皮肤中的表达,并分析它们与羊驼毛色的关系。试验以不同毛色的成年羊驼为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR)对miR-193b及Kit在不同毛色羊驼皮肤中的相对表达量进行检测。结果显示,miR-193b在棕色羊驼中显著表达,其相对表达量是白色羊驼的1.741346倍;而Kit在白色羊驼中显著表达,其相对表达量是棕色羊驼的4.6029倍。通过以上研究结果显示miR-193b及其靶基因Kit可能参与羊驼毛色形成过程。提示,miR-193b可能通过负调控Kit参与羊驼毛色形成。; 张丹丽田雪宋云飞牧仁董常生; 关键词：KIT 毛色实时荧光定量PCR 羊驼

白色青年羊驼皮肤cDNA文库的构建及毛色相关基因的表达分析: 从白色青年羊驼皮肤提取总RNA,并分离mRNA,利用SMART技术,构建了羊驼皮肤全长cDNA 文库。库容量达109,重组率达80％以上。同时通过T7和5’端特异引物对文库重组体进行了PCR鉴定,证明了该cDNA文库的高...; 范瑞文董常生张俊珍赫晓燕程志学李鹏飞白瑞; 关键词：CDNA文库黑色素细胞毛色毛囊羊驼; 文献传递

小鼠出生后背部毛囊发育与Lef-1表达的研究被引量：4: 2012年; 旨在研究Lef-1在小鼠背部毛囊生长周期中的表达规律及其与毛囊生长更替的关系。本试验采用石蜡切片HE染色、Western blotting以及免疫组织化学方法,研究小鼠毛囊的周期性变化,检测Lef-1在小鼠毛囊生长的不同时期皮肤组织中的蛋白表达水平,并对其进行组织定位。结果,昆明系小鼠毛囊生长呈周期性变化,处于不同生长时期的毛囊具有各期的特殊结构;Western blotting结果显示,在各阶段皮肤组织中存在Lef-1蛋白的表达,其在毛囊生长初期的表达量显著高于中期和末期;免疫组织化学结果显示,Lef-1在不同毛囊生长时期的皮脂腺、根鞘和真皮乳头均有不同程度的表达。Lef-1的表达与毛囊的周期性变化存在相关性。; 王海东杨磊王祎于秀菊董彦君赫晓燕马淑慧董常生; 关键词：WESTERN BLOTTING 免疫组织化学小鼠

羊驼核糖体蛋白L41(RPL41)基因cDNA克隆及序列分析: 2012年; 利用Southern blotting技术从羊驼皮肤cDNA文库里筛选核糖体蛋白L41(RPL41)基因,测序结果表明该片段大小为429 bp,含有一个完整的开放阅读框(ORF)。并利用生物信息学方法对该基因进行了分析,发现该基因编码的氨基酸含有3个β折叠结构域,该结构域对RPL41基因功能的体现起决定作用。; 白瑞于志慧范瑞文李鹏飞程志学韩红燕董常生; 关键词：羊驼 SOUTHERN BLOTTING CDNA文库

Lef-1基因在棕色和白色羊驼皮肤差异表达被引量：9: 2011年; 本实验旨在研究淋巴增强因子-1(Lef-1)在不同毛色羊驼皮肤中的表达和定位,探索其与毛色间的关系.采用实时荧光定量PCR、Western印迹以及免疫组织化学方法,研究白色和棕色羊驼皮肤中的mRNA、蛋白表达水平和定位.定量实时荧光PCR结果显示,Lef-1在棕色羊驼皮肤组织相对基因表达量是3.372 7±0.198 9,在白色羊驼皮肤组织是1.000 3±0.022 7;Western印迹结果显示,在羊驼皮肤组织总蛋白中存在分子量约44 kD与兔抗Lef-1多克隆抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带,棕色羊驼平均蛋白表达量显著高于白色羊驼;免疫组织化学结果显示,在棕色羊驼皮肤组织中多表达在毛球部,表皮也有分布,在白色羊驼皮肤组织中多表达在表皮,在棕色和白色羊驼皮肤组织中外根鞘都有较强表达.结果显示,Lef-1在棕色和白色羊驼皮肤的定位和含量存在差异,提示Lef-1可能影响了羊驼被毛颜色的形成.; 杨磊王海东王祎于秀菊董彦君董常生; 关键词：羊驼蛋白质印迹免疫组织化学

c-myc蛋白在不同毛色羊驼皮肤中的定位及表达: 2013年; 为了探索c-myc蛋白在羊驼皮肤中的定位及表达情况,以不同毛色的成年羊驼为研究对象,采用免疫组织化学方法检测c-myc蛋白在羊驼皮肤组织中的表达和定位。结果显示,c-myc在羊驼皮肤毛囊毛球部细胞中呈阳性表达,根据光密度值分析得出c-myc在棕色羊驼毛囊中显著表达,其相对表达量是白色羊驼的5.51倍。研究表明c-myc可能参与羊驼毛色形成。; 张丹丽田雪董常生; 关键词：C-MYC 毛囊羊驼

羊驼生长激素基因的克隆与序列分析被引量：2: 2009年; 应用RT-PCR和PCR技术克隆得到了羊驼生长激素(Growth hormone,GH)基因,包括完整的编码区812 bp的cDNA序列和1 800 bp的DNA序列。两者比对后证明羊驼GH基因DNA序列由5个外显子和4个内含子组成,编码216个氨基酸的GH前体蛋白,其中包括26个氨基酸的信号肽和190个氨基酸的成熟肽。序列比较结果表明,羊驼GH基因序列与骆驼、猪、马、犬和猫等哺乳动物类似,但羊驼GH基因的启动子不是哺乳动物的典型TATA盒,而同骆驼一样为CATA盒。在DNA和cDNA水平以及推导的氨基酸水平,均与骆驼的同源性最高。通过GH氨基酸的功能位点分析推测,羊驼生长激素与人、猪等大多数动物的生长激素无明显功能上的差异。; 赫晓燕张巧灵范瑞文游蓉丽董常生; 关键词：羊驼生长激素 DNA 克隆

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山西省科技攻关计划项目(2006031060)