上海市自然科学基金(05ZR14020)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
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- 外源性分泌性卷曲相关蛋白干预对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞增殖的影响被引量：2
- 2010年
- 目的检测。肾母细胞瘤SK—NEP-1细胞中wnt通路分泌性卷曲相关蛋白（sFRP-1）基因及相关基因的表达；探讨不同浓度sFRP-1蛋白对细胞增殖的影响及可能的机制。方法RT—PCR方法检测肾母细胞瘤细胞株SK—NEP-1细胞及肾胚胎细胞293细胞中wnt通路相关分子sFRP-1、WNT4及β-catenin基因的表达；SK-NEP-1细胞中加入不同浓度的sFRP-I蛋白干预，观察细胞增殖变化，实验分为4组，无干预（对照组）；低剂量组：sFRP-1（500ng／ml）；高剂量组：sFRP-1（10μg／m1）；高剂量抗体组：sFtP-1抗体（10〉g／ml），分别在干预后0、24、48、72h用CCK-8试剂检测比较各组细胞的光吸收度值（AV）以评估细胞活力。结果SK—NEP-1细胞与胚胎293细胞均有sFRPI基因表达，而WNT4基因表达不明显。sFRP-1蛋白干预实验显示，低剂量组及高剂量抗体组干预前后与对照组比较，AV值无明显变化，而高剂量组的AV值在干预24、48h均较其他组明显降低，分别为对照组的0．82倍和0．79倍，表明细胞增殖受抑制。结论肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞中有sFRPl基因表达，外源性加入低浓度的sFRP-1蛋白并不能对Wnt／β-catenin通路产生影响，只有在加入高浓度的sFRP-1蛋白时才能对SKNEP-I细胞增殖产生抑制作用。
- 陆良生李凯肖现民
- 关键词：肾母细胞瘤WNT通路
- β-catenin特异性siRNA转染肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1对细胞增殖的影响被引量：4
- 2012年
- 目的 采用RNAi技术抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin基因（CTNNB1）的表达,观察对肾母细胞瘤细胞株SK-NEP-1细胞增殖的影响,并检测通路下游相关基因及β-catenin蛋白表达水平的变化及意义.方法 将两种不同序列β-catenin特异性siRNA瞬时转染到SK-NEP-1细胞中,实验分为4组：未转染组（UT）、阴性对照组（NS）、siRNA1组（S1）、siRNA2组（S2）,分别在转染后的0、24、48、72 h用CCK-8试剂盒检测比较各组光吸收度值（AV）；在转染24 h后检测各组中CTNNB1、CCND1、MYC基因的表达水平；转染48 h后免疫荧光法检测各组中β-catenin蛋白的表达水平.结果 转染优化实验表明,100 nmol/L的β-catenin特异siRNA1和siRNA2均可获得有效抑制效应.瞬时转染24 h,UT组的AV值（0.62±0.03）分别是S1组（0.49±0.02）和S2组（0.50±0.02）的1.25倍和1.23倍（P＜0.01）,48 h后UT组的AV值（1.03±0.07）分别是S1组（0.69±0.04）和S2组（0.72±0.03）的1.48倍和1.43倍（P＜0.01）,转染组细胞增殖明显受到抑制.转染24h后S1和S2组CTNNB1的mRNA水平分别被敲减了67％和73％,S1、S2组与UT组比较,下游基因CC-ND1、MYC的mRNA表达水平也明显降低,CCND1组间比较P＜0.01；MYC组间比较P＜0.05,而UT组与NS组比较,CTNNB1、CCND1、MYC基因的P值均＞0.05.转染48 h后,积分光密度/面积（IOD/Area）值分析比较各组β-catenin荧光强度,S1组（0.50±0.36）、S2组（0.58±0.20）较UT组（2.06±0.30）、NS组（2.03±0.53）明显减少,P＜0.01.结论 瞬时转染β-catenin特异性siRNA能抑制SK-N EP-1细胞的增殖,使细胞中β-catenin蛋白的表达降低,Wnt/β-catenin信号通路下游相关基因MYC及CCND1表达下调.β-catenin是肾母细胞瘤分子靶向治疗的一个潜在新靶点.
- 陆良生李凯肖现民
- 关键词：Β-CATENINSIRNA肾母细胞瘤
