国家高技术研究发展计划(2012AA100202)
- 作品数：21 被引量：147H指数：8
- 相关作者：陈劲枫李季娄群峰李英侯喜林更多>>
- 相关机构：南京农业大学中国农业科学院蔬菜花卉研究所河北农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 黄瓜扩张素蛋白基因CsEXPb1的克隆及表达分析被引量：3
- 2015年
- 基于黄瓜果实转录组学研究,筛选并克隆了一个扩张素蛋白(β-expansin)基因Cs EXPb1。蛋白序列同源比对发现Cs EXPb1蛋白是一类钙调素类似蛋白(Calmodulin-like Protein,CML),与甜瓜、草莓及番茄扩张素蛋白基因具有较高的相似性;Ex Pasy分析发现Cs EXPb1为亲水性蛋白,亚细胞定位分析证明该蛋白广泛分布在细胞质以及细胞核结构中;q RT-PCR分析发现Cs EXPb1无论是在授粉坐果还是单性结实坐果过程中皆上调表达,而在不授粉败育的果实中下调表达;q RT-PCR也表明Cs EXPb1的表达受到生长素、细胞分裂素和赤霉素等单性结实诱导激素的正向调控,推测Cs EXPb1与黄瓜坐果有关,可能参与了激素诱导的单性结实过程。
- 孟永娇李季徐建张开京娄群峰陈劲枫
- 关键词：黄瓜坐果单性结实
- 茄子SmMsrA基因VIGS表达载体的构建及表达分析被引量：16
- 2015年
- 利用RT-PCR从茄子单性结实品系D-10中获得甲硫氨酸亚砜还原酶A基因(Sm Msr A)的编码区。通过Gateway同源重组技术,构建了3个分别含Sm Msr A基因不同片段的烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默(VIGS)表达载体p TRV2-Sm Msr Ai。表达载体转入农杆菌GV3101后,用注射压迫法侵染茄子叶片。采用表型观察、TRV病毒分子检测和q RT-PCR技术,评价构建的VIGS体系对Sm Msr A基因的沉默效果。结果表明,报告基因PDS沉默后叶片呈现明显的光漂白现象,Sm Msr A基因沉默后叶片呈花叶状,果实变小,叶片和果实中的Sm Msr A基因的表达量明显降低,表明Sm Msr A基因是正向调控茄子果实发育的相关基因。
- 赵祯刘富中张映齐东霞陈钰辉连勇
- 关键词：茄子VIGSGATEWAY技术果实发育
- 芥菜Fosmid文库构建及B基因组细胞学标记的筛选利用被引量：1
- 2012年
- 构建了由60000个克隆组成的芥菜无偏倚Fosmid文库,该文库外源片段插入率为100%,外源DNA平均插入长度为32kb,文库覆盖率约为芥菜基因组的1.8倍。利用不同来源的分子标记筛选文库,得到的阳性单克隆经荧光原位杂交(FISH)鉴定后,获得两类B基因组细胞学标记,一类在所有染色体上都有信号,另一类仅在一对染色体上有信号。
- 彭元凤孟德璇黄玉碧王桂香刘凡
- 关键词：芥菜FOSMID文库分子标记FISH
- 不结球白菜维生素C含量主基因+多基因遗传分析被引量：13
- 2014年
- 以高维生素C含量不结球白菜自交系乌塌菜和低维生素C含量不结球白菜自交系二青杂交获得的6个世代(P1、P2、F1、B1、B2和F2)株系为材料,应用植物数量性状主基因+多基因混合遗传模型,对不结球白菜中维生素C含量进行遗传分析。结果显示,不结球白菜中维生素C含量受1对加性主基因+加性-显性多基因控制,其中2011年结果中,主基因的加性效应为13.15,在B1、B2、F2世代中主基因的遗传率分别为54.38%、38.58%和18.69%,多基因的遗传率分别为24.69%、36.92%和40.70%;2013年结果中,主基因的加性效应为6.04,在B1、B2、F2世代中主基因的遗传率分别为1.88%、6.41%和45.04%,多基因的遗传率分别为39.67%、16.57%和16.91%。可见,不结球白菜维生素C性状受环境影响较大,在不结球白菜高维生素C含量品种选育过程中,要注重环境影响,并可以通过分子标记辅助选择,对性状进行改良。
- 林婷婷王建军王立陈暄侯喜林李英
- 关键词：不结球白菜维生素C主基因+多基因
- 黄瓜线粒体基因组SSR标记开发及其在种子纯度鉴定中的应用被引量：10
- 2015年
- [目的]基于黄瓜线粒体父系遗传特性,研究线粒体基因组SSR(mitochondria genome simple sequence repeat,mt SSR)标记技术在黄瓜杂交种纯度鉴定上的可行性。[方法]根据黄瓜线粒体基因组序列开发特异性标记,选用不同生态型的黄瓜品种对标记进行筛选,利用多态性引物对人为掺假的黄瓜F1种子进行纯度检测。[结果]从72对标记中,共筛选出4对在30份黄瓜品种呈现出多态性的引物,其中mt SSR4引物扩增出102和107 bp的多态性片段;mt SSR10引物扩增出196、224和242 bp的多态性片段;mt SSR29引物扩增出226、239和280 bp的多态性片段;mt SSR44引物扩增出184和194 bp的多态性片段。利用引物mt SSR4和mt SSR10对4份黄瓜F1种子纯度进行鉴定,结果显示黄瓜F1种子的带型与父本的一致,可将掺入杂交组合中的假种子区分开。田间试验数据表明:分子标记检测与田间鉴定结果基本一致,可用于黄瓜杂交种种子纯度的鉴定。[结论]线粒体基因组特异序列SSR标记能够准确地鉴定黄瓜杂种一代种子,在保证黄瓜种子生产质量方面具有广泛的应用前景。
- 李海梅沈佳赵娟娄群峰李季陈劲枫
- 关键词：黄瓜线粒体基因组SSR分子标记种子纯度鉴定
- 甘蓝类蔬菜Ogura细胞质雄性不育恢复材料的创制和育性观察
- 甘蓝类蔬菜(Brassica oleracea L.)杂种优势十分明显.Ogura细胞质雄性不育(Ogura CMS)材料的不育性稳定，转育容易，是杂交种种子生产的主要途径之一.但Ogura细胞质雄性不育是母性遗传，所有...
- 于海龙方智远杨丽梅刘玉梅庄木吕红豪李占省张扬勇
- 关键词：芥蓝胚挽救育性恢复回交转育
- 黄瓜遗传转化体系优化的研究被引量：8
- 2015年
- 为了提高农杆菌介导的黄瓜遗传转化效率,以亚洲生态型长春密刺、欧洲生态型Poinset76和Marketmore763种黄瓜为材料,筛选了适合遗传转化最佳的基因型,并通过改变培养基固化剂、添加抗氧化剂和有机添加物的方式对遗传转化体系进行优化。结果发现,3种基因型黄瓜中,长春密刺的抗性芽诱导分化表现最佳,而Poinset76和Marketmore76稍差;在脱乙酰吉兰糖胶为固化剂的培养基上,3种基因型的抗性芽诱导率比以琼脂粉为固化剂的培养基诱导率分别高28.21,19.71,15.39个百分点;共培养基中添加50 mg/L抗氧化剂α-硫辛酸时,长春密刺抗性芽诱导率最高达66.67%,平均芽分化数最高达1.32;在选择培养基中添加1.5 g/L的有机添加物水解酪蛋白,长春密刺抗性芽诱导率和平均芽分化数最高,分别为67.15%和1.42。此外,在前人建立的农杆菌介导的遗传转化体系的基础上,得到了以长春密刺为遗传转化的最适基因型,脱乙酰吉兰糖胶为培养基固化剂,共培养基中添加50 mg/Lα-硫辛酸或选择培养基中添加1.5 g/L水解酪蛋白的优化遗传转化体系,极显著提高了外植体抗性芽诱导率和平均芽分化数,推动了黄瓜转基因进程。
- 李蕾孟永娇张璐娄群峰李季钱春桃陈劲枫
- 关键词：黄瓜基因型固化剂抗氧化剂有机添加物
- 黄瓜萌芽期和苗期耐冷性评价被引量：22
- 2013年
- 选用13份黄瓜材料,研究萌芽期和苗期共12个指标与黄瓜耐冷性的关系,对材料进行耐冷性评价.结果表明:17℃下的相对发芽率、相对发芽势、相对胚根长和相对活力指数在13份黄瓜材料中差异显著(P<0.05),并与黄瓜耐冷性的相关关系显著;苗期4℃处理2 d时各材料之间生理差异明显,冷害指数与恢复后成活率的相关性显著,而与总蛋白、电导率、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性的相关性不显著.通过聚类分析将黄瓜材料耐冷性分为3个等级,通过逐步回归分析建立了两个生育期黄瓜耐冷性方程,可根据置信区间估计值对黄瓜的耐冷性进行较好的评价.
- 苗永美宁宇曹玉杰沈佳庞欣崔利程春燕陈劲枫
- 关键词：黄瓜耐冷性主成分分析
- 不结球白菜Pol胞质雄性不育花酵母双杂交cDNA文库的构建及筛选被引量：3
- 2015年
- [目的]构建不结球白菜Pol胞质雄性不育花酵母双杂交cDNA文库,筛选与细胞色素C还原酶铁硫蛋白(BcRISP1)互作的蛋白。[方法]从不结球白菜Pol胞质雄性不育花中提取总RNA,通过长距离PCR,扩增双链cDNA(ds cDNA)。采用SMART建库技术构建不结球白菜Pol胞质雄性不育花全长cDNA文库。利用BcRISP1基因的开放阅读框,构建诱饵表达载体pGBK T-7-BcRISP1转化AH109酵母菌,根据酵母双杂交技术筛选出与BcRISP1互作的片段,并进行质粒共转化验证。[结果]经检测,文库的转化率为每μg p GADT7-Rec 1.80×106转化子,文库滴度为1.21×107CFU·m L-1,重组率为94%,成功构建可以用于酵母双杂交的cDNA文库。酵母双杂交技术获得了与BcRISP1互作的阳性克隆,试验表明诱饵载体表达产物对酵母无毒性作用,质粒共转化试验初步验证了BcRISP1与CYP81G、PIP2蛋白的互作关系。[结论]cDNA文库的成功构建为后期互作蛋白的顺利筛选奠定了基础,利用酵母双杂交技术成功获得与BcRISP1互作的蛋白CYP81G和PIP2,为明确不结球白菜Pol胞质雄性不育相关基因的信号传递通路提供更多的依据,以期从分子水平上进一步阐明不结球白菜Pol胞质雄性不育的机制。
- 钱瑜刘同坤侯喜林李英
- 关键词：不结球白菜酵母双杂交
- 不结球白菜叶绿素含量的主基因+多基因混合遗传分析被引量：16
- 2014年
- 对不结球白菜叶绿素含量进行遗传模式分析,为品质改良奠定基础。应用植物数量性状主基因+多基因混合遗传模型,以‘乌塌菜’和‘二青’为亲本配制的6个世代(P1、P2、F1、B1、B2和F2)为材料,对不结球白菜中叶绿素含量进行遗传模式分析。2年的研究结果表明,叶绿素含量受1对加性-显性主基因+加性-显性-上位性多基因控制。2011年,主基因的加性效应为9.59,显性效应为1.17,在B1、B2、F2世代中主基因的遗传率分别为22.86%、41.65%、61.24%,多基因的遗传率分别为59.18%、36.08%、24.30%。2013年,主基因的加性效应为4.48,显性效应为2.09,在B1、B2、F2世代中主基因的遗传率分别为5.66%、38.51%、26.29%,多基因的遗传率分别是64.99%、22.93%、52.08%。结论:不结球白菜叶绿素含量受1对加性-显性主基因+加性-显性-上位性多基因控制,以遗传效应为主,同时还受环境变异的影响。在不结球白菜叶绿素含量的群体改良中,可考虑对高叶绿素含量的单株进行定向选择或轮回选择,以提高育种效率。
- 林婷婷王立张琳王建军侯喜林李英
- 关键词：不结球白菜叶绿素主基因+多基因
