广东省自然科学基金(21865)
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
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- Survivin基因在顺铂诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡中的作用被引量：6
- 2007年
- 目的体外观察顺铂(DDP)诱导Tca8113舌鳞癌细胞株凋亡的作用,同时检测在此过程中凋亡蛋白抑制因子Survivin mRNA表达和蛋白表达的变化。方法将人Tca8113舌鳞癌细胞株进行传代培养,MTT法检测顺铂不同浓度和不同时间对Tca8113舌鳞癌细胞生长的抑制作用,通过RT-PCR检测凋亡过程中Survivin基因mRNA的表达,免疫细胞化学观察Survivin基因的蛋白表达,以及流式细胞术观察顺铂诱导各组Tca8113细胞的凋亡率。结果顺铂可明显抑制Tca8113舌鳞癌细胞的增殖,其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性,细胞凋亡率也呈同样的趋势,最高可达34.1%。1.0μg/mL DDP处理Tca8113舌鳞癌细胞,Survivin mRNA和蛋白表达水平随时间的增加而降低,在24h达到最低,随后又升高。结论抗凋亡蛋白Survivin在Tca8113舌鳞癌细胞高表达,顺铂可有效诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡,Survivin mRNA表达在化疗早期随作用时间的延长而降低,Survivin基因的抑制在顺铂诱导的Tca8113舌鳞癌细胞的细胞凋亡中起着重要的作用。
- 许建辉黄洪章潘朝斌张彬张磊涛
- 关键词：SURVIVIN顺铂舌鳞癌
- 非病毒载体介导的基因转染效率及其对人舌鳞癌细胞生长增殖的影响
- 2005年
- 【目的】观察多种非病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在舌鳞癌细胞内的表达情况,评价各载体的转染效率及其对细胞生长增殖的影响。【方法】采用pEGFP鄄N1评估阳离子脂质体、聚酰胺鄄胺型树枝状高聚物(PAMAM鄄D)以及SuperFect纳米微粒在舌鳞癌Tca8113细胞中的转染效率;绘制生长曲线,计算细胞的相对存活率,流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡。【结果】第5代(G5)PAMAM鄄D的转染效率明显高于第2代(G2)PAMAM鄄D(42.1%vs19.4%,P=0.003),与SuperFect和脂质体转染组的结果无统计学差异(42.1%vs35.9%和42.1%vs47.7%,P>0.05)。G5PAMAM鄄D对细胞的生长增殖无明显影响(P>0.05),而脂质体转染组细胞的生长增殖受到明显的抑制(P=0.001),细胞凋亡水平升高(P=0.01)。【结论】G5PAMAM鄄D载体安全低毒,转染效率高,是一种有良好应用前景的新型纳米载体基因转移系统。
- 刘习强黄洪章曾融生潘朝斌张彬
- 关键词：基因转染增强型绿色荧光蛋白舌鳞癌
- 聚乙二醇-聚谷氨酸纳米微球介导双自杀基因治疗金黄地鼠颊癌的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的:观察聚乙二醇-聚谷氨酸(PEG-PBLG)纳米微球介导双融合自杀基因CDglyTK治疗金黄地鼠颊癌的疗效。方法:用二甲基苯并蒽(DMBA)诱导金黄地鼠颊黏膜癌变,建立颊癌动物模型。以PEG-PBLG纳米微球为载体,介导携双自杀基因CDglyTK的真核表达质粒pcDNA3．1(+)-CDglyTK瘤内转染,腹腔注射5-氟胞嘧啶(5-FC)和丙氧鸟苷(GCV),描绘肿瘤生长曲线,RT-PCR检测CDglyTK的mRNA水平,免疫组化检测细胞核增殖抗原的表达,原位末端标记法检测肿瘤细胞凋亡。采用SPSS10．0统计软件包进行两样本均数X^2检验。结果:成功建立金黄地鼠颊癌模型,RT-PCR可检测到转染肿瘤细胞中CDglyTK的mRNA表达;腹腔注射5-FC和GCV后,肿瘤生长受到明显抑制;联合使用5-FC和GCV的金黄地鼠颊癌生长抑制作用明显优于单用5-FC或GCV。5-FC和GCV联合使用组,凋亡指数(AI)显著高于对照组(P＜0．01),同时增殖指数(PI)则显著低于对照组(P＜0．01)。结论:PEG-PBLG纳米载体介导双自杀基因CDglyTK可有效治疗金黄地鼠颊癌,为口腔鳞癌的基因治疗提供了新的思路。
- 余东升黄洪章潘朝斌胡晓文刘习强唐海阔
- 关键词：纳米微球双自杀基因金黄地鼠口腔鳞癌基因治疗
- 聚乙二醇-聚谷氨酸纳米微球介导双自杀基因对Tca8113细胞的杀伤作用被引量：1
- 2006年
- 目的:观察聚乙二醇-聚谷氨酸(PEG-PBLG)纳米微球介导双融合自杀基因CDglyTK对舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用,为口腔鳞癌的治疗探索新的途径和方法。方法:以PEG-PBLG纳米微球为载体介导携双自杀基因CDglyTK的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CDglyTK转染Tca8113细胞,通过RT-PCR检测CDglyTK的mRNA表达,MTT法描绘细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡并评价其疗效。统计分析采用SPSS10.0统计软件包完成,两样本均数的比较采用t检验。结果:PEG-PBLG纳米微球可介导质粒pcDNA3.1(+)-CDglyTK转染Tca8113细胞,RT-PCR可检测到转染细胞中CDglyTK的mRNA表达。转染后,细胞在滴加5-FC和GCV后生长受到明显抑制,5-FC和GCV联合使用对Tca8113细胞的生长抑制作用明显优于单用5-FC或GCV。5-FC和GCV联合使用组,凋亡指数显著高于对照组(P<0.01),同时也高于单独使用5-FC或GCV组(P<0.05)。结论:PEG-PBLG纳米载体介导双自杀基因CDglyTK,可有效杀伤舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的基因治疗提供了新的途径。
- 余东升黄洪章胡晓文刘习强唐海阔王安训
- 关键词：纳米微球双自杀基因舌鳞癌TCA8113杀伤作用
- 放射诱导启动子介导CDglyTK基因治疗Tca8113细胞的实验研究
- 2006年
- 目的观察人工放射诱导启动子介导CDglyTK双自杀融合基因治疗Tca8113细胞的疗效,为舌鳞癌治疗探索新的途径。方法构建人工放射诱导启动子调控双融合自杀基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/E-CDglyTK,用脂质体为载体转染Tca8113细胞后予以3Gy诱导放疗,描绘细胞生长曲线,RT-PCR检测CDglyTK的表达,流式细胞仪检测细胞的凋亡和增殖。结果诱导放疗可显著增强双自杀基因CDglyTK对Tca8113细胞的毒性作用;RT-PCR半定量分析诱导放疗增强了CDglyTK基因的mRNA表达;流式细胞检测发现治疗组细胞的凋亡指数明显高于对照组,而增殖指数则低于对照组,诱导放疗显著提升了这种差距。结论人工合成放射诱导启动子可作为基因治疗中的分子开关调节CDglyTK基因在Tca8113细胞中靶向表达。低剂量放射性照射可显著提高放射诱导启动子调控的CDglyTK基因治疗Tca8113细胞的疗效。
- 余东升黄洪章谢谦王安训胡晓文刘习强
- 关键词：放疗舌鳞癌
- 转基因载体聚乙二醇-聚谷氨酸纳米微球的制备被引量：4
- 2004年
- 目的 制备聚乙二醇 聚谷氨酸两嵌段共聚物 (PEG PBLG )纳米微球并观察其转基因能力。方法 合成两亲嵌段共聚物PEG PBLG ,红外光谱 (IR)、核磁共振谱 ( 1H NMR )、凝胶渗透色谱法 (GPC)测定其组成和结构 ;乳化溶剂蒸发法制备DNA/PEG PBLG纳米微球 ,透射电镜观察其形态 ,DNaseⅠ消化实验测试其DNA保护能力 ,以GFP为报告基因转染Tca8113细胞观察其转基因能力。结果 IR图谱证实两嵌段共聚物的形成 ,GPC和1H NMR测定PEG PBLG分子量约 80 0 0 ,PEG PBLG纳米微球直径约 70nm ,对质粒DNA有较好的保护作用并有较强转基因能力。结论 成功制备两亲嵌段共聚物PEG PBLG纳米微球并证实其载基因能力 。
- 余东升黄洪章李苏王安训潘朝斌王建广潘仕荣
- 关键词：核磁共振谱基因治疗
- 放射诱导调控序列的合成及其辐射诱导特性的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 合成放射诱导调控序列并鉴定其辐射诱导特性。方法 利用人工寡核苷酸片段合成含有 6个重复CArG元件的放射诱导调控序列 ,以绿色荧光蛋白 (GFP)作为报告基因转染Tca8113细胞检测其辐射诱导特性。结果 低剂量放射线照射可诱导这种人工调控序列增强GFP在Tca8113细胞中的表达 ,且 3Gy剂量最为明显 ,提高到放射前的 16 1%。结论 人工合成放射诱导调控序列在低剂量放射线照射下能明显增强其下游外源性基因的表达 ,为进一步研究放射 -基因治疗奠定了基础。
- 余东升黄洪章潘朝斌王建广马健王安训
- 关键词：绿色荧光蛋白
- PAMAM-D介导EGFP基因转染人舌鳞癌细胞的实验研究被引量：3
- 2005年
- 目的:优化聚酰胺-胺型树枝状高聚物(PAMAM-D)纳米载体介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染人舌鳞癌Tca8113细胞的条件,以获得最佳的转染效率和细胞内表达。方法:采用不同的质粒DNA浓度、PAMAM-D代数、PAMAM-D∶DNA质量比以及转染时间等参数,在激光共聚焦显微镜下,观察PAMAM-D介导pEGFP-N1体外转染Tca8113细胞,检测转染效率,并应用单因素方差分析等统计学方法进行比较分析;结合细胞生长和荧光蛋白的表达情况,进一步评估和优化转染条件。结果:1.0μg质粒DNA与2.0μlG5PAMAM-D形成复合物,转染细胞2h后,可获得最佳的转染效率(42.1%);G5PAMAM-D转染效率显著高于G2PAMAM-D(42.1%比19.4%,P<0.05);PAMAM-D基因转移系统对细胞的生长增殖无显著影响(P>0.05)。结论:PAMAM-D纳米载体在优化的转染条件下,可安全高效地介导目的基因转染Tca8113细胞,是一种较理想的基因转移系统。
- 刘习强黄洪章张彬潘朝斌余东升
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白基因转染舌鳞状细胞癌
