国家自然科学基金(81370816) 作品数:10 被引量:50 H指数:3 相关作者: 杜晓刚 彭兰 刘婷 龚颖 李正荣 更多>> 相关机构: 重庆医科大学附属第一医院 重庆市食品药品检验所 重庆医药高等专科学校 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市自然科学基金 重庆市卫生局科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
ROS介导棕榈酸诱导的肾小球足细胞骨架及裂孔隔膜损伤 被引量:1 2019年 目的:探讨棕榈酸(palmitic acid,PA)对足细胞肌动蛋白纤维骨架及裂孔隔膜蛋白损伤的影响。方法:应用PA刺激体外培养的条件永生性小鼠肾小球足细胞株,分为对照组(1%BSA)和PA(150μmol/L)组。采用Alexa 549-phalloidin染色观察足细胞肌动蛋白纤维骨架的变化;免疫荧光染色法观察检测足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin的表达;油红“O”、透射电镜以及BODIPY染色检测PA刺激下足细胞内脂质积聚情况。应用不同浓度PA刺激足细胞,分为对照组(1%BSA)、50μmol/L PA组、150μmol/L PA组、300μmol/L PA组。采用Western blot检测足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin的表达。进一步应用氧自由基清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)预处理足细胞,分为对照组(1%BSA)、PA(150μmol/L)组、NAC组、PA(150μmol/L)+NAC组。采用DCFH-DA染色检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生;Alexa 549-phalloidin染色观察足细胞肌动蛋白纤维骨架的变化;Western blot检测足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin的表达。结果:Western blot结果示300μmol/L PA组足细胞内Nephrin和Podocin的表达(0.360±0.030,0.900±0.040)分别与对照(Ctr)组(1.000±0.030,1.000±0.030)和50μmol/L PA组(0.912±0.020,0.900±0.040)相比都明显减少(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.003)。免疫荧光显示与Ctr组相比,PA组足细胞Nephrin(t=6.014,P=0.010)和Podocin(t=6.171,P=0.010)蛋白的表达减少。使用NAC预处理足细胞清除ROS,与PA组(1.21±0.04,1.30±0.03)相比,PA+NAC组Nephrin(2.87±0.05)和Podocin(2.69±0.06)的表达减少(P=0.000,P=0.000)。结论:ROS介导了棕榈酸诱导的足细胞骨架及裂孔隔膜损伤。 吴玥 刘婷 杜晓刚关键词:棕榈酸 足细胞 活性氧 急性肾损伤生物标志物在危重症患者中的研究进展 被引量:5 2020年 急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)是重症监护室(intensive care units,ICU)患者的常见疾病,死亡率高。目前,改善全球肾脏病预后组织(Kidney Disease:Improving Global Outcomes,KDIGO)发布的最新AKI临床实践指南仍以血肌酐值及尿量作为AKI的诊断标准,对AKI的早期发现存在一定局限性。近年来,一些AKI生物标志物已经在临床实践中得到验证,如中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、白介素-18、肾损伤分子-1、L型脂肪酸结合蛋白、胰岛素样生长因子结合蛋白-7和组织抑制金属蛋白酶-2、MicroRNA(miRNA)等,但因ICU中AKI患者存在更复杂的发病机制和病理生理学改变,这些生物标志物在ICU中并没有得到广泛使用,本文就AKI的新型生物标志物在ICU患者中的研究进展作一综述。 罗仁杰 杜晓刚 陈雪梅关键词:急性肾损伤 生物标志物 重症监护室 危重症患者 ATF4通过调节Parkin减轻棕榈酸诱导的肾小球足细胞凋亡 2020年 目的:探讨转录激活因子4(activating transcription factor-4,ATF4)调节Parkin在棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的肾小球足细胞凋亡中的作用。方法:SD大鼠20只随机分2组:普通饮食组(n=10)及高脂饮食组(n=10)喂养12周后,采集血清检测甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇酯(total cholesterol,TC);Tunel染色检测肾组织细胞凋亡情况;免疫组化、Western blot检测肾组织Cleaved-caspase3和ATF4、Parkin蛋白的表达。在体外实验中,采用PA刺激足细胞,或用质粒转染过表达Parkin或用腺病毒敲低ATF4表达,Western blot检测足细胞凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3表达水平,流式细胞术检测足细胞的凋亡率。结果:高脂饮食组大鼠TG和TC的表达水平(2.700±0.565、2.620±0.565)分别与普通饮食组(0.780±0.165、1.540±0.377)相比明显增加(t=-7.987,P=0.000;t=-3.895,P=0.003)。肾组织凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3、Parkin蛋白和ATF4蛋白表达水平,高脂饮食组(2.257±0.326、1.587±0.162、1.851±0.347)较普通饮食组(1.000±0.190、1.000±0.323、1.000±0.186)明显增加(P=0.000,P=0.003,P=0.000)。采用不同浓度PA刺激发现,足细胞ATF4、Parkin及Cleaved-caspase3的表达量150μmol/L PA组(1.689±0.235、1.529±0.057、1.773±0.186)、300μmol/L PA组(1.702±0.228、2.047±0.086、2.282±0.155)较对照组(1.000±0.030、1.000±0.066、1.000±0.039)明显增加(P=0.002,P=0.002;P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000)。采用Parkin过表达质粒转染足细胞后,与对照组(1.000±0.253)相比,Parkin过表达组的Parkin表达(105.242±24.108)明显升高(P=0.000)。进一步予以PA刺激,PA+Parkin过表达组足细胞[1.943±0.200,(9.590±0.418)%]较PA+空载质粒组[3.398±0.164,(15.140±1.227)%]其Cleaved-caspase3明显减少(P=0.000),细胞凋亡率明显降低(P=0.000)。进行腺病毒转染敲低ATF4后,与对照组(1.000±0.112、1.000±0.104、1.000±0.279)相比,shATF4 3组ATF4蛋白表达(0.175±0.064)、Parkin蛋白表达(0.518±0.130)明显减少(P=0.000,P=0.004),Cleav 徐凌珂 吴玥 刘婷 万姜敏 杜晓刚关键词:棕榈酸 肾小球足细胞 内质网应激 PARKIN Pdlim2在高脂血症大鼠肾小球足细胞中的表达改变及意义 被引量:3 2014年 目的探讨Pdlim2在高脂血症大鼠肾小球足细胞中的表达改变及意义。方法45只雄性sD大鼠按随机数字表法分为3组:正常对照组(n=15)给予普通饲料喂养;高脂饮食组(n=15)给予高脂饲料喂养;辛伐他汀组(n=15)在高脂饲料喂养的基础上给予辛伐他汀10mg·kg-1·d-1水溶液灌胃,分别于实验第4、6、10周时随机取5只大鼠,检测大鼠24h尿蛋白量及血清胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平,电镜观察大鼠肾小球足细胞的损害,免疫荧光染色及Western印迹法检测大鼠肾脏Pdlim2蛋白的表达及分布。结果于实验第4周开始,同一时间点高脂饮食组和辛伐他汀组血清胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平较正常对照组高(P〈0.05),而辛伐他汀组则较高脂饮食组低(P〈0.05);至实验第10周时高脂饮食组和辛伐他汀组24h尿蛋白量均高于正常对照组,而辛伐他汀组24h尿蛋白量低于同期高脂饮食组,差异有统计学意义(Pc0.05);电镜下观察发现,高脂饮食组4周时已有足细胞足突融合,且随时间延长而损伤加重,实验第10周时辛伐他汀组足突损伤程度明显轻于高脂饮食组;免疫荧光染色检查发现,Pdlim2蛋白阳性染色主要分布在肾小球内,且实验第10周时高脂饮食组和辛伐他汀组肾小球内Pdlim2蛋白表达低于正常对照组,而辛伐他汀组其表达又高于高脂饮食组;Western印迹检查显示,实验第4周开始,Pdlim2蛋白表达在高脂饮食组低于正常对照组(P〈0.05),10周时在高脂饮食组和辛伐他汀组均显著低于正常对照组(P〈0.05),而辛伐他汀组又高于高脂饮食组(P〈0.05)。结论高脂血症可在实验大鼠蛋白尿发生前导致足细胞损伤,其机制可能与肾小球的细胞骨架调节蛋白Pdlim2表达减少相关,而辛伐他汀可能通过保护肾小球Pdlim2的表达,减轻高脂导致的足细胞足突融合� 彭兰 杜晓刚 范能全 何俊伶关键词:高脂血症 足细胞 辛伐他汀 系统性红斑狼疮相关性塌陷性肾小球病研究进展 被引量:1 2016年 塌陷性肾小球病(collapsing glomerulopathy,CG)最初是在人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)阳性患者中发现的一种特别的肾脏病,现在认为它与许多其他的疾病相关,比如系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)。SLE相关性CG(SLE-associated CG)是指在SLE患者中发现的一种罕见的临床病理实体,并除外其他引起CG的主要因素(比如HIV、细胞病毒B19、丙肝病毒、药物等),临床上以大量蛋白尿,对免疫抑制剂治疗反应差和急进性肾功能恶化为特点。本文对近年来国外有关SLE相关性CG的研究进展进行综述。 梅净 杜晓刚关键词:系统性红斑狼疮 成人原发肾病综合征并发急性肾损伤危险因素分析 被引量:26 2020年 目的探讨成人原发肾病综合征患者继发急性肾损伤(AKI)的危险因素,为临床早期发现肾病综合征继发AKI并及早防治提供指导。方法纳入符合标准的185例成人原发性肾病综合征患者为研究对象,按照是否并发AKI分为AKI组(n=51)和非AKI组(n=134)。比较AKI组和非AKI组患者入院时的临床病理特征,通过多因素Logistics回归分析评价患者发生AKI的独立危险因素。结果51例原发肾病综合征并发AKI的患者中,发生AKI的病理类型依次为肾小球轻微病变(29.4%)、IgA肾病(25.5%)、膜性肾病(17.6%),且肾脏病理中AKI组出现肾小管蛋白管型、上皮细胞空泡变显著高于非AKI组(P=0.004,P=0.030)。与女性相比,男性肾病综合征患者更易发生AKI(P=0.000)。与非AKI组比较,AKI组患者白蛋白水平更低(P=0.015),随机尿蛋白、入院时血肌酐、尿酸、尿素氮、三酰甘油水平更高(P=0.030,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.006),且更易伴随多浆膜腔积液、少尿、高血压及感染(P=0.000,P=0.002,P=0.035,P=0.000)。多因素Logistics回归分析显示,入院时白蛋白(<25 g/L)、血肌酐(>96μmol/L)、尿素氮(≥6.8 mmol/L)、尿酸(≥400μmol/L)、糖尿病、感染、肾小管蛋白管型是影响AKI发生的独立危险因素。结论成人原发肾病综合征并发AKI与多种因素相关,其中入院时白蛋白、血肌酐、尿素氮及尿酸水平、糖尿病、感染、肾小管蛋白管型为AKI发生的独立危险因素。 周燕琳 杜晓刚关键词:肾病综合征 原发肾病综合征 急性肾损伤 急性肾衰竭 成人 间歇补充型血液透析滤过及其临床应用 被引量:10 2019年 间歇补充型血液透析滤过(I-HDF),是使用程序化的透析机,在血液透析过程中将高质量的超纯透析液通过透析膜间歇性反超滤输注至血液中,以短期内增加外周循环容量,提高溶质清除率,达到模拟血液透析滤过的效果。I-HDF基本程序:每次输注量为200 ml,每次输注的间隔时间30 min,输注速度为150 ml/min;初次输注在血液透析开始后30 min,并在治疗结束前30 min完成最后一次输注。血液透析时间为4h时,总输注量为1 400 ml(200 ml×7次)。I-HDF可有效改善血液透析治疗过程中患者的外周循环,提高血浆再充盈,增加溶质清除,并且可防止透析膜的渗透性随时间延长而下降,稳定透析中血压,减少心动过速的发生,非常有益于低血压倾向的患者。 龚颖 李正荣 杜晓刚关键词:外周循环 透析中低血压 高脂血症大鼠肾脏Angptl4变化及辛伐他汀的保护作用 被引量:3 2014年 为探讨高脂血症大鼠(Rattus norregicus)肾脏中Angptl4的变化及辛伐他汀的保护作用,将45只雄性SD大鼠随机平均分为3组:正常对照组(NG)给予普通饲料喂养;高脂饮食组(HG)给予高脂饲料喂养;辛伐他汀组(SG)在高脂饲料喂养的基础上给予辛伐他汀10mg·kg-1·d-1水溶液灌胃。分别于第4、6、10周时各组随机选取5只大鼠,检测大鼠24h尿蛋白及血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,石蜡切片HE染色观察大鼠肾小球的损害,免疫组化及Western blot检测大鼠肾脏Angptl4蛋白分布及表达。结果显示,于第4周开始,HG组和SG组大鼠血清TC和LDL-C水平升高。实验第10周时,HG组和SG组大鼠24h尿蛋白定量升高;大鼠肾组织HE染色光镜下观察显示:肾小球呈轻微分叶状,系膜区增宽和基质增多不明显,但肾小球内有较明显的空泡变性,SG组大鼠的病变明显轻于HG组;免疫组化和免疫印迹检查发现,大鼠肾脏Angptl4明显增多,SG组的表达较HG组有减少。研究认为,高脂血症可引起肾脏肾小球明显病变,可能是肾小球内的足细胞分泌Angptl4的增多引起;而辛伐他汀则可能使高脂饮食时足细胞分泌Angptl4减少,从而减轻高脂血症时肾小球受到的损害。 彭兰 范能全 杜晓刚关键词:高脂血症 肾小球 辛伐他汀 转录激活因子6在棕榈酸诱导的足细胞凋亡中的作用 2015年 目的探讨转录激活因子6(activating transcription factor6,ATF6)在棕榈酸(palmiticacid,PA)诱导的足细胞(MPC5细胞)凋亡和增殖中的作用。方法不同浓度PA刺激足细胞24h,检测ATF6和激活型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Cleaved—caspase3)表达水平及足细胞凋亡情况。腺病毒siATF6转染沉默ATF6后,比较PA诱导的足细胞增殖能力、细胞周期、细胞凋亡和Cleaved—caspase3的蛋白表达水平的变化。采用Western印迹检测Cleaved.caspase3和ATF6蛋白表达水平,流式细胞术检测足细胞凋亡和细胞周期,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖,细胞免疫荧光观察ATF6在足细胞中的表达和分布。结果与对照组比较,PA诱导组足细胞凋亡明显增加(P〈0.05),细胞Cleaved.caspase3和ATF6蛋白水平随PA浓度增加呈剂量依赖性增高(均P〈0.05)。采用腺病毒siATF6转染足细胞后,PA诱导的足细胞凋亡较空载体转染组减少,细胞增殖增加,S期的细胞比例明显增多,Cleaved—caspase3的表达降低(均P〈0.05);空载体转染组与PA诱导组在上述指标间的差异均无统计学意义。结论ATF6介导棕榈酸诱导的足细胞凋亡。 万姜敏 杜晓刚关键词:棕榈酸 足细胞 细胞凋亡 常染色体显性遗传性多囊肾病早期诊断标志物研究进展 被引量:1 2017年 常染色体显性遗传性多囊肾病是常见遗传性肾脏疾病。虽然疾病早、中期,肾脏囊肿呈持续增大,但多数患者肾功能仍处于正常水平。因此,临床需能预测疾病发生、发展的敏感生物学标志物。总肾体积、肾血流量是已知预测常染色体显性遗传性多囊肾病进展的指标。肽素、中性粒细胞明胶酶蛋白、微小核糖核酸等也可能是早期预测常染色体显性遗传性多囊肾病的敏感指标。本文就常染色体显性遗传性多囊肾病早期诊断标志物的研究进展作一综述。 谭倩曦 杜晓刚关键词:常染色体显性遗传性多囊肾病 尿酸 微小核糖核酸