国家自然科学基金(30960360)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：宁夏医科大学武汉市中心医院更多>>
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- 适用于细粒棘球蚴囊液蛋白质组分析的双向电泳技术被引量：2
- 2015年
- 目的建立适用于细粒棘球蚴囊液蛋白质组的双向电泳分离条件。方法冷冻干燥法制备囊液总蛋白提取物,观察不同的蛋白样品处理方法、IPG胶条pH范围和电泳上样量对双向电泳图谱的影响。结果经ReadyPrepTM2-D Cleanup Kit处理的提取物上样量为400μg,在pH7-10范围的胶条进行双向电泳分离,可获取蛋白斑点较多、重复性较好的二维电泳图谱。结论建立的细粒棘球蚴囊液双向电泳技术及图谱,可为细粒棘球蚴虫蛋白质组学的研究提供理论依据。
- 李居怡刘巧媚黄文静阮周莹邓艾平
- 关键词：细粒棘球蚴囊液蛋白质组学双向电泳
- 细粒棘球蚴原头节3种重组抗原的双向电泳定位分析被引量：1
- 2013年
- 目的利用已有的细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)原头节3种重组抗原rEgZW-5、rEg14-3-3和rEgP-29获得特异性抗体,以识别双向电泳图谱中相应的蛋白位点。方法十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分离细粒棘球蚴原头节蛋白,预判断蛋白分布情况。应用双向电泳技术分离原头节蛋白,PDquest软件分析原头节的蛋白质数量、相对分子质量(Mr)和等电点(IP)。用原头节的3种重组蛋白rEgZW-5、rEg14-3-3和rEgP-29分别免疫新西兰家兔,制备血清,纯化抗体。蛋白质印迹(Western blotting)鉴定特异性抗体对原头节双向电泳图谱中相应蛋白的识别。结果SDS-PAGE结果显示,细粒棘球蚴原头节蛋白主要分布于Mr18 000～90 000区域。双向电泳分离出240个蛋白位点,为Mr15 790～117 050,IP为4.0～9.5,其中85.8%(206/240)蛋白等电点为5～9。Western blotting结果显示,rEg14-3-3特异性抗体可识别细粒棘球蚴原头节双向电泳图谱中约为Mr33 000、IP为4.86的14-3-3蛋白位点,rEgZW-5特异性抗体可识别约为Mr23 000、IP为4.98的ZW-5蛋白位点,rEgP-29特异性抗体可识别约为Mr29 000、IP为5.65的P-29蛋白位点。结论细粒棘球蚴原头节的3种重组抗原rEgZW-5、rEg14-3-3和rEgP-29的抗体可识别双向电泳图谱中相应的蛋白位点。
- 朱明星李君良巨艳高鹏赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴原头节重组抗原双向电泳
- 细粒棘球蚴囊液蛋白质组学的分析研究被引量：6
- 2013年
- 目的分析细粒棘球绦虫幼虫生长环境即囊液的蛋白质构成情况,为深入了解棘球蚴的发育、代谢奠定基础。方法采用双向凝胶电泳分离蛋白质,经过图像分析标记,通过自动切胶仪切胶、回收,胶内酶解、纯化以及质谱分析技术分析蛋白样点的数据,最后结合生物信息学方法进行注解。结果在囊液二维电泳图谱上提取约30个蛋白斑点,成功获取21种蛋白的肽指纹图谱,利用生物信息学检索工具MASCOT进行了蛋白鉴定。结论通过建立细粒棘球蚴囊液的二维电泳图谱,初步鉴定出囊液中含人血清铁传递蛋白、人白蛋白、人β-血红蛋白3种蛋白,为从外界干扰囊液中蛋白质构成比方面寻找包虫病治疗的新方法提供了参考依据。
- 张倩李居怡赵嘉庆王亚娜朱明星赵巍
- 关键词：细粒棘球绦虫棘球蚴病蛋白质组
- 细粒棘球绦虫(中国大陆株)特异性抗原P-29重组蛋白的生物信息学分析被引量：1
- 2012年
- 目的应用生物信息学分析软件预测细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29氨基酸序列,了解该蛋白的特性,预测其抗原表位,为P-29进一步应用研究提供理论依据。方法应用DNAStar、BIOSUN、EXPASY/SignalP、protparam、psite/softberry生物分析软件对P-29的二级结构、抗原表位、信号肽、极性进行预测分析,用EXPASY/SWISSMODEL对蛋白的三维结构进行模拟。结果 P-29基因开放阅读框编码一个由238个氨基酸残基组成的多肽,分子式为C1180H1906N324O386S9,其蛋白分子量为27095.58 Da,等电点为5.649,有37个碱性氨基酸,41个酸性氨基酸,68个极性氨基酸和76个疏水性氨基酸,半衰期是30 h,结构稳定,呈亲水性且为带负电荷的酸性蛋白,α-螺旋水平较高,有15个抗原决定簇,无信号肽,有2个N-糖基化位点,6个蛋白激酶C磷酸化位点,11个酪蛋白激酶II磷酸化位点及7个微体羧基端目标信号位点。结论根据生物信息学预测的结果表明,P-29可能是免疫诊断、药物作用及疫苗潜在的靶分子。
- 王元王娅娜师志云刘丽华赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴中国大陆株
