国家自然科学基金(81201551)
- 作品数：8 被引量：69H指数：3
- 相关作者：崔红娟杨丽群徐曼向仲怀李重阳更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 家蚕免疫血清体外抑制神经母细胞瘤细胞生长和增殖
- 2015年
- 家蚕免疫系统在抵抗病原微生物时会产生一些具有免疫功能的小分子肽,有研究表明这些肽具有抗肿瘤活性。我们通过免疫诱导法,给家蚕注射了一定量的抗原诱导家蚕产生免疫血清。从家蚕体内收集免疫血清,稀释成不同浓度梯度处理神经母细胞瘤细胞系BE(2)C,并观察其对BE(2)C细胞的影响。通过显微镜观察发现免疫血清处理后肿瘤细胞出现了大面积死亡。经MTT方法检测分析后发现,家蚕免疫血清对肿瘤细胞生长有抑制作用。实验结果初步证实了经抗原诱导的家蚕免疫血清对神经母细胞瘤系BE(2)C的生长及增殖有抑制作用,推测家蚕免疫血清可能诱导了肿瘤细胞发生凋亡,为进一步解析其调控机制提供了有力的数据支撑,为开发家蚕新的经济用途奠定了良好基础。
- 王梓任陆天琳徐曼杨丽群
- 关键词：家蚕神经母细胞瘤
- 药用真菌桑黄的研究进展被引量：49
- 2014年
- 桑黄(phellinus)作为寄生在桑树上的真菌,在2 000多年前就有用作珍贵中药材的记载,在调节机体免疫、延缓衰老和抗肿瘤等方面具有良好的功效。该文综合近几年国内外有关桑黄的分类学问题、活性成分、药效及其作用机制、提取工艺等方面的研究进展进行阐述,并对目前存在的问题及今后的研究方向进行了探讨。
- 张维博王家国李正阔杨丽群秦俭向仲怀崔红娟
- 关键词：分类学活性成分抗肿瘤药效机制
- 家蚕GATA转录因子BmGATA6的克隆、多克隆抗体制备及组织细胞定位被引量：1
- 2016年
- 【目的】克隆家蚕(Bombyx mori)GATA转录因子BmGATA6,将其在原核细胞中进行表达,纯化重组蛋白,多次免疫小鼠获得BmGATA6多克隆抗体,为进一步分析BmGATA6在家蚕变态发育中的功能提供抗体条件。【方法】解剖家蚕获得5龄第3天的各组织及4眠至熟蚕整个时期的中肠组织,在液氮中研磨为粉末,利用Trizol法提取RNA,体外反转录得到c DNA。基于家蚕BmGATA6的基因编码序列设计全长特异引物,并以Bm Actin3作为内参,进行家蚕5龄第3天各组织及4龄眠期至熟蚕期各时期的RT-PCR检测。设计原核表达引物,扩增原核表达片段连接到p ET32a载体上,构建原核表达载体,转化至BL21(DE3)Escherichia coil表达菌株。加入IPTG至终浓度分别为0.4、0.6、0.8、1.0 mmol·L^(-1)。在16℃条件下培养20 h和37℃条件下培养5 h分别进行BmGATA6蛋白诱导表达。选取最佳诱导条件进行BmGATA6蛋白的大量诱导,用镍柱亲和层析法纯化家蚕BmGATA6蛋白,经多次免疫昆明小鼠后,最终获得BmGATA6多克隆抗体。利用ELISA法测定鼠抗BmGATA6蛋白多克隆抗体的效价,通过Western blot检测BmGATA6抗体的特异性。以家蚕5龄第6天中肠的石蜡切片作为样本,通过免疫荧光对家蚕中肠组织中的BmGATA6蛋白进行亚细胞定位。【结果】家蚕GATA转录因子BmGATA6的c DNA全长4 011bp,ORF长为1 974 bp,编码657个氨基酸,包括205 bp的5′非翻译区序列(5′UTR)和1 832 bp的3′非翻译区序列(3′UTR)。该基因位于15号染色体上,基因全长12 326 bp,为多外显子基因,共含有8个外显子和7个内含子,具有2个典型的GATA锌指结构域,分别位于第470—521和531—582氨基酸区域。RT-PCR结果显示BmGATA6在5龄第3天家蚕中肠中显著高量表达,其次在马氏管中有少量表达,而在其他组织中没有检测到BmGATA6的表达。同时RT-PCR结果显示BmGATA6在4龄眠期到熟蚕期的中肠组织中持续高表达。构建BmGATA6原核表达载体,通过不同温
- 谭鹏徐曼梁航华张亚军胡仁建崔红娟
- 关键词：家蚕原核表达多克隆抗体亚细胞定位
- 家蚕BmYki-1基因鉴定与表达特征
- 2016年
- 【目的】Hippo信号通路中的核心激酶通过磷酸化作用于转录共激活因子Yki来调控下游基因的表达,在控制器官大小、细胞增殖与凋亡等方面起关键作用。家蚕(Bombyx mori)作为鳞翅目模式昆虫,对其Hippo通路研究较少。论文旨在通过鉴定家蚕BmYki-1并对其序列信息和表达特征进行分析,为进一步研究中肠中Hippo信号通路提供基础,更好地了解Hippo信号通路在肠道稳态维持及组织损伤修复方面的调控机制。【方法】利用NCBI数据库及家蚕基因组数据库等相关信息,以哺乳动物和果蝇的Yki蛋白序列为依据,对家蚕Yki基因的同源序列进行鉴定;以家蚕大造品系为研究材料,利用PCR和c DNA末端快速克隆技术克隆获得家蚕BmYki两种可变剪切体的全长序列BmYki-1和BmYki-2,并基于生物信息学方法对两种剪切体的基因序列特征及蛋白结构特征进行分析;重点对BmYki-1在家蚕中肠组织中的功能进行探索;利用半定量PCR检测家蚕L5D3不同组织及中肠各个龄期BmYki-1表达情况;构建BmYki-1过表达载体并转染家蚕胚胎细胞系对其进行亚细胞定位分析;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测用博来霉素损伤的家蚕中肠中BmYki-1的表达情况。【结果】家蚕中存在两种可变剪切形式的BmYki,分别为BmYki-1和BmYki-2,在家蚕基因组数据库中对应的注释号分别为BGIBMGA0082-TA和BGIBMGA0081-TA,其开放阅读框(ORF)分别为1 329和1 227 bp,分别编码442和408个氨基酸,其蛋白质分子量分别为48和44.1 k D,等电点分别为5.18和5.50,在139—171、220—252氨基酸处均各有1个WW结构域。多物种进化树表明,家蚕BmYki-1与同为鳞翅目的昆虫脐橙螟的亲缘关系最近,与鞘翅目、膜翅目昆虫较近,与双翅目昆虫较远,而与脊椎动物的亲缘关系最远。结果显示BmYki-1在家蚕中肠和丝腺中特异表达,中肠不同龄期表达谱分析结构显示表达量从2眠开始上调,在5龄的前中期表达水�
- 杨丽群贾乐梅唐梅陈毅彪崔红娟
- 关键词：家蚕生物信息学分析亚细胞定位
- 提高发酵桑叶饲料必需氨基酸含量的复合菌剂被引量：13
- 2015年
- 采用复合菌剂对桑叶进行发酵处理,提高桑叶用作畜禽饲料的营养价值。选用枯草芽孢杆菌、植物乳酸杆菌、啤酒酵母和米曲霉菌4种饲料级微生物添加剂菌种,设计至少由3个菌种组合且分高、中、低添加剂量的共9个复合菌剂配方,测定经不同配方复合菌剂发酵处理后桑叶饲料中的粗蛋白、17种游离氨基酸等营养成分的含量变化,筛选较优的用于桑叶饲料发酵的复合菌剂配方。经9个配方复合菌剂发酵处理的桑叶饲料与发酵前的桑叶粉比较:粗蛋白含量均极显著增加(P<0.001);17种游离氨基酸含量也有不同程度提高,其中除色氨酸外的7种必需氨基酸含量较显著(P<0.01)或极显著(P<0.001)增加,3种重要氨基酸(谷氨酸、蛋氨酸和赖氨酸)的含量总和极显著增加(P<0.001)。综合检测结果,用3个菌种组合的高菌量和中等菌量复合菌剂发酵处理桑叶饲料,可明显提高桑叶饲料的蛋白质含量和品质,这6个配方的复合菌剂可用于改善桑叶饲料产品的营养品质。
- 胡仁建杨丽群蔡家利周丽黄永福李重阳王鹏向仲怀崔红娟
- 关键词：畜禽饲料桑叶粉复合菌剂营养成分
- 家蚕(Bombyx mori)血细胞研究进展被引量：2
- 2015年
- 家蚕是具有重要经济价值的驯化昆虫,也是完成全基因组测序的具有重要研究价值的鳞翅目模式昆虫。家蚕血液在蚕体的生长发育过程中担负着储存能量、伤口愈合、传递压力、免疫防御等重要生理功能。基于传统的细胞形态学观察方法已经不能对家蚕血细胞的生物学功能进行深入研究。近几年,本实验室通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)标记法和细胞特异性的分子标记等方法,对家蚕血细胞的种类、血细胞的增殖发育机制和血细胞的免疫防御功能等进行了较为系统的研究,本文概述在上述几个研究方向中取得的最新进展,为该领域后续深入研究提供理论依据和技术参考。
- 杨丽群徐曼崔红娟
- 关键词：家蚕特异分子标记细胞免疫
- 家蚕B类清道夫受体BmSCRB8基因的克隆及表达被引量：5
- 2016年
- B类清道夫受体在动脉粥样硬化及其他心血管疾病的形成或抑制,机体免疫防御,凋亡细胞清除等生理过程中起着重要的作用。克隆了家蚕B型清道夫受体家族的一个成员BmSCRB8基因,通过RACE技术获得BmSCRB8的c DNA全长为2 668 bp,其ORF为1 704 bp,编码567个氨基酸,通过在线预测其蛋白分子量为63.87 k Da,等电点为6.06。采用RT-PCR方法得到了BmSCRB8的时空表达谱,结果表明BmSCRB8在家蚕各组织以及血液各时期均有表达,且在脂肪体中表达量最高,变态发育时期表达量较高。原核表达获得BmSCRB8重组蛋白,并经由蛋白纯化、免疫小鼠后制备得到家蚕BmSCRB8多克隆抗体。同时构建了BmSCRB8真核表达载体并转染家蚕胚胎细胞系。免疫荧光及过表达结果显示BmSCRB8主要定位于细胞膜上,Western blotting结果显示免疫小鼠后所得到的抗血清可特异性识别BmSCRB8蛋白。
- 赵羽卒张奎唐梅徐曼李重阳潘光照申利崔红娟杨丽群
- 关键词：家蚕表达谱多克隆抗体亚细胞定位
- 家蚕BmBrat基因的克隆与鉴定被引量：1
- 2016年
- NHL家族蛋白具有调控细胞增殖与分化的功能,在哺育动物中被广泛研究。本文克隆得到家蚕NHL蛋白家族成员BmBrat基因,通过RACE技术获得该基因cDNA全长序列为3 614 bp,其ORF为2 580 bp,编码859个氨基酸,预测其蛋白分子量为94.3 kDa,等电点为6.65。利用RT-PCR技术检测其在五龄3 d家蚕各组织表达情况,结果表明其在幼虫各组织均有表达,包括丝腺、中肠、脂肪体、马氏管等,且卵巢和头部表达量最高;胚胎时期表达谱分析显示其在胚胎发育第4天和第5天有高量表达。经原核表达、蛋白纯化及免疫小鼠后获得家蚕BmBrat多克隆抗体,且Western blotting及免疫荧光检测显示该抗体可以特异检测家蚕BmBrat蛋白;免疫荧光结果表明BmBrat蛋白定位于家蚕血细胞胞质中,为进一步研究BmBrat基因的生物学功能奠定了基础。
- 梁航华高洪燕徐曼谭鹏崔红娟
- 关键词：家蚕表达谱抗体制备亚细胞定位
