黑龙江省教育厅科研基金(11521161)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- RNA干扰体外抑制大鼠ICOS基因的表达
- 2008年
- 目的观察可诱导共刺激因子(inducible co-stimulator factor,ICOS)短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对大鼠活化T细胞中ICOS基因的沉默效应,筛选有效干扰靶点。方法设计合成ICOS RNA寡核苷酸片段,经退火、连接等步骤克隆至线性化的pRNAT-U6.1/Neo真核表达载体上,测序鉴定。应用Lipofectamine2000将该质粒转染活化的大鼠T细胞,荧光定量RT-PCR检测ICOS mRNA表达情况,Western blot检测ICOS蛋白表达情况。结果成功构建了3个靶点的重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA1、2、3,荧光定量RT-PCR和Western blot显示转染这3种重组质粒的T细胞ICOS mRNA和蛋白表达均较对照组有不同程度的下降,其中1号靶点的干扰效应最为明显。在转染后的T细胞中,其抑制率分别达到了51.3%、78.3%.结论重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA能有效抑制大鼠活化T细胞中ICOS基因的表达,并筛选出了有效干扰靶位。RNA干扰技术有望成为研究ICOS在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎中作用的有效手段。
- 侯勇生邢琳傅少颖吕冰洁刘洪玲崔浩
- 关键词：RNA干扰实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎转染
