国家自然科学基金(30070544)
- 作品数：16 被引量：35H指数：4
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- 马立克氏病病毒pp38基因产物对其上游双向启动子活性的增强作用
- 为了研究鸡马立克氏病病毒(MDV)pp38基因和1．8-kb mRNA 转录子基因间一双向启动子的活性。本研究以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,构建了启动子以 pp38方向转录的重组质粒 pP(pp38)-EG...
- 丁家波崔治中姜世金Sanjay Reddy
- 关键词：马立克氏病病毒PP38基因双向启动子
- 文献传递
- 马立克氏病病毒pp38/pp24聚合体结构及其对pp38基因上游双向启动子活性的影响
- 2008年
- 前期以氯霉素乙酰转移酶(CAT)活性为指标的研究证明了,马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)的pp38和pp24的同时表达可显著增强基因组中pp38基因与1.8kb mRNA转录子之间双向启动子的转录活性.本研究又以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达水平作为pp38基因上游双向启动转录活性的标志,更直观地证明了只有当同一细胞内同时表达pp38和pp24时,该启动子活性才有完整的启动活性.为了证明这两个蛋白能否相结合,分别以单独表达pp38或pp24的重组质粒pcDNA-pp38或pcDNA-pp24及能同时表达这两个基因的重组质粒pBud-pp38-pp24质粒转染鸡胚成纤维细胞(CEF),用pp38特异的单克隆抗体H19对转染细胞的裂解标记物进行免疫沉淀实验.结果表明,H19可沉淀pp38,但pp24只是在pp38同时存在时才被H19沉淀,而在pcDNA-pp24单独转染的处理样品中不能显示pp24的条带.这证明了,pp24是通过与pp38的结合而被共沉淀下来的,显示pp24和pp38在天然状态下可以形成异二聚体或多聚体.上述两个独立的实验结果表明,pp38和pp24是以聚合体的形式结合于该双向启动子发挥作用的.
- 丁家波崔治中姜世金李延鹏
- 关键词：马立克氏病病毒DISEASEVIRUS
- 马立克氏病病毒pp38基因启动子和增强子的部分功能被引量：1
- 2004年
- 通过 PCR技术 ,以马立克氏病病毒 (MDV) RB1B株基因组 DNA为模板 ,扩增了包括 pp38基因及其启动子 -增强子和终止子在内的 2 2 0 0 bp的核酸片段。将该片段用 Sac 和 Sph 酶定向克隆到 p U C18质粒中 ,构建成重组质粒 ;将重组质粒转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,用小鼠抗大肠杆菌表达的 pp38血清作间接免疫荧光试验 ,验证 pp38基因的表达。结果 ,在转染的细胞浆中看到了绿色的荧光 。
- 丁家波姜世金孙淑红王增福张纪元崔治中
- 关键词：马立克氏病病毒PP38基因启动子增强子间接免疫荧光试验
- 区分马立克氏病病毒疫苗株CVI988与其他毒株的PCR方法的建立及应用被引量：7
- 2007年
- 利用马立克氏病病毒(MDV)疫苗毒CVI988株pp38基因上游启动子区域连续5个碱基的缺失(5′-AGCCG-3′),设计2对特异性引物,建立了能区分MDVCVI988株和MDV其他毒株的PCR诊断方法。该方法对8株MDV毒株(弱毒疫苗株CVI988和814,强毒参考株GA,超强毒参考株RB1B、Md5和Md11,特超强毒参考株648A及1个中国野毒株J-E)的PCR鉴定结果均与预期吻合。以16只疑为MDV感染鸡的脏器组织核酸提取物为模板,用所建立的PCR方法,能从其中7只鸡样品中扩增出特异性条带,其检测结果与细胞分离培养和单克隆抗体的检测结果一致。试验证实,本研究所建立的PCR诊断方法具有良好的特异性和敏感性。
- 丁家波姜世金朱鸿飞崔治中
- 关键词：马立克氏病病毒
- Ⅰ型马立克氏病病毒Md11株pp24基因的真核表达
- 2005年
- 通过PCR方法扩增MDV Md11株的pp24基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/zeo(+)中。阳性克隆鉴定后,在脂质体作用下转染CEF细胞,用间接免疫荧光试验检测,结果证明阳性克隆在CEF细胞中表达了pp24蛋白。
- 姜世金杨汉春崔治中
- 关键词：MDV转染IFA
- 马立克氏病病毒pp38基因和1.8kb转录子之间双向启动子的特性研究被引量：1
- 2005年
- 从马立克氏病病毒(MDV)基因组DNA复制原点区某一点,将介于MDVpp38基因和1 8kb转录子之间的双向启动子分割成两个单方向的启动子。以pp38为报告基因,pUC18质粒为载体,构建了含不同方向完整启动子序列的pProfpp38和pProrpp38质粒,以及含分割后单方向启动子序列的pdProfpp38和pdProrpp38质粒。4种质粒分别转染鸡胚成纤维细胞(Chickenembryofibroblast,CEF)后,均能检测到pp38基因的表达。进一步以氯霉素乙酰转移酶(Chloramphenicolacetyltransferase,CAT)为报告基因,构建了含不同方向完整双向启动子的pProfCAT和pProrCAT质粒,以及含分割后单方向启动子序列的pdProfCAT和pdProrCAT质粒。通过转染试验,定量分析了完整启动子和分割后启动子在两个方向上的启动活性。实验结果表明,分割后的启动子在两个方向上的启动活性均比相应方向上完整启动子的活性低,其中1 8kb转录子方向上的活性下降了4
- 丁家波崔治中姜世金孙爱军孙淑红
- 关键词：马立克氏病病毒PP38基因双向启动子
- 马立克氏病病毒pp38基因真核表达质粒的构建及其在鸡胚成纤维细胞中的表达被引量：4
- 2004年
- 通过 PCR方法扩增马立克氏病病毒 (Marek′s disease virus,MDV) Md11株的 pp38基因 ,并将其克隆到真核表达载体 pc DNA3.1/ zeo(+)中。阳性克隆鉴定后 ,在脂质体作用下转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,通过间接免疫荧光试验 (IFA)检测到了 pp38在 CEF中的表达。
- 姜世金丁家波张志孙淑红王玉杨汉春崔治中
- 关键词：马立克氏病病毒PP38基因真核表达质粒鸡胚成纤维细胞
- 马立克氏病病毒38kd磷蛋白H19-和T65-抗原表位分析及鸡对该抗原表位点突变病毒的免疫反应被引量：4
- 2003年
- 对马立克氏病病毒(MDV)38 kd磷蛋白(pp38)基因的编码序列的测定表明,所有在间接荧光抗体试验(IFA)中与单抗H19反应的10个不同致病型MDV毒株,在第320位碱基为“A”,相应第107位氨基酸是谷氨酰胺,而在IFA中不与单抗H19反应的疫苗株CVI988相应位点分别是“G”和精氨酸。另一方面,在IFA中能与另一个单抗T65反应的毒株,在第326位碱基是“G”,第109位氨基酸是甘氨酸,而其他不与单抗T65反应的毒株,相应位点碱基和氨基酸分别是“A”和谷氨酸。通过比较CVI988及其在pp38基因的第320和326位的单一或双碱基点突变病毒CVI988/rpp38(AG)和CVI/rpp38(AA)对H19和T65的反应性,证明了在第107和109位的谷氨酰胺和甘氨酸分别对pp38上的H19和T65两个抗原表位起关键作用。比较CVI988及其点突变株CVI/rpp38(AG)在SPF鸡诱发的抗体反应表明,接种了点突变株CVI/rpp38(AG)鸡的抗体反应出现得比天然株抗体反应明显延缓且显著降低。进一步对MDV不同抗原成分的相应抗体水平比较表明,该功能区内可能存在着第3个特异性抗原表位,它决定于CVI988株pp38第107位的精氨酸,而且天然CVI988株及其点突变株诱发的抗MDV抗体水平间的显著差异可能正与这个抗原表位相关。
- 崔治中张志秦爱建L.F.Lee
- 关键词：马立克氏病病毒H19抗原表位点突变免疫反应
- 马立克氏病病毒pp38基因启动子和增强子的克隆和序列分析被引量：4
- 2004年
- 参考GeneBank发表的马立克氏病病毒(MDV)国际标准强毒株GA的基因序列,设计合成一对引物,分别以RB1B,814,GD2(广东分离株),J 1 E(北京分离株),Md11,Md5,CVI988等不同毒株的MDV基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得了预期大小的PCR产物。该产物经pGEM T easy克隆后测序,将所得序列进行比较分析。结果发现:不同毒株间pp38基因的启动子和增强子序列间有缺失突变,序列的同源性大于95 9%,其中大多数的突变发生在MDV复制的原点附近。
- 丁家波赵文明姜世金张纪元王增福崔治中
- 关键词：马立克氏病病毒PP38基因启动子增强子基因克隆
- Ⅰ型马立克氏病病毒pp38和pp24基因的真核共表达被引量：2
- 2005年
- 本研究将Ⅰ型超强毒MDVMd11株的pp38和pp24完整基因分别克隆到真核双表达载体pBudCE4.1中,在脂质体作用下将阳性克隆DNA转染CEF,通过间接免疫荧光试验(IFA)用单克隆抗体H19和鼠抗GST-pp24血清分别检测到了pp38和pp24基因的单独表达。然后将MDVMd11株的pp38和pp24完整基因同时克隆到载体pBudCE4.1中,在脂质体作用下将阳性克隆DNA转染CEF,通过IFA检测和用抗pp24多克隆血清进行West-ern-blotting试验检测到了PP38和PP24磷蛋白的共表达。
- 姜世金丁家波孟珊珊崔治中杨汉春
- 关键词：马立克氏病病毒共表达
