中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2010-JB05)
- 作品数：1 被引量：13H指数：1
- 相关作者：刘长龙黄律翟少伦张荣龙进学更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所新疆农业大学更多>>
- 发文基金：上海市技术标准专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪细小病毒4型Taq Man荧光定量PCR方法的建立与应用被引量：13
- 2011年
- 根据GenBank中发表的猪细小病毒4型(PPV4)全基因组序列,针对其结构蛋白VP2基因的保守序列,设计合成特异性引物及Taq Man探针,以VP2克隆质粒为标准品,通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整,建立了PPV4的Taq Man荧光定量PCR。反应条件优化后,该方法在6.73×109copies/μL^6.73×101copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.998;对PPV4的最低检测限为6.73×101copies/μL。特异性试验结果显示,用该方法检测其他基因型猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及猪圆环病毒2型等临床常见病毒,结果均为阴性。批内及批间变异系数均低于2%。用建立的荧光定量PCR方法和普通PCR方法对672份临床病料感染情况进行检测,阳性率为1.93%,而普通PCR检出率仅为1.63%。本研究首次报告在我国猪群中存在PPV4,同时建立的荧光定量方法为PPV4的检测、体外敏感细胞的筛选以及病毒器官嗜性的研究等提供了快速而敏感的分子检测技术。
- 黄律龙进学翟少伦刘长龙张荣袁世山
- 关键词：TAQ
- 新型猪细小病毒(PPV4)TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用
- 根据GenBank中登录的新型猪细小病毒(PPV4)全基因组序列,针对结构蛋白VP2基因序列设计合成特异性引物及TaqMan探针,以VP2克隆质粒为标准品,通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进...
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- 文献传递
