国家自然科学基金(30471509)
- 作品数：5 被引量：19H指数：2
- 相关作者：何立张培喜蒋明森杨孟祥宗红英更多>>
- 相关机构：武汉大学中南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省卫生厅科研基金湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 诱导小鼠淋巴细胞表达γ-干扰素的血吸虫成虫可溶性抗原组分被引量：2
- 2006年
- 目的 分离纯化日本血吸虫成虫可溶性抗原（soluble adult worm antigens，SAWA）各个组分，并分别鉴定其诱导小鼠脾淋巴细胞表达γ-干扰素（IFN-γ）的能力。方法 常规制备血吸虫SAWA，经十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）层析法分离、收集并透析纯化各抗原组分，SDS—PAGE检测分析其含量及相对分子质量（Mr）。常规制备感染42d小鼠脾淋巴细胞悬液，设立PBS阴性对照组及各组分抗原实验组，分别刺激体外培养的感染小鼠脾淋巴细胞，诱生IFN-γ，用双抗夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组IFN-γ水平，筛选出能诱导IFN-γ高表达的抗原组分。结果 获得20种胁不同且含量较高的SAWA组分抗原，Mr（×10^3）分别为22，23、24、28、40、45、56、62、64、65、68、70、71、74、78、91、95、100、102、105，其电泳图谱均显示为清晰的单一带。各组分抗原均能不同程度地诱导IFN-γ表达，其中Mr（×10^3）为22、24、45、62、64、65的组分抗原诱导IFN-γ的表达量较高，尤其是62×103组分抗原诱导表达IFN-γ水平显著高于其他实验组（P＜0．01）。结论 电泳层析法能很好地将日本血吸虫成虫可溶性抗原分成多个组分：62×10^3组分抗原具有诱导小鼠脾淋巴细胞高表达IFN-γ的能力，推测它可能是一个很强的Th1型淋巴细胞活性诱导分子。
- 王薇何立吴栋才金烈宗红英张培喜
- 关键词：血吸虫抗原电泳聚丙烯酰胺凝胶
- 日本血吸虫感染新模型小鼠IFN-γ及IL-4 mRNA的动态变化被引量：9
- 2008年
- 目的构建日本血吸虫感染小鼠伴随免疫新模型,通过观察比较新模型小鼠与常规感染小鼠脾细胞诱生Th1细胞因子(γ-IFN)和Th2细胞因子(IL-4)mRNA的动态变化,从分子水平探讨日本血吸虫感染小鼠伴随免疫新模型的细胞免疫机制。方法小鼠感染日本血吸虫尾蚴20d后,按300 mg/kg.d腹腔注射丙烯基硫脲,持续抑制雌虫产卵,建立日本血吸虫感染小鼠伴随免疫新模型。同时设立常规模型对照组和正常小鼠对照组。在感染后第2,3,6,9和12 w,采用RT-PCR对各组小鼠脾细胞IFN-γ和IL-4的mRNA水平进行半定量检测分析。结果新模型组与常规模型组小鼠IFN-γ和IL-4 mRNA水平变化趋势基本一致,IFN-γmRNA水平在感染后9w最强,然后逐渐下降,至第12w;IL-4 mRNA水平在感染后3w开始逐渐增强,至12w仍维持高水平。新模型组IFN-γmRNA水平在感染3w后明显高于常规模型组(P<0.05);常规模型组IL-4 mRNA水平在感染6w后明显高于新模型组(P<0.05)。正常小鼠IFN-γ和IL-4 mRNA水平较低,均无明显变化。结论日本血吸虫感染新模型小鼠与常规模型小鼠的细胞免疫功能变化趋势基本一致,表现为Th1淋巴细胞功能先升高,然后逐渐向Th2淋巴细胞功能极化,提示可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)不是诱导Th2功能极化的唯一因素,对细胞免疫应答由Th1向Th2功能极化有促进作用。
- 陈辉何立宗红英蒋明森杨孟祥张培喜
- 关键词：日本血吸虫Γ-干扰素白细胞介素-4
- 日本血吸虫感染新模型小鼠Th1/Th2细胞因子水平的动态变化被引量：2
- 2005年
- 目的在建立日本血吸虫感染小鼠伴随免疫新模型的基础上,通过观察比较新模型小鼠与常规感染小鼠脾细胞经不同抗原刺激后诱生的Th1细胞因子(IFN-γ)和Th2细胞因子(IL-4)水平的动态变化,探讨日本血吸虫感染小鼠伴随免疫新模型的细胞免疫机制. 方法小鼠感染日本血吸虫尾蚴20 d后,按300 mg/kg·d腹腔注射酚酶抑制剂丙烯基硫脲,持续抑制雌虫产卵,建立日本血吸虫感染小鼠伴随免疫新模型.同时设立常规模型对照组和正常小鼠对照组.在感染后第0、3、6、9和12周,取各组小鼠脾细胞进行体外培养,并分别用可溶性成虫抗原(SWAP)、可溶性虫卵抗原(SEA)及非特异性抗原刀豆素(ConA)诱导脾细胞产生细胞因子,应用ELISA方法测定培养上清液中IFN-γ和IL-4的含量. 结果新模型组与常规模型组IFN-γ和IL-4变化趋势基本一致,其中IFN-γ均在感染后4～6周开始上升,7～9周达到高峰,10～12周逐渐下降并恢复至感染前水平;IL-4均在感染后第6周开始逐渐升高,直至12周仍维持高水平;而正常组IFN-γ和IL-4均无明显变化.新模型组经SEA刺激后产生的IFN-γ水平,以及经SWAP和SEA刺激后产生的IL-4水平均显著低于常规模型组(P<0.05);而经SWAP刺激产生的IFN-γ水平显著高于常规模型组(P<0.05).在3种不同的抗原中,ConA组产生的IFN-γ和IL-4水平均显著高于SEA组和SWAP组(P<0.05). 结论日本血吸虫感染小鼠伴随免疫新模型与血吸虫常规感染小鼠的细胞免疫功能变化趋势基本一致,表现为感染早期以Th1细胞应答为主,然后逐渐向Th2细胞极化.
- 陈辉何立蒋明森杨孟祥张培喜
- 关键词：细胞因子Γ干扰素白细胞介素-4
- 筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原的研究被引量：7
- 2006年
- 目的筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原及其表位。方法制备日本血吸虫可溶性童虫抗原(SSA),经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Westernblot后分别与日本血吸虫感染后10、21、42天兔血清进行酶联免疫印迹试验(EITB),筛选出能被早期感染血清所识别的抗原组分。用日本血吸虫感染后21天血清从噬菌体12随机肽库中筛选、富集、纯化、扩增与早期感染兔血清有高亲和力的噬菌体克隆,经动物实验初步评估其对日本血吸虫感染的早期诊断效果。结果SDS-PAGE显示SSA的总条带数多于可溶性成虫抗原(SAWA),但大多为共同抗原。EITB结果显示SSA共出现12条早期反应抗原带,其中97kDa和47kDa抗原分子只能被感染后10天兔血清特异性识别;SAWA仅出现7条反应带,未显示只能被感染后10天兔血清识别的期特异性抗原分子。挑选出3个与感染后21天兔血清具有高亲和力的单克隆噬菌体,混合后分别用于检测感染日本血吸虫10、21d鼠血清中IgG特异性抗体,阳性检出率分别为48.8%和64.4%。结论SSA中的97kDa和44kDa抗原分子及3个噬菌体随机12肽抗原模拟表位可能具有日本血吸虫感染早期诊断价值。
- 吴栋才刘湘何立蒋明森杨孟祥易新元
- 关键词：日本血吸虫表位
- 日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离与纯化
- 2007年
- 目的 分离和纯化日本血吸虫可溶性虫卵抗原（soluble egg antigens，SEA）各组分。方法 常规制备血吸虫可溶性虫卵抗原，经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）柱电泳层析仪分离，分别按每管20、60、120min的流速各收集15管，并经透析纯化各抗原组分．再用SDS—PAGE检测并分析其相对分子质量（Mr）。结果 获得40种相对分子质量不同的可溶性虫卵抗原组分，时间流速对蛋白峰的出现和各组份中相对分子质量大小有明显的影响，当流速为20、60、120min，相对分子质量（×10^3）分别为34．19±4．56、60．35±11．10、91．08±12．75，组间比较差异有统计学意义（F=12、488，P〈0．05）。电泳图显示各蛋白峰均为清晰的单一带。结论 SDS—PAGE柱电泳层析方法能有效地分离出日本血吸虫可溶性虫卵抗原相对分子质量不同的抗原组分，流速明显影响分离结果。
- 金烈何立王薇张培喜宗红英
- 关键词：血吸虫电泳聚丙烯酰胺凝胶
