广西壮族自治区自然科学基金(2011GXNSFA018115)
- 作品数：9 被引量：106H指数：7
- 相关作者：何新华罗聪陈虎胡颖杨丽涛更多>>
- 相关机构：广西大学广西农业科学院广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金广西研究生教育创新计划广西高校优秀人才计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 应用SCoT分子标记分析73份杧果资源的遗传多样性
- 杧果栽培历史悠久,品种繁多,仅印度就有1 000多个品种,我国约有200多个品种或品系。由于杧亡果是开放性授粉的植物,许多品种都是通过实生苗繁殖和芽变选种获得,许多资源缺乏相应的文字记录,并且由于存在饰变和观察标准不同,...
- 罗聪何新华陈虎胡颖欧世金
- 关键词：杧果
- 文献传递
- 一种高效获取基因5′末端的RACE方法被引量：39
- 2011年
- RACE技术是一种快速高效克隆基因5′末端和3′末端的方法,是获取基因全长的主要手段之一,但是RACE技术本身也存在一些缺点。我们在前人改良的RACE技术基础上进一步优化RACE技术,获得了一种操作简单、快速、高效、成本低廉的改良RACE方法,该方法适合于大量基因5′末端的获取,可以在普通实验室推广应用。
- 罗聪何新华陈虎韦泳丽李明娟
- 关键词：RACETDT
- 杧果MGAPDH同源基因的克隆及其表达分析被引量：11
- 2011年
- 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是糖代谢和能量代谢过程中的关键酶。根据GAPDH基因保守序列设计PCR引物,利用RT-PCR和改良RACE技术,首次从杧果中分离克隆出MGAPDH同源基因的cDNA全长序列。该序列全长为1 356 bp,开放阅读框为1 203 bp,编码401个氨基酸。利用分子生物学软件对MGAPDH蛋白进行生物信息学分析,结果显示:MGAPDH蛋白分子量为42.8 ku,等电点为8.9;该蛋白包含2个功能域,即NADB_Rossmannsuperfamily和Gp_dh_C superfamily;MGAPDH蛋白不含信号肽序列和跨膜结构,是非分泌蛋白,位于叶绿体中。氨基酸序列进化分析结果显示,杧果MGAPDH蛋白可能与光合作用有关。半定量分析显示,杧果MGAPDH同源基因在杧果不同组织中均表达,并且表达水平差异不明显,说明杧果MGAPDH同源基因可作为杧果基因差异表达的内参基因。
- 罗聪何新华胡颖谭超欧世金
- 关键词：杧果
- 不同龙眼资源遗传多样性的SCoT和ISSR比较分析被引量：16
- 2012年
- 应用SCoT和ISSR标记对36份龙眼资源和1份近缘种龙荔的遗传多样性进行分析。结果表明:12对SCoT引物共扩增出127条带,平均每条引物扩增10.58条带;15条ISSR引物共扩增出117个条带,平均扩增7.8条带。UPGMA聚类结果表明:SCoT标记和ISSR标记分别在相似系数0.672和0.685水平上,均可将37份材料分成6大类群,SCoT和ISSR标记均适用于龙眼材料的遗传多样性分析,如果将两种标记的数据进行综合分析,可以缩小单一标记的误差。研究结果为龙眼种质资源的保存和利用提供了重要的依据。
- 陈虎何新华黄桂香李峰姜建初朱建华
- 关键词：龙眼ISSR
- 龙眼咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(DLCCoAOMT)基因的克隆和表达分析被引量：13
- 2012年
- 【目的】克隆龙眼咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(DLCCoAOMT)基因,分析其序列特征和在低温胁迫下不同组织中的表达情况并进行原核表达研究。【方法】采用RT-PCR和RACE技术从龙眼叶片中克隆DLCCoAOMT基因,用生物信息学方法对获得的氨基酸序列进行分析,利用荧光定量PCR研究DLCCoAOMT基因在不同组织中的表达。【结果】克隆得到DLCCoAOMT基因,GenBank登录号为JN093023。该cDNA全长993 bp,具有1个744 bp的完整开放阅读框(ORF),编码247个氨基酸。序列分析表明,DLCCoAOMT编码的氨基酸序列与其它植物的CCoAOMT蛋白有很高的相似性。系统进化树分析显示,龙眼DLCCoAOMT与桦木属的CCoAOMT蛋白亲缘关系较近。利用荧光定量技术进行组织表达模式分析发现,DLCCoAOMT基因在根、茎、叶中均有表达。总体上表达量在根和茎中较多,叶中较少,随着低温胁迫时间延长,DLCCoAOMT基因在各组织的表达量也发生变化。原核表达结果表明,DLCCoAOMT基因在大肠杆菌中获得表达。【结论】从龙眼中克隆到咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因,该基因可能参与调控低温胁迫。
- 陈虎何新华罗聪杨丽涛张保青宋修鹏
- 关键词：龙眼基因克隆原核表达
- 杧果Rab蛋白基因MiRab11的克隆及表达分析被引量：4
- 2014年
- 根据前期对杧果(Mangifera indica L.)胁迫差异分析中获得的Rab11片段,采用RT-PCR结合RACE技术,从‘四季杧’混合组织材料(叶、茎、花和果实)中克隆了一个Rab11完整编码区序列,命名为MiRab11。其cDNA全长902 bp,包含完整开放阅读框657 bp,编码218个氨基酸。同源性分析表明MiRab11与葡萄和柑橘的同源性最高(相似度均为97%)。实时荧光定量检测结果表明:MiRab11在杧果叶、茎、花和果实中均有表达,在嫩茎和花后70 d的成熟果实中的表达较高;在果实形成及发育初期表达量略有下调,但在果实成熟过程中表达量明显上调;逆境胁迫(低温、盐、干旱)处理可引起在叶或茎中上调表达;不同信号物质(脱落酸、水杨酸、双氧水)刺激均可引起叶中的表达上调。结果表明,MiRab11可能在杧果果实成熟和胁迫反应中发挥重要作用。
- 刘召亮罗聪董龙何新华艮文全李丽淑韦鹏霄
- 关键词：杧果克隆
- 低温胁迫下龙眼碳酸酐酶基因(CA)的克隆与表达分析被引量：12
- 2012年
- 应用蛋白质组学研究低温胁迫下龙眼叶片蛋白质组变化时发现碳酸酐酶(CA)蛋白下调表达。利用RT-PCR方法克隆CA基因的全长cDNA,GenBank登录号JN033201,长度为1119bp,包括1个966bp的开放阅读框,编码321bp的氨基酸序列,同源性分析表明,12个不同植物同源性为81%～88%。龙眼CA基因具有典型的CA结构域,并且非常保守。实时荧光定量分析结果表明,CA在龙眼根、茎、叶中都有表达,为组成型表达,在叶中的表达量最高,茎和根中的表达量最少。CA基因在低温胁迫下随着低温胁迫时间的延长而发生变化。将CA在大肠杆菌中表达,获得1个约40.5kD的外源蛋白。推测CA表达与低温胁迫有关。
- 陈虎何新华罗聪杨丽涛黄杏胡颖
- 关键词：龙眼低温胁迫蛋白质组学差异蛋白碳酸酐酶
- 龙眼水通道蛋白基因(DLPIP1)的克隆与表达分析被引量：11
- 2012年
- 应用蛋白质组学研究低温胁迫下龙眼叶片蛋白质组变化时，发现PIP1蛋白在龙眼低温胁迫中上调表达。应用RACE技术克隆龙眼水通道蛋白基因全长eDNA，命名为DL纠纠，基因登陆号为JN572691，长度为1132bp，包括1个900bp的开放阅读框，编码299个氨基酸序列，同源性分析表明，DLPIP1在21个不同植物中的一致性为90％-93％。应用生物信息学软件对DLPIP1氨基酸序列分析表明，含有7个跨膜区，有2个NPA单元，其氨基酸残基与MIP家族蛋白保守区序列完全一致。氨基酸序列比对发现，该序列与其他物种PIP质膜水通道蛋白氨基酸序列有很高的同源性。利用实时荧光定量技术对现肼川在低温胁迫下不同组织表达谱分析表明，现用纠在龙眼根、茎、叶中都有表达，在根中的表达量最高，其次是茎和叶。DLPIP1在低温胁迫时，随着低温胁迫时间的延长而发生变化。这说明DLPIP1蛋白在龙眼低温逆境过程中起作用。
- 陈虎何新华罗聪邓立宝胡颖李明娟杨丽涛
- 关键词：龙眼水通道蛋白低温胁迫克隆
- 芒果MiRab11基因及突变体的原核表达分析
- 2014年
- 为研究芒果MiRab11蛋白的互作及其它生物学功能,本文在MiRab11基因序列基础上,采用重叠PCR定点突变技术,获得了2个结构域突变体Mi-Rab11CA和Mi-Rab11DN,将其构建原核表达载体,并成功转化大肠杆菌BL21。SDS-PAGE结果显示,在28℃条件下,用0.5 mmol/L IPTG诱导4 h,可获得大量可溶性蛋白的表达。将可溶性蛋白经Ni-NTA argrose层析柱纯化并western blot鉴定,该重组蛋白均可与抗His单克隆抗体发生特异性免疫反应。本研究为深入研究芒果pET-Rab11蛋白生理活性、特异性结合位点及功能调控打下良好基础。
- 刘召亮罗聪董龙何新华艮文全李丽淑韦鹏霄
- 关键词：芒果突变体蛋白原核表达纯化
- 龙眼钙依赖蛋白激酶(CDPKs)基因的克隆及表达分析
- 龙眼喜温忌冻,寒害和冻害常给其生产带来严重损失。钙离子被认为是植物细胞内重要的第二信使,在各种外部环境胁迫刺激下,Ca浓度会发生相应的变化并诱导下游基因表达和蛋白质磷酸化方式的改变,从而实现对环境胁迫的应答。其中,钙依赖...
- 陈虎何新华罗聪邓立宝胡颖
- 关键词：龙眼低温胁迫CDPKS克隆
- 文献传递
