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Pre-miR-15a增强Raji细胞对阿糖胞苷的敏感性: 2010年; 谌琴何冬梅; 关键词：RAJI细胞阿糖胞苷敏感性淋巴瘤细胞系负性调控寡核苷酸

转铁蛋白受体介导的Bcl-2 shRNA对U251细胞生长的抑制: 2007年; 目的构建Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的表达载体并研究其对神经胶质瘤细胞U251生长的抑制作用。方法针对Bcl-2基因编码shRNA的序列,克隆到携带绿色荧光蛋白基因的载体,经酶切电泳和DNA测序鉴定。采用转铁蛋白-多聚乙烯亚胺介导的转染方法将重组的shRNA质粒转入U251细胞后,通过倒置荧光显微镜和流式细胞仪观察绿色荧光蛋白的表达,用免疫细胞化学的方法检测Bcl-2蛋白表达水平;采用MTT法测定细胞增殖情况。结果编码短发夹状的RNA序列被成功地插入到预期位点。转染Bcl-2shRNA1、shRNA2载体分别入U251细胞后,其Bcl-2蛋白表达水平均显著降低,P<0.05。U251细胞在48、72和96h细胞生长明显受到抑制,分别与转染阴性shRNA组比,差异有统计学意义,P<0.05。结论构建的两个Bcl-2shRNA均可特异性地抑制U251细胞生长。; 何冬梅张洹刘革修; 关键词：BCL-2 SHRNA 转铁蛋白 U251细胞

Bcl-2短发夹状RNA增强甲氨喋呤对人淋巴瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用被引量：3: 2009年; 目的:观察Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)与甲氨喋呤(methotrexate,MTX)联用后对人淋巴瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:45只裸鼠注射Raji细胞悬液制备裸鼠人淋巴瘤模型,将聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)与Bcl-2shRNA载体质粒(本实验室制备)的混合物及MTX直接注入肿瘤内,观察Bcl-2shRNA及联合MTX对肿瘤生长的影响。在用药21d后无痛处死动物,分离皮下肿瘤,称重,计算抑瘤率;H-E染色观察肿瘤组织的病理形态;以RT-PCR法检测Bcl-2mRNA在肿瘤内的表达情况。结果:Bcl-2shRNA与MTX联用组移植瘤的生长最慢,与单用Bcl-2shRNA和MTX相比差异有统计学意义(P<0.05)。处理结束后剥离瘤块,Bcl-2shRNA组瘤质量与阴性shRNA组、空质粒组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2shRNA与MTX联用对裸鼠移植瘤生长的抑制率最高,高于Bcl-2shR-NA和MTX的单用组(P<0.05)。H-E染色可见使用Bcl-2shRNA组及MTX组出现明显的凋亡和组织坏死。瘤组织的单细胞悬液经RT-PCR检测显示Bcl-2mRNA表达在Bcl-2shRNA组均显著下降(P<0.05),而对照组则无明显变化。结论:Bcl-2shRNA可增强MTX对人淋巴瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用。; 房宝英何冬梅张洹刘革修; 关键词：淋巴瘤 RAJI细胞 BCL-2基因甲氨喋呤

SENSITIVITY OF LEUKEMIC CELL LINE HL-60 TO COMBINATION OF NEFERINE AND ARSENIC: 2006年; Objective: To determine whether neferine (Nef) enhances the sensitivity of human myeloid leukemia HL-60 cells to arsenic trioxide (ATO). Methods: Apoptosis was detected by DNA electrophoresis. Giemsa staining was used to observe the apoptotic cells under microscope. The apoptotic rates of cells were analyzed using flow cytometry. The inhibitory rates of cell growth were assayed by MTT, and the expression of P-gp was determined by flow cytometry. Results: Low doses of ATO (1.0 μmol/L) only partially inhibitory percentage of cell growth at 72 h was (9.92±3.03) % (P>0.05, vs control). The combination of 1.0 μmol/L ATO with 2.0 μmol/L Nef inhibited (45.27±4.93) % of cell growth, and induced apoptosis in leukemic cells more significantly than wither ATO or Nef on their own (P<0.01). Moreover, ATO-induced expression of P-gp in leukemic cells was inhibited significantly by Nef. Conclusion: These results indicate that Nef significantly increases sensitivity of leukemic cells to ATO, which might be associated with inhibitory expression of P-gp gene. Combined use of the two agents could be a novel and attractive strategy in leukemia treatment.; 刘革修张洹何冬梅; 关键词：肿瘤细胞砷元素

mir-15a和mir-16-1诱导人淋巴瘤Raji细胞株的凋亡被引量：4: 2008年; 目的:探讨mir-15a和mir-16-1诱导人淋巴瘤Raji细胞株的凋亡。方法:利用Oligofectamine 2000脂质体法将化学合成的mir-15a和mir-16-1寡核苷酸,随机序列,分别转染Raji细胞。采用间接免疫荧光及流式细胞仪检测Bcl-2蛋白表达情况,半定量RT-PCR检测Bcl-2 mRNA表达水平,台盼蓝拒染法和CCK8法检测mir-15a和mir-16-1对Raji细胞的生长抑制作用,Hoechst染色观察细胞凋亡形态,流式细胞仪—AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡率。结果:间接免疫荧光法显示Raji细胞经转染mir-15a和mir-16-1寡核苷酸48 h后,Bcl-2蛋白的表达量降低,与空白对照组和随机序列组有显著性差异(P<0.05);RT-PCR法显示各组间Bcl-2 mRNA的表达无显著性差异;台盼蓝拒染法和CCK8法显示,转染后各时间点mir-15a和mir-16-1寡核苷酸组Raji细胞的生长受到抑制,Hoechst染色可见明显凋亡细胞,流式细胞仪—AnnexinV/PI双染色法检测显示,mir-15a组早期凋亡率和晚期凋亡率分别为9.74%和9.65%,mir-16-1组早期凋亡率和晚期凋亡率分别为9.70%和9.34%,明显高于空白对照组和随机对照组。结论:mir-15a和mir-16-1可诱导淋巴瘤细胞凋亡。; 谌琴何冬梅张洹郭敏; 关键词：微RNA 淋巴瘤细胞凋亡

Bcl-2 shRNA对甲氨蝶呤诱导的Raji细胞凋亡及细胞增殖作用的影响: 2009年; 目的:探讨Bcl-2短发夹样RNA(short hairpin,shRNA)对甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)诱导的人Burkit淋巴瘤Raji细胞凋亡的增强作用。方法:采用脂质体介导的转染方法将构建有Bcl-2 shRNA的质粒转染Raji细胞,然后加入MTX,采用RT-PCR法检测作用48h时细胞Bcl-2mRNA表达水平,免疫荧光法检测细胞中Bcl-2蛋白表达水平,MTT法检测经处理24、48和72h后细胞的增殖活性,Giemsa染色及FCM法检测细胞凋亡。结果:将Bcl-2 shRNA质粒转入Raji细胞后,Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),转染Bcl-2 shRNA联用MTX可明显诱导细胞凋亡,细胞增殖活性显著降低,分别与MTX组、阴性shRNA联用MTX组、Bcl-2 shRNA组及空质粒+MTX组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Bcl-2 shRNA可增强MTX对Raji细胞增殖的抑制作用,增加对细胞凋亡的诱导作用。; 房宝英何冬梅张洹陈丽; 关键词：甲氨蝶呤小分子干扰细胞凋亡 RAJI细胞

Bcl-2shRNA表达载体的构建及其对HL-60细胞生长的抑制作用被引量：8: 2005年; 目的构建Bcl-2短发夹样RNA(shorthairpinRNA,shRNA)序列的表达载体并研究其对HL-60细胞生长的抑制作用。方法化学合成2段编码短发夹RNA序列针对Bcl-2基因66个碱基的寡核苷酸,克隆到Pgenesil-1载体的U6启动子的下游,重组构建RNAi质粒,同时设立阴性对照;然后经酶切电泳和DNA测序鉴定。采用脂质体介导的转染方法将重组的RNAi质粒转入HL-60细胞后,采用RT-PCR检测Bcl-2mRNA表达水平;采用MTT法测定细胞增殖情况。结果重组构建的两个Bcl-2shRNA1、shRNA2载体经双酶切电泳分析及插入基因片段序列分析,结果表明66个碱基成功插入到预期位点,并且序列完全一致。转染Bcl-2shRNA1、shRNA2载体分别入HL-60细胞24h,其Bcl-2mRNA表达水平均降低,但转染Bcl-2shRNA1引起的Bcl-2mRNA表达下降更为明显,分别与转染阴性shRNA及未转染组比较,有显著性差异(P<0.05)。MTT测定显示转染Bcl-2shRNA1、shRNA2载体入HL-60细胞在72、96h细胞生长明显受到抑制,分别与转染阴性shRNA、单纯脂质体组及未转染组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论成功地构建了两个Bcl-2shRNA1、shRNA2表达载体,且Bcl-2shRNA可序列特异性地抑制HL-60细胞的生长。; 何冬梅张洹刘革修邹飞雁; 关键词：SHR NA RNAI HL-60细胞

miR-15a/miR-16-1增强Raji细胞对阿糖胞苷的敏感性: 2010年; 目的探讨miR-15a和miR-16-1寡核苷酸能否增强Raji细胞对阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)的敏感性。方法将化学合成的miR-15a和miR-16-1寡核苷酸利用脂质体2000转染入Raji细胞后,联合Ara-C,CCK8法检测Ara-C的IC50值变化;锥虫蓝细胞计数法检测细胞增殖活性;Hoechst染色观察细胞的凋亡形态;流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染法测凋亡率。结果miR-15a和miR-16-1寡核苷酸转染Raji细胞后,再加入Ara-C,24h Ara-C的IC50值分别为10.41和10.86,明显低于单用Ara-C组(15.43)和随机序列联用Ara-C组(14.92,P<0.05)。锥虫蓝拒染法结果显示,转染后各时间点miR-15a/miR-16-1+Ara-C组较单用miR-15a/miR-16-1组、单用Ara-C组及随机序列+Ara-C组明显抑制了Raji细胞的生长,Hoechst染色可见大量凋亡细胞;流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染色法检测显示,miR-15a+Ara-C组早期凋亡率和晚期凋亡率分别为20.93%和25.27%,miR-16-1+Ara-C组早期凋亡率和晚期凋亡率分别为20.69%和23.13%,均明显高于miR-15a组、miR-16-1组、Ara-C组及随机序列+Ara-C组(P<0.05),后四者的早期凋亡率分别为6.99%、4.73%、10.88%和14.39%,晚期凋亡率分别为10.08%、10.64%、11.83%和11.93%。结论miR-15a和miR-16-1寡核苷酸可增强Raji细胞对Ara-C的敏感性。; 谌琴何冬梅; 关键词：寡核苷酸 RAJI细胞阿糖胞苷药物敏感性凋亡率

Bcl-2短发夹状RNA对NB4细胞株生长的抑制作用: 2006年; 目的:构建Bcl-2短发夹状RNA(shorthairpinRNA,shRNA)序列的表达载体并研究其对早幼粒白血病细胞株NB4生长的抑制作用。方法:针对Bcl-2基因构建编码shRNA序列的重组表达载体,经酶切电泳和DNA测序鉴定。采用脂质体介导的转染方法将重组的RNAi质粒转入NB4细胞后,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察转染效率,采用WesternBlot检测Bcl-2蛋白表达水平;采用MTT法测定细胞增殖情况。结果:编码Bcl-2shRNA的RNA序列被正确地插入到预期位点。将两个Bcl-2shRNA载体分别转入NB4细胞后,Bcl-2蛋白表达水平均降低,与转染阴性shRNA及未转染组比较,均有显著性差异(P<0.05)。转染Bcl-2shRNA1、shRNA2载体入NB4细胞在72、96h细胞生长明显受到抑制,分别与转染阴性shRNA、单纯载体组及未转染组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:构建的两个Bcl-2shRNA均可特异性地抑制NB4细胞生长。; 何冬梅张洹刘革修; 关键词：BCL-2 SHRNA NB4细胞

转铁蛋白受体介导的Bcl-2 shRNA转移对HL-60细胞生长的抑制作用: 2006年; 目的探讨B cl-2短发夹状RNA(shRNA)表达载体对白血病细胞HL-60生长的抑制作用。方法采用转铁蛋白-多聚乙烯亚胺介导的转染方法将携带绿色荧光蛋白基因的重组B cl-2 shRNA 1、shRNA 2表达载体转入HL-60细胞。通过荧光显微镜和流式细胞仪观察绿色荧光蛋白的表达;采用台盼蓝拒染法计数活细胞;用免疫细胞化学方法检测B cl-2蛋白表达水平。结果B cl-2 shRNA 1、shRNA 2载体分别转入HL-60细胞后,细胞中B cl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),转染后48、72、96 h细胞生长明显受到抑制。结论转铁蛋白受体介导的B cl-2 shRNA可显著抑制HL-60细胞生长。; 何冬梅张洹刘革修; 关键词：基因,BCL-2 转铁蛋白 HL-60细胞

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